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纤维素酶在饲料原料中的最适添加量配方

摘要

本发明公开了一种纤维素酶在饲料原料中的最适添加量配方。本发明公开的一种饲料,由饲料原料和纤维素酶组成。本发明的选择纤维素酶在饲料原料中最适添加量的方法和得到的最适添加量配方在饲料酶制剂的添加中具有指导意义。

著录项

  • 公开/公告号CN103518976A

    专利类型发明专利

  • 公开/公告日2014-01-22

    原文格式PDF

  • 申请/专利权人 天津博菲德科技有限公司;

    申请/专利号CN201310484374.0

  • 申请日2013-10-16

  • 分类号A23K1/165(20060101);A23K1/14(20060101);

  • 代理机构11245 北京纪凯知识产权代理有限公司;

  • 代理人关畅

  • 地址 301906 天津市蓟县天津上仓工业园

  • 入库时间 2024-02-19 20:56:53

法律信息

  • 法律状态公告日

    法律状态信息

    法律状态

  • 2018-08-14

    专利权的转移 IPC(主分类):A23K1/165 登记生效日:20180726 变更前: 变更后: 申请日:20131016

    专利申请权、专利权的转移

  • 2017-05-03

    专利权的转移 IPC(主分类):A23K1/165 登记生效日:20170410 变更前: 变更后: 申请日:20131016

    专利申请权、专利权的转移

  • 2014-11-26

    授权

    授权

  • 2014-02-26

    实质审查的生效 IPC(主分类):A23K1/165 申请日:20131016

    实质审查的生效

  • 2014-01-22

    公开

    公开

说明书

技术领域

本发明涉及一种纤维素酶在饲料原料中的最适添加量配方。

背景技术

新陈代谢是生命活动的基础,而构成新陈代谢的许多复杂而有规律的物质变化和 能量变化,都是在酶的催化下进行的,可以说,没有酶的参与,生命活动一刻也不能 进行。

20世纪20年代开始有报道,在饲粮中添加酶制剂可提高动物生长速度和饲料转 化效率,但是直到20世纪80年代人们才开始懂得如何在饲料工业中发挥酶的力量。 饲用酶制剂一般来源于微生物,由木霉、曲霉、酵母和真菌等微生物发酵生产,它是 集动物营养学、饲料学、动物生理生化、微生物发酵与酶工程、基因工程等诸学科于 一体的应用于现代饲料工业中的一种绿色饲料添加剂,对提高饲料的转化率、拓宽饲 料原料的应用范围和比例、节约饲料资源、降低饲料成本和养殖成本,改善饲养环境 等起着重要作用。从1984年欧洲在全球首次将酶制剂商品化应用于大麦日粮上开始, 到20世纪90年代中期,酶制剂在饲料工业中的应用得到了普遍认可。90年代初,我 国开始自行生产销售饲用酶制剂,2000年我国饲用酶制剂的销售量已达到6000t。 1998~2008年,动物饲料酶制剂在全球市场每年都以平均13%的速度增长。尤其是2008 年后,由于无机磷源的成本高涨,促进了植酸酶在饲料中的普及应用,大大提高了人 们对酶制剂的认识和接收程度,也推动了其它酶制剂在饲料工业和养殖领域的应用。

在动物生产上复合酶制剂的作用显然要大于单体酶,但单体酶作用效果的研究毫 无疑问将直接对复合酶的研究起指导作用,复合酶制剂在生产上的应用效果基本上已 经得到肯定,但为进一步提高其性价比,更清楚地了解单体酶的作用机理和作用效果 是很有必要的。不同的单酶都有其相对应的降解底物,酶的降解作用具有高度的选择 性和专一性,目前用在饲料工业上的单酶制剂约有20多种。

