一种定向诱导提高六道木苗木耐盐性的方法

摘要

本发明公开了一种定向诱导提高六道木苗木耐盐性的方法，包括以下步骤：（1）材料灭菌、（2）不定芽的诱导、（3）芽的分化和继代培养、（4）生根培养、（5）炼苗、（6）移苗、（7）苗期管理。本发明利用组织培养和容器育苗手段，在分化和增值培养基、生根培养基以及移苗后苗木培养的基质中逐步添加不同浓度的NaCl，使苗木的耐盐性从0.2%左右提高到0.6%左右（一年生苗基质中NaCl含量0.4-0.5%能正常生长、二年生苗基质中NaCl含量0.5-0.6%能正常生长），在盐碱地的定植成活率提高一倍以上。

说明书

技术领域

本发明涉及到园林树木培育技术领域，具体指利用现代育苗技术手段 获得六道木苗木提高耐盐碱性的方法。

背景技术

六道木原产我国，为忍冬科六道木属植物,落叶灌木，是我国最著名 的彩叶观赏树种。六道木有较强的适应性，耐低温，耐土壤瘠薄，有一定 的耐盐碱性和耐干旱能力。六道木为我国东南沿海重要的园林绿化树种之 一，但东南沿海地处亚热带，年降雨量大，通过雨水淋盐逐渐淡化盐渍化 土壤，盐分组成以氯化物为主，含盐量为0.1%-0.8%。

发明内容

六道木虽具一定的耐盐性，本发明人研究团队多年的研究证实，土壤 含盐量在0.2%以上六道木生长受阻，0.3%是它生长的阀值。六道木的繁殖 一般采取扦插、实生和组织培养等方法，试验表明，如果采用扦插和实生 繁殖，在育苗基质中逐步增加的含盐量，也可以提高苗木的耐盐性，但通 过组织培养和快速繁殖的手段，从组织培养的基质到育苗的基质逐渐增加 含盐量，所生产的苗木耐盐性高于扦插和实生繁殖所获得的苗木。本发明 基于植物逐步驯化的理论，从组织培养芽的分化阶段到苗木阶段，通过人 工干预驯化提高六道木的耐盐性。

本发明所要解决的技术问题是针对现有我国东南沿海海涂海滩地含 盐量高、六道木苗木定植成活率低的状况，提供一种定向诱导提高六道木 苗木耐盐性的方法。本发明利用组织培养和容器育苗手段，在分化和增值 培养基、生根培养基以及移苗后苗木培养的基质中逐步添加不同浓度的 NaCl，使苗木的耐盐性从0.2%左右提高到0.6%左右（一年生苗基质中NaCl 含量0.4-0.5%能正常生长、二年生苗基质中NaCl含量0.5-0.6%能正常生 长），在盐碱地的定植成活率提高一倍以上。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：该方法包括六道木芽 的诱导、分化增殖培养、根系的诱导和苗木的培养等，

（1）材料灭菌：取六道木幼嫩枝条，剪成4-5cm带腋芽茎段，先在 洗涤液中浸泡5-6分钟，再用水冲洗2-3小时后剪去展开的叶片，剪成 1.5cm的带腋芽茎段；在超净工作台上用75%酒精溶液浸20秒，然后转 入质量分数为0.1%的升汞溶液中灭菌8-10分钟，再用无菌水冲洗5-8 次;

（2）不定芽的诱导：将经所述步骤（1）灭菌后的茎段接到1号培养 基上培养40-50天;

其中，所述1号培养基在MS培养基基础上添加质量分数为0.1%的 NaCl；

（3）芽的分化和继代培养：选择芽分化良好的茎段接到2号培养基 上，选择生长良好的芽转接同样的所述2号培养基上继代培养一次，然后 转接到3号培养基上培养2代；几代培养后出现丛生芽；