饲用单酶制剂可以根据是否在动物体内大量分泌而分为外源酶和内源酶两种,外 源酶主要包括植酸酶和非淀粉多糖酶,其中非淀粉多糖酶又包括木聚糖酶、葡聚糖酶、 甘露聚糖酶、果胶酶、纤维素酶等,而内源酶则主要包括蛋白酶、淀粉酶、糖化酶和 脂肪酶等。

纤维素酶(Cellulase)是由多种水解酶组成的一个复杂酶系,其主要由葡聚糖 内切酶、葡聚糖外切酶以及β-葡萄糖苷酶等组成,这类酶能将纤维二糖、三糖和纤 维糊精等水解成单个葡萄糖。由于纤维素存在天然的特异性,纤维素酶必须用不同酶 系协同作用才能完全将其分解,其中内切葡萄糖酶进入纤维素的非结晶区,形成外切 纤维素酶所需的游离末端,然后外切纤维素酶从多糖链的非还原末端切下纤维二糖单 位被β-葡萄糖苷酶水解形成葡萄糖。

纤维素酶作为饲料添加剂使用,其功能主要有以下几点:①摧毁植物细胞壁,促 进营养物质吸收。纤维素酶可在木聚糖酶、半乳糖苷酶等半纤维素酶的协同作用下破 坏植物细胞壁,使细胞内容物释放出来,以利于动物进一步降解吸收,同时也增加了 非淀粉多糖的消化,进而改善高纤维饲料原料的利用率;②补充动物内源消化酶的不 足,剌激动物内源酶的分泌。纤维素酶可以改善动物消化道酶系的组成、酶分泌量及 活性,尤其对幼龄动物及病态和应激状态下的成年畜禽;③改善动物胃肠道中微生态 环境,促进小肠对营养物质的消化吸收。纤维素、半纤维素和果胶等会增加动物胃肠 道内溶物的粘度,阻碍动物体内消化酶与营养物质的接触,导致动物对饲料消化吸收 利用率降低,黏稠的消化道食糜还会引起有害微生物滋生。而纤维素酶可降低食糜黏 度,加强动物胃肠道内容物流动性,降低有害微生物在动物肠道附着可能性。纤维素 酶还可促进肠道有益微生物生长,提高微生物对饲料的分解;纤维素酶同时具有维持 动物小肠绒毛形态完整,提高营养物质吸收率的功能。

要在饲料中发挥酶制剂的最佳效果,必须有精确的应用体系。在一定日粮中如何 精确的使用酶制剂,一是要考虑原料中酶的底物的种类,针对性地添加;二是要考虑 其含量,确保有足够的底物与酶作用才能发挥效果;三是要根据动物的特异性来设计。 目前,对于饲用酶制剂在饲料中的添加量研究,多以动物养殖试验为主,市场上对于 饲用酶制剂的添加量,主要通过在动物试验的基础上再结合实际生产成本确定,很少 有人从酶制剂作用关系入手,进行系统的研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种纤维素酶在饲料原料中的最适添加量配方。

本发明提供的一种确定纤维素酶在饲料原料中最适添加量的方法,包括如下步 骤:

(1)得出每千克饲料原料中纤维素的量;

(2)测量纤维素酶的酶活,所述纤维素酶的酶活定义为在37℃ pH为5.5的条 件下,每分钟内从过量底物中降解释放1μmol还原糖所需的酶量定义为1个酶活力单 位,1U;

所述底物为步骤(1)所述的饲料原料;

(3)根据步骤(2)所得的酶活,及下述公式,计算出每克步骤(1)中所述饲 料原料所需纤维素酶的量,即为理论添加量;

Q=(C×1 U×1min)/(1μmol×M×120min)

式中:

Q——酶的理论添加量,U/g;

C——每千克所述饲料原料中纤维素的量,g/kg;

M——葡萄糖的摩尔质量,180g/mol;

120min——酶的作用时间;

1U,1min,1μmol——酶活定义参数;

(4)以步骤(3)所得酶的理论添加量为基数,记作Q;n为Q的倍数,以n×Q 组成该酶的梯度添加量,其中n为1/2、1/4、1/6、1/8、1/10、1/20、1、2、4、6、 8、10、20;