其中，所述2号培养基在MS培养基基础上添加质量分数为0.1%的 NaCl；所述3号培养基在MS培养基基础上添加质量分数为0.2%的NaCl；

（4）生根培养：选取生长良好的丛生芽分成单株，转至4号培养基 上诱导生根；培养15-20天，根系5根以上，苗高4-6cm可以移苗；所述 4号培养基在1/2MS培养基的基础上添加质量分数为0.3%的NaCl；

（5）炼苗：将生长良好的生根苗的瓶口打开，在室温下开瓶炼苗2-3 天，将试管苗取出，用清水冲洗掉根部培养基后，移植到设有海沙的沙床 上进行炼苗；所述海沙含盐量0.4%；炼苗时行株距为10×10cm；新根长出 待抽出新叶后移栽到容器内进行培育；培育期间使海沙中的含盐量保持恒 定为0.4%；

（6）移苗：1年生六道木容器基质配比按照体积比为泥炭：海沙=7:3， 缓释复合肥1kg·m^-3；2年生六道木容器基质配比按照体积比为泥炭：海沙 =6:4，缓释复合肥2kg.m^-3；配制基质时添加NaCl，一年生苗基质中的NaCl 含量为0.5%，二年生苗基质中的NaCl含量为0.6%；

（7）苗期管理：容器苗置于连栋大棚内，连栋大棚内的温度保持在 20-25℃，土壤相对湿度保持在65-75%。

所述步骤（2）中，所述1号培养基还添加以下物质：0.8-1.0mg/L的 激动素、0.08-0.12mg/L的吲哚丁酸、以及质量分数为3%的蔗糖。

所述步骤（3）中，所述含2号培养基还添加以下物质：0.4-0.6mg/L 的激动素、0.08-0.12mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.05mg/L的萘乙酸、以及 质量分数为3%的蔗糖。其中，mg/L表示每升培养基中含有的物质毫克数。

所述步骤（3）中，所述含3号培养基还添加以下物质：0.4-0.6mg/L 的激动素、0.08-0.12mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.04-0.06mg/L的萘乙酸、 以及质量分数为3%的蔗糖。

所述步骤（4）中，所述4号培养基还添加以下物质：0.4-0.6mg/L的 吲哚丁酸、以及质量分数为2%的蔗糖。

所述步骤（2）、步骤（3）和步骤（4）的培养条件均为24-25℃、空 气相对湿度70-75%、光强2500-3000Lx，光照10小时/天。

所述步骤（5）中，移苗后10天以内用透光率为50%的遮阳网。

所述步骤（5）中，所述沙床由下而上包括底层、中间层和上层；所 述底层为8-15cm的卵石、所述中间层为5cm的泥土、所述上层为20cm的 海沙。

所述步骤（6）中，1年生育苗容器使用网袋容器，直径为4-5cm，高 度8-10cm；2年生育苗容器使用网袋容器或者塑料容器，直径为18-20cm， 高度为300-310cm。

所述步骤（7）中，根据苗木的生长状况第2年以后进行换盆，选择 网袋容器或塑料容器，直径为18-20cm，高度为300-310cm，盆土量 800-1000g。

所述步骤（7）中，利用连栋大棚的喷雾设施进行喷灌。

所述所述步骤（7）中，夏季高温期间对容器苗苗进行遮阳，遮阳透 光率为全光照的60%。

所述所述步骤（5）、步骤（6）和步骤（7）期间空气温度大于等于18℃、 土壤基质温度不低于15℃。

名词解释

洗涤液：是指洗衣粉质量百分浓度在0.4%～1%的洗衣粉水溶液，所述 洗衣粉可以是市场上可以购买得到的常见品牌的洗衣粉，所述洗衣粉也可 以用十二烷基苯磺酸钠代替。

MS培养基：成分如表1所示

表1：MS培养基的基础成分表

1/2MS培养基：是指在上述MS培养基的基础上，将大量元素的浓度 减半，其余成分保持不变。

含盐量：本申请中提及的“含盐量”是指NaCl的质量百分浓度。

含量：本申请中提及的“含量”是指质量百分浓度。

网袋容器：是指的可降解的纤维网孔状材料制成的容器。

塑料容器：是指塑料材料制成的容器。

可拆式塑料容器：是苗木无土栽培技术中常见的栽培容器，可以通过 商业购买途径得到。其四周蜂窝状，育苗时容器两端用卡槽固定，容器呈 穴状，定植时候卡槽去除，容器呈平坦状。

盆土量：一个容器中含有的基质重量。

本发明的优点和有益效果：

1.本发明成功采用组织培养和容器育苗手段，在基质中逐步增加含盐 量进行耐盐性驯化，获得苗木其耐盐性比常规育苗提高60%以上。本发明 得到六道木的一年生苗基质中NaCl含量0.4%-0.5%能正常生长、二年生苗 基质中NaCl含量0.5%-0.6%能正常生长。

2.本发明通过确定六道木芽的诱导、分化、继代和生根培养以及炼苗、 移植至容器中的基质配方，逐步增加基质中的盐含量，得到一套完整的提 高六道木耐盐碱育苗方法。本发明的关键在于各个阶段培养基的配置和培 养基中盐含量的控制和各个阶段植株的筛选。

3.本发明虽然通过逐步驯化的手段，获得耐盐性高的苗木，但并不意 味利用该苗木为母本进行下一代的常规繁殖（如扦插、嫁接和种子繁殖） 所获得的的苗木具有较高的耐盐性。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述，但本发明不仅仅局限于 以下实施例。

实施例1提高六道木“爱德华””(Abelia'Edward Goucher')为耐盐性的 方法

1.材料消毒：取六道木“爱德华”幼嫩枝条，剪成约4-5cm带腋芽茎段， 先在加有洗衣粉的洗涤液（洗涤液是指含质量分数0.5%左右十二烷基苯磺 酸钠的水溶液）中浸泡5-6分钟，再用自来水冲洗2-3小时后剪去展开的 叶片，剪成1.5cm左右带芽茎段。在超净工作台上，用75%酒精溶液浸20 秒，然后转入质量分数为0.1%的升汞溶液中灭菌8-10分钟，并用无菌水 冲洗5-8次。

2.不定芽的诱导：将灭菌的茎段接到MS+激动素1.0mg/L+吲哚丁 酸0.1mg/L+质量分数为3%的蔗糖+质量分数为0.1%的NaCl的培养基上 培养40-50天。在芽的诱导过程中不断筛选芽分化生长良好的茎段。

3.芽的分化和继代培养：选择芽分化良好的茎段接到MS+6-苄氨基 腺嘌呤0.1mg/L+激动素0.5mg/L+萘乙酸0.05mg/L+质量分数为3% 的蔗糖+质量分数为0.1%的NaCl的增殖培养基上，选择生长良好的芽转 接同样培养基（MS+6-苄氨基腺嘌呤0.1mg/L+激动素0.5mg/L+萘乙酸 0.05mg/L+质量分数为3%的蔗糖+质量分数为0.1%的NaCl）上继代培养 一次，然后转接到MS+6-苄氨基腺嘌呤0.1mg/L+激动素0.5mg/L+萘 乙酸0.05mg/L+质量分数为3%的蔗糖+质量分数为0.2%的NaCl的培养 基上培养2代。几代培养后出现丛生芽。

4.生根培养：选取生长良好的丛生芽分成单株，转至1/2MS+吲哚丁 酸0.5mg/L+质量分数为2%的蔗糖+质量分数为0.3%的NaCl生根培养基 上诱导生根。培养15-20天左右，根系约5根以上，苗高4-6cm左右可以 移苗。

以上组培室培养条件为25℃左右、空气相对湿度70%左右、光强2500 Lx左右，光照10小时/天。

5.炼苗：淘汰生长差的组培苗，将生长良好的生根苗的瓶口打开，在 室温下开瓶炼苗2-3天，将试管苗取出，用清水冲洗掉根部培养基后，移 植到沙床上进行炼苗。沙床底层为10cm左右的卵石、中间为5cm左右的 泥土、上层为20cm左右的海沙（海沙含盐量0.4%左右）。炼苗时行株距 为10×10cm，根据土壤和苗木叶面湿度不定期地进行自动喷灌,保持苗木 叶片湿润不失水。新根长出后逐步降低沙床的湿度,待抽出新叶后移栽到 容器内进行培育。期间注意基质中的含盐量基本保持恒定，基质中含盐量 降低时在喷灌水中加适量的NaCl。