所述梯度添加量是针对饲料原料来说的,即每克饲料原料中应添加多少U的酶;

(5)进行体外酶解实验,体外酶解实验的体系如下:

1)将2g饲料原料加入15.0mL pH3.0的0.2mol/L乙酸-乙酸钠缓冲溶液中,再 加入0.5mL浓度为70mg/mL的胃蛋白酶溶液,混匀,得食糜液;胃蛋白酶溶液中溶 剂为0.01mol/L盐酸水溶液;

2)用1.0mol/L盐酸水溶液调节食糜液的pH值至3.0;

3)将食糜液混合均匀后置于40℃振荡消化,消化75分钟;

4)用1.0mol/L氢氧化钠水溶液调整步骤3)所得消化液的pH值至6.3,然后加 入50mg胰酶;

5)实验分两组,第一组称作加酶组,即向步骤4)所得体系中加入纤维素酶,所 述酶的添加量为步骤(4)所设的梯度添加量;第二组称作不加酶组,即向步骤4)所 得体系中加入2.0mL 0.2mol/L pH6.3的乙酸-乙酸钠缓冲溶液;然后,第一组和第二 组均置于40℃振荡消化,消化时间为120min;

(6)还原糖测定,分别检测加酶组和不加酶组的还原糖的浓度,分别记作Ye和 Y0,单位为mg/mL;

(7)按照如下公式计算纤维素酶酶解产生的还原糖占饲料原料的质量百分含量:

ΔM=(((Ye-Y0)×D×V)/m)×100

ΔM——酶解产生的还原糖占所加饲料原料的质量百分含量,%;

D——测定液稀释倍数,等于1mL除以还原糖测定时离心上清液吸取量;

V——消化反应体系总体积,27mL;

m——消化反应称取饲料原料样品的质量,2000mg;

100——百分比换算系数;

(8)以n为横坐标,以对应的ΔM为纵坐标作图,得到曲线的拐点,并取拐点 前两组和拐点后两组的n值;

(9)将步骤(8)得到的n对应的组之间进行ΔM差异分析,按照步骤(8)的n 由小到大的顺序,得到与步骤(8)的n最小的一组有显著差异的第一组,纤维素酶在 该组饲料中的添加量就是纤维素酶在所述饲料原料中的最适添加量;

所述酶为纤维素酶;

所述还原糖为葡萄糖。

上述方法中,所述还原糖测定步骤如下:

(1)取出透析管,将消化液离心5min(5000r/min),取一定量上清液,用水 定容至2.0mL,加3.0mL DNS煮沸显色,以水为空白调零,540nm测量加酶组和不 加酶组的吸光值,分别记作Xe和X0

(2)用DNS法绘制葡萄糖标准曲线,以葡萄糖含量(mg)为Y轴、吸光度OD值为 X轴,绘制标准曲线,得到公式Y=aX+b;

(3)分别将Xe和X0代入(2)的公式,计算加酶组和不加酶组的还原糖的浓度, 分别记作Ye和Y0,单位换算为mg/mL;

所述还原糖为葡萄糖。

上述任一所述的方法中,所述饲料原料为玉米、豆粕、小麦、麸皮、米糠粕、菜 粕、棉粕和DDGS中任意一种。

一种饲料也属于本发明的保护范围,该饲料由饲料原料和纤维素酶组成。

上述饲料中,所述饲料原料为玉米、豆粕、小麦、麸皮、米糠粕、菜粕、棉粕和 DDGS中任意一种。

上述任一所述的饲料中,所述玉米与所述纤维素酶的比例为1g:4.98U;所述豆 粕与所述纤维素酶的比例为1g:28.62U;所述小麦与所述纤维素酶的比例为1g:8.88U; 所述麸皮与所述纤维素酶的比例为1g:19.44U;所述米糠粕与所述纤维素酶的比例为 1g:22.8U;所述菜粕与所述纤维素酶的比例为1g:27.78U;所述棉粕与所述纤维素 酶的比例为1g:44.48U;所述DDGS与所述纤维素酶的比例为1g:9.72U;

所述U的定义为:纤维素酶在37℃、pH为5.5的条件下,每分钟从过量底物中降 解释放1μmol还原糖所需的酶量定义为1U;

所述底物为所述饲料原料;

所述还原糖为葡萄糖。

与理论添加量对比表明,各饲料原料对纤维素酶的需要量都高于理论添加量,要 想完全发挥酶制剂在饲料中的酶解效果,必须添加足量的酶。本发明的选择纤维素酶 在饲料原料中最适添加量的方法和得到的最适添加量配方在饲料酶制剂的添加中具有 指导意义。

附图说明

图1为不同浓度的纤维素酶酶解不同饲料原料生成产物量的曲线图。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。

纤维素酶购自北京挑战生物技术有限公司,产品目录号为YL-156。

DDGS(酒糟蛋白饲料)购自吉林省新天龙实业股份有限公司。

胃蛋白酶购自Sigma,货号为P7000。

胰蛋白酶购自Sigma,货号为P7545。

氢氧化钠溶液(200g/L)按照如下方法配制:称取氢氧化鈉20.0g,加水溶解, 定容至100ml。

乙酸溶液(0.1mol/L)按照如下方法配制:吸取冰乙酸0.60ml,加水溶解,定 容至100ml。

乙酸钠溶液(0.1mol/L)按照如下方法配制:称取三水乙酸钠1.36g,加水溶 解,定容至100ml。

乙酸-乙酸钠缓冲溶液(0.1mol/L,pH5.5)按照如下方法配制:称取三水乙酸钠 23.14g,加入冰乙酸1.35ml,再加水溶解,定容至2000ml,测定溶液的pH值,如 果pH值偏离5.5,再用乙酸溶液(0.1mol/L)或乙酸钠溶液(0.1mol/L)调节至pH5.5。

10.0mg/ml葡糖糖溶液按照如下方法配制:

称取无水葡萄糖1.000g,加乙酸-乙酸钠缓冲液(0.1mol/L,pH5.5)溶解,定 容至100ml。

羧甲基纤维素钠购自Sigma,货号为C5678。

8.0g/l羧甲基纤维素钠溶液按照如下方法配制:

称取羧甲基纤维素钠0.80g,加入80ml乙酸-乙酸钠缓冲溶液(0.1mol/L, pH5.5)。磁力搅拌,同时缓慢加热,直至羧甲基纤维素钠完全溶解(注:在搅拌加热 的过程中可以补加适量的缓冲液,但是溶液的总体积不能超过100ml)。然后停止加 热,继续搅拌30min,用乙酸-乙酸钠缓冲溶液(0.1mol/L,pH5.5)定容至100ml。 羧甲基纤维素钠溶液能立即使用,使用前适当摇匀。4℃避光保存,有效期为3天。

DNS试剂按照如下方法配制:称取3,5-二硝基水杨酸3.15g(分析纯),加水500ml, 搅拌5s,水浴至45℃。然后逐步加入100ml氢氧化钠溶液(200g/L),同时不断搅 拌,直到溶液清澈透明(注意:在加入氢氧化钠过程中,溶液温度不要超过48℃)。 再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0g、苯酚2.50g和无水亚硫酸钠2.50g。继续45℃ 水浴加热,同时补加水300ml,不断搅拌,直到加入的物质完全溶解。停止加热,冷 却至室温后,用水定容至1000ml。用烧结玻璃过滤器过滤。取滤液储存在棕色瓶中, 避光保存。室温下存放7天后可以使用,有效期6个月。

下述实施例中纤维素酶活力的测定方法如下:

(一)标准曲线的绘制

吸取乙酸—乙酸钠缓冲溶液(0.1mol/L,pH5.5)4.0mL,加入DNS试剂5.0mL, 沸水浴加热5min。用自来水冷却至室温,用水定容至25.0mL,制成标准空白样。

分别吸取葡萄糖溶液(10.0mg/ml)0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60 和0.70ml,分别用乙酸-乙酸钠缓冲溶液(0.1mol/L,pH5.5)定容至10ml,配制 成浓度为0.10mg/ml-0.70mg/ml葡萄糖标准溶液。

分别吸取上述浓度系列的葡萄糖标准溶液各2.00ml(做两个平行),分别加入到 刻度试管中,再分别加入2ml乙酸-乙酸钠缓冲溶液(0.1mol/L,pH5.5)和5ml DNS 试剂。电磁振荡3s,沸水浴加热5min。然后用自来水冷却到室温,再用水定容至25 mL。以标准空白样调零,在540nm处测定吸光度OD值。

以葡萄糖浓度mg为Y轴、吸光度OD值为X轴,绘制标准曲线。每次新配制DNS 试剂均需要重新绘制标准曲线。

(二)酶活的测定

1、吸取10.0mL羧甲基纤维素钠溶液(8.0g/l),37℃平衡10min。

2、吸取10.0mL经过适当稀释的酶液,37℃平衡10min。

3、吸取2.00mL经过适当稀释的酶液(已经过37℃平衡),加入到刻度试管中, 再加入5mL DNS试剂,电磁振荡3s。然后加入2.0mL羧甲基纤维素钠溶液(8.0g/l), 37℃保温30min,沸水浴加热5min。用自来水冷却至室温,加水定容至25mL,电 磁振荡3s。以标准空白样调零,检测在540nm处吸光度,记作AB

4、吸取2.00mL经过适当稀释的酶液(已经过37℃平衡),加入到刻度试管中, 再加入2.0mL羧甲基纤维素钠(8.0g/l)(已经过37℃平衡),电磁振荡3s,37℃ 精确保温30min。加入5.0mL DNS试剂,电磁振荡3s,以终止酶解反应。沸水浴加 热5min,用自来水冷却至室温,加水定容至25mL,电磁振荡3s。以标准空白样调 零,检测在540nm处吸光度,记作AE

5、根据各试样的吸光度值以及步骤(一)得到的标准曲线回归方程,计算各试样 中的还原糖(葡萄糖)的量。

按照公式1和2计算试样在对应温度及pH条件下的酶活力。

X=XD·Df    (公式2)

式中:

XD—试样稀释液的纤维素酶活力,U/ml;

AE—酶反应液的吸光度;

AB—酶空白样的吸光度;

K—标准曲线的斜率;

CO—标准曲线的截距;

M—葡萄糖的摩尔质量,M(C6H12O6)=180.2g/mol;

t—酶解反应时间,30min;

1000—转化因子,1mmol=1000μmol。

XD值应在0.04—0.08U/ml之间。如果不在这个范围内,应重新选择酶液的稀释 度,再进行分析测定。

X—试样纤维素酶的活力,U/g或U/ml;

Df—试样的总稀释倍数。

同一试样两个平行测定值的相对误差不超过3.0%,二者的平均值为最终的酶活力 测定值(保留三位有效数字)。

实施例1、纤维素酶酶活的测定

一、待测酶溶液的制备

固体酶样:将固体酶样充分粉碎,然后过60目筛(孔径为0.25mm),称取适量 的样品,精确至0.001g。加入40ml乙酸-乙酸钠缓冲溶液(0.1mol/L,pH5.5), 磁力搅拌或恒温振荡(250r/m)30min,再用乙酸-乙酸钠缓冲溶液(0.1mol/L,pH5.5) 定容至100ml。在4℃条件下避光保存24h。离心机离心3min(4000r/m)。取上清液, 再用乙酸-乙酸钠缓冲溶液(0.1mol/L,pH5.5)做二次稀释(稀释后的待测酶液中纤 维素酶活力最好能控制在0.04—0.08U/ml之间)。