6.移苗：移苗后10天左右以内用遮阳网（透光率50%左右）。1年生 育苗容器网袋容器直径为4-5cm，高度8-10cm；2年生育苗容器网袋容器 和可拆式塑料容器直径为18-20cm，高度为300-310cm。一般六道木1年 生容器试验基质按照体积比配比为泥炭：海沙=7:3，缓释复合肥（1kg·m-3）； 2年生容器基质按照体积比配比为泥炭：海沙=6:4，缓释复合肥（2kg.m-3）。 为预防苗木发生病虫害，基质须严格消毒，配制基质时添加NaCl，一年 生苗基质中的NaCl含量为0.4%左右，二年生苗基质中的NaCl含量为0.5% 左右。

7.苗期管理：容器苗置于配置遮阳和喷雾设施的连栋大棚内，大棚内 的温度保持在20-25℃，土壤相对湿度保持在65-75%。根据苗木的生长状 况第2年以后进行换盆，二年生苗基质换盆时基质按照体积比配比为海沙 =6:4，缓释复合肥（2kg.m-3）；二年生苗基质中的NaCl含量为0.5%。使 用的容器可以是网袋容器或可拆式塑料容器，直径为18-20cm，高度为 300-310cm，盆土量800-1000g。对缺株或者生长较差的容器苗要及时补苗。 补苗后要随即浇水。在规模生产中采用以喷灌为佳，可利用连栋大棚喷雾 设施进行喷灌。根据天气季节温湿度变化进行灌水，浇水要浇透，浇水最 佳时间是早晨或者傍晚。

以上炼苗、移苗和育苗期间空气温度不低于18℃、土壤（基质）温度 不低于15℃。

基质中已经施入缓释复合肥，一般无需再施肥，但可以根据容器苗生 长状况可以结合灌水适当根外追肥。夏季高温期间需对容器苗苗进行遮 阳，遮阳透光率为全光照的60%左右。如有病害发生，及时清除病株，并 使用相应的农药喷洒灭菌。如有虫害发生，及时防治。苗期发现容器内基 质下沉，须及时添加基质，防止根部裸露。在苗期管理中也要注意注意基 质中的含盐量基本保持恒定，基质中含盐量降低时在喷灌水中加适量的 NaCl。

实践证明：土壤含盐量在0.2%以上六道木“爱德华”生长受阻，0.3%是 它生长的阀值。经过本实施例1的方法处理后，六道木“爱德华”的一年生 苗基质中NaCl含量0.4%能正常生长、二年生苗基质中NaCl含量0.5%能 正常生长。

实施例2提高花叶六道木（学名：Abelia grandiflora“Francis Mason”） 耐盐性的方法

1.材料消毒：取花叶六道木幼嫩枝条，剪成约4-5cm带腋芽茎段，先 在加有洗衣粉的洗涤液（洗涤液是指含质量分数0.5%的十二烷基苯磺酸钠 的水溶液）中浸泡5-6分钟，再用自来水冲洗3小时后剪去展开的叶片， 剪成1.5cm的带芽茎段。在超净工作台上，用75%酒精溶液浸20秒， 然后转入质量分数为0.1%的升汞溶液中灭菌8-10分钟，并用无菌水冲洗 6-8次。

2.不定芽的诱导：将灭菌的茎段接到MS+激动素1.0mg/L+吲哚丁 酸0.1mg/L+质量分数为3%的蔗糖+质量分数为0.1%的NaCl的培养基上 培养40-50天。在芽的诱导过程中不断筛选芽分化生长良好的茎段。