二、酶活力测定

纤维素酶活力单位定义:在37℃、pH值为5.5的条件下,每分钟从浓度为4mg/ml 的羧甲基纤维素钠溶液中降解释放1μmol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位, 1U。

三、酶活测定

将步骤一的待测纤维素酶样进行纤维素酶活力的测定,测得纤维素酶的酶活为 11,022U/g。

实施例2、纤维素酶对不同饲料原料的理论添加量

一、纤维素酶活力单位定义:在37℃、pH为5.5的条件下,每分钟内从过量底物 中降解释放1μmol还原糖所需的酶量定义为1个酶活力单位,1U。

二、不同饲料原料中抗营养物质纤维素的含量如表1所示。

表1 不同饲料原料中抗营养物质纤维素的含量(g/kg)

饲料原料中酶理论添加量的推导以酶活定义为基础,设定酶制剂酶解作用得到发 挥的鸡小肠段作用时间为120分钟,则根据酶活定义(1U=1μmol/1min),某种饲料原 料中纤维素酶的理论添加量计算公式如公式3所示。

Q=(C×1 U×1min)/(1μmol×M×120min)    (公式3)

式中:

Q——酶的理论添加量,U/g;

C——表1中每千克该饲料原料中底物纤维素的量,g/kg;

M——葡萄糖的摩尔质量,180g/mol;

120min——酶制剂在动物体内理论作用时间;

1U,1min,1μmol——酶活定义参数。

不同饲料原料使用纤维素酶制剂的理论添加量计算结果如表2所示。

表2 不同饲料原料使用β-甘露聚糖酶制剂的理论添加量计算结果

实施例3、纤维素酶酶解单原料添加量优化

一、浓度梯度的设定

以实施例2中表2得出的不同饲料原料中纤维素酶理论添加量为基数,以2递增 倍数扩大或1除以2的递增倍数缩小添加量,组成该酶的梯度添加量,且设定一个极 大(20倍)或极小(1/20倍)添加量来评估超常添加量下酶解情况,其中酶添加量梯 度最大值不超过理论添加量的10倍(极大值除外),最小值不超过理论添加量的1/10 倍(极小值除外)。

二、添加量优化实验

在步骤一设定的不同梯度添加量的条件下,将纤维素酶分别与实施例2中表2所 列的8种不同的饲料原料进行体外酶解反应处理。

体外酶解反应处理的步骤如下:

(一)准确称取2.00g过60目筛的饲料样品,放入50mL具塞三角瓶中。

(二)向三角瓶中加入pH3.0的0.2mol/L乙酸-乙酸钠缓冲溶液15.0mL,再加 入0.5mL浓度为70mg/mL的0.01mol/L盐酸胃蛋白酶溶液,小心混合均匀后静止 10min,得食糜液。

(三)用1.0mol/L盐酸调食糜液的pH值至3.0,用2.0mL pH3.0值的乙酸-乙 酸钠缓冲溶液冲洗酸度计上的残渣至具塞三角瓶中。

(四)将食糜液混合均匀后放入40℃恒温水浴锅或摇床内消化,不断振荡(150 r/min)。放入5min后开始计时,消化75min后取出具塞三角瓶。

(五)用1.0mol/L氢氧化钠调整食糜液的pH值至6.3,用2.0mL 0.2mol/L pH 值6.3的乙酸-乙酸钠缓冲溶液冲洗酸度计上的残渣至具塞三角瓶中,然后加入50mg 的胰酶。

(六)一组加入2.0mL已经稀释好的特定浓度的纤维素酶(使纤维素酶的添加量 与步骤一中的梯度添加量一致),另一组加2.0mL 0.2mol/L pH值6.3的乙酸-乙酸钠 缓冲溶液。放入40℃恒温摇床上消化,不断振荡(150次/min)。放入10min后开始 计时,消化120min后取出三角瓶。

(七)取出透析管,将消化液离心5min(5000r/min),取一定量上清液,用水定 容至2.0mL,加3.0mL DNS煮沸显色,以水为空白调零,540nm测量吸光值,加酶 组和不加酶组的吸光值,分别记作Xe和X0

绘制纤维素酶活力标准曲线,具体操作方法同纤维素酶活力测定方法的步骤(一)。 以葡萄糖浓度mg为Y轴、吸光度OD值为X轴,绘制标准曲线,得到公式Y=aX+b。

三、酶解产物含量计算

酶解产物含量是指酶解产生的还原糖葡萄糖占所加饲料原料的质量百分含量。

根据步骤二得到的标准曲线以及各组的吸光度计算纤维素酶对不同饲料原料的酶 解产物含量,计算公式为:

ΔM=Me–M0    (公式4)

M=((Y×D×V)/m)×100    (公式5)

Y=aX+b    (公式6)

公式4中:

ΔM——酶解产生的还原糖葡萄糖占所加饲料原料的质量百分含量,%;

Me——加酶后反应体系中还原糖葡萄糖占所加饲料原料的质量百分含量,%;

M0——未加酶时反应体系中还原糖葡萄糖占所加饲料原料的质量百分含量,%;

其中M的计算如公式5所示。

公式5中:

M——还原糖葡萄糖占所加饲料原料的质量百分含量,%;

Y——根据标准曲线方程计算出的测定液中的还原糖葡萄糖的浓度,mg/mL;

D——测定液稀释倍数,等于1mL除以测定时离心上清液吸取量;

V——消化反应体系总体积,27mL;

m——消化反应称取饲料原料样品质量,2000mg;

100——百分比换算系数。

公式6中:

X——测定的吸光值;

a,b——标准曲线方程系数。

结合公式4和公式5可计算得到公式7:

ΔM=(((Ye-Y0)×D×V)/m)×100    (公式7)

结合公式7和公式6可计算得到公式8:

ΔM=((a×(Xe-X0)×D×V)/m)×100    (公式8)

纤维素酶对不同饲料原料进行酶解生成的还原糖葡萄糖占饲料原料的质量百分含 量如表3所示。

表3 不同浓度纤维素酶酶解不同饲料生成的还原糖葡萄糖占饲料原料的质量百分 含量

同行肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

四、根据表3的结果,结合实施例2中的表1,计算纤维素酶酶解不同饲料原料 的生成的还原糖葡萄糖占原料中总纤维素的质量百分含量,结果如表4所示

表4 不同浓度纤维素酶酶解不同饲料原料生成的还原糖葡萄糖占原料中总纤维素 的质量百分含量

五、对表3中的结果进行作图,以优化梯度倍数为横坐标,产物含量为纵坐标作 图,并添加对数趋势线、公式和R平方值,结果如图1所示。

六、根据图1的拐点,确定位于拐点附近的组(拐点前两组和拐点后两组)。对拐 点附近的组进行产物含量(即反应生成的还原糖葡萄糖占饲料原料的质量百分含量) 差异性分析,按照附近组中酶添加量从低到高的顺序,得到与其中酶最低添加量的组 有显著差异的第一组,纤维素酶在饲料原料中的最佳添加量就是这一组的添加量。

根据纤维素酶在不同饲料原料中的最佳添加量,同时结合纤维素酶酶解产物葡萄 糖占原料中总纤维素的质量百分含量得到表5。

表5 不同饲料原料中纤维素酶最佳添加量及其酶解产物葡萄糖占原料中总纤维素的质 量百分含量

根据试验结果综合分析,纤维素酶对各种原料都有较好的酶解效果,随着添加梯 度的变化,酶解产物的量都有较大的变化,但总体酶解能力并不是很强。酶解效果最 好的是小麦及其副产物麸皮,其次是玉米和其副产物DDGS,再者是几种粕类。

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