3.芽的分化和继代培养：选择芽分化良好的茎段接到MS+6-苄氨基 腺嘌呤0.1mg/L+激动素0.5mg/L+萘乙酸0.05mg/L+质量分数为3% 的蔗糖+质量分数为0.1%的NaCl的增殖培养基上，选择生长良好的芽转 接同样培养基（MS+6-苄氨基腺嘌呤0.1mg/L+激动素0.5mg/L+萘乙酸 0.05mg/L+质量分数为3%的蔗糖+质量分数为0.1%的NaCl的增殖培养 基）上继代培养一次，然后转接到MS+6-苄氨基腺嘌呤0.1mg/L+激动 素0.5mg/L+萘乙酸0.05mg/L+质量分数为3%的蔗糖+质量分数为 0.2%的NaCl的培养基上培养2代。几代培养后出现丛生芽。

4.生根培养：选取生长良好的丛生芽分成单株，转至1/2MS+吲哚丁 酸0.5mg/L+质量分数为2%的蔗糖+质量分数为0.3%的NaCl生根培养基 上诱导生根。培养15-20天左右，根系约5根以上，苗高4-6cm左右可以 移苗。

以上组培室培养条件为25℃、空气相对湿度75%、光强3000Lx，光 照10小时/天。

5.炼苗：淘汰生长差的组培苗，将生长良好的生根苗的瓶口打开，在 室温下开瓶炼苗2-3天，将试管苗取出，用清水冲洗掉根部培养基后，移 植到沙床上进行炼苗。沙床底层为10cm左右的卵石、中间为5cm左右的 泥土、上层为20cm左右的海沙（海沙含盐量0.4%左右）。炼苗时行株距 为10×10cm，根据土壤和苗木叶面湿度不定期地进行自动喷灌,保持苗木 叶片湿润不失水。新根抽出新叶后移栽到容器内进行培育。期间注意基质 中的含盐量基本保持恒定，基质中含盐量降低时在喷灌水中加适量的 NaCl。

6.移苗：移苗后10天以内用遮阳网（透光率50%左右）。1年生育苗 容器网袋容器直径为4-5cm，高度8-10cm；2年生育苗容器网袋容器和可 拆式塑料容器直径为18-20cm，高度为300-310cm。六道木1年生容器试 验基质按照体积比配比为泥炭：海沙=7:3，缓释复合肥（1kg·m-3）；2年 生容器基质按照体积比配比为泥炭：海沙=6:4，缓释复合肥（2kg.m-3）。 为预防苗木发生病虫害，基质须严格消毒，配制基质时添加NaCl，一年 生苗基质中的NaCl含量为0.5%，二年生苗基质中的NaCl含量为0.6%。

7.苗期管理：容器苗置于配置遮阳和喷雾设施的连栋大棚内，大棚内 的温度保持在20-25℃，土壤相对湿度保持在65-75%。根据苗木的生长状 况第2年以后进行换盆，二年生苗基质换盆时基质按照体积比配比为海沙 =6:4，缓释复合肥（2kg.m-3）；二年生苗基质中的NaCl含量为0.6%。使 用的容器是网袋容器，直径为18-20cm，高度为300-310cm，盆土量 800-1000g。

以上炼苗、移苗和育苗期间空气温度为18℃、土壤（基质）温度为 15℃。

基质中已经施入缓释复合肥，一般无需再施肥，但可以根据容器苗生 长状况可以结合灌水适当根外追肥。夏季高温期间需对容器苗苗进行遮 阳，遮阳透光率为全光照的60%左右。如有病害发生，及时清除病株，并 使用相应的农药喷洒灭菌。如有虫害发生，及时防治。苗期发现容器内基 质下沉，须及时添加基质，防止根部裸露。在苗期管理中也要注意注意基 质中的含盐量基本保持恒定，基质中含盐量降低时在喷灌水中加适量的 NaCl。

实践证明：土壤含盐量在0.2%以上花叶六道木生长受阻，0.3%是它生 长的阀值。经过本实施例1的方法处理后，花叶六道木的一年生苗基质中 NaCl含量0.5%能正常生长、二年生苗基质中NaCl含量0.6%能正常生长。

如上所述，便可以较好地实现本发明。