意大利牛舌草活性部位在制备抗氧化药物、化妆品和保健品中的应用

摘要

本发明涉及植物提取物在具有抗氧化作用的药物、化妆品和保健品领域中的应用，公开了一种意大利牛舌草活性部位在具有抗氧化作用药物、化妆品和保健品中的应用。这种活性部位的制备方法为取意大利牛舌草全草干燥粉末，以乙醇提取，滤液合并，减压回收溶剂，得到粗提物；粗提物经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，萃取物蒸干，得到活性部位。这种活性部位，是一种天然的植物抗氧化剂，对人体无副作用，在抗氧化领域有应用潜能。

说明书

技术领域

本发明涉及植物提取物、药品、保健品和化妆品领域，具体为意大利牛舌草 活性部位在具有抗氧化药物、化妆品和保健品领域中的应用。

背景技术

抗氧化剂(Antioxidants)是阻止氧气不良影响的物质。它是一类能帮助捕 获并中和自由基，从而祛除自由基对人体损害的一类物质。人体的抗氧化剂有自 身合成的，也有由食物供给的。所有水果和蔬果中都含有极高的天然抗氧化剂， 如维生素A、C、E、P、多酚等。竹叶中提取的竹叶黄酮就是一种优质的天然抗 氧化剂，茶叶中也含有天然抗氧化剂，如多酚等。研究表明水果和蔬菜中的天然 抗氧化剂具有保护效果。例如维生素E和β一胡萝卜素可以保护细胞膜；维 生素C可以排出细胞内的自由基，等等。天然抗氧化剂可以帮助人类预防心脏 病和癌症等多种疾病，并能增进脑力，延缓衰老。我国台湾学者对195种中草药 的抗氧化性能进行系统筛选和评价，发现几乎一半的中草药表现出抗氧化作用， 其中22种中草药乙醇提取物抗氧化能力强于等重量生育酚。

以天然抗氧化剂取代合成抗氧化剂是药品、化妆品和保健品行业的发展趋 势，天然植物是一种极有潜力的天然抗氧化剂资源，从天然植物中寻找新的清除 体内自由基的抗氧化剂也将是现代医药、保健行业的发展方向，因为生物体内或 食物中的脂类的氧化产物可能是许多疾病的诱因，而从天然药物中分离出来的 许多抗氧化成分都有治疗作用。从天然植物中筛选和开发抗氧化作用确切、安全 无毒的新品种或分离提取其有效抗氧化成分，已是当务之急。天然植物抗氧化作 用有很大可挖掘的潜能，加之运用现代科学技术，结合现代中医药学理论，尽早 创立中西医结合的抗氧化理论体系，定将有益于天然植物抗氧化剂的开发和应 用。另外，天然抗氧化剂尚需在有效成分的抗氧化机理、协同作用、构效关系和 分子设计等方面开展深入研究，为中草药开发抗氧化剂的应用奠定理论基础，同 时要加强天然植物原料提取、分离纯化有效成分工艺研究，以尽快实现天然抗氧 化剂的产业化。

意大利牛舌草(Anchusa italica Retz.)为紫草科植物，生长于海拔210米至 3,000米的地区，国外分布于伊朗、前苏联等国及欧洲等地，此种药材多由巴基 斯坦进口，现在新疆南疆喀什地区大量人工栽培。维吾尔医药中将意大利牛舌草 的地上部分入药称牛舌草，维药名高孜万，是维吾尔医治疗心脑血管疾病的常用 药材之一。牛舌草药材具有生湿生热，调节异常黑胆质，生湿补脑，祛寒补心， 爽心悦志，润燥消炎，止咳平喘等功效。主治干寒性或黑肥质性疾病，如平性脑 虚，寒性心虚、心悸，抑郁症，干性脑膜炎、肺炎及结核疾病，寒性咳嗽、感冒、 气喘等。全草经预试有皂苷，黄酮类，氨基酸，挥发油，黏液质，糖类和微量生 物碱反应。

牛舌草属的植物在土耳其、印度和约旦民间用于治疗创伤，胃溃疡和尿路感 染等疾患。土耳其的学者(Helvetica Chimica Acta，93：457，2010)研究了蔚蓝牛 舌草(Anchusa azurea)的化学成分，从中分离鉴定了11个化学成分，主要为三 萜皂苷，黄酮类，脂肪酸和酚酸类化合物，并且发现其正丁醇萃取部位及一个黄 酮类化合物quercetin3-(α-rhamnopyranosyl-β-glucopyranoside和一个酚酸类化合 物rosmarinic acid具有很强的抗DPPH(2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)自由基的 作用。

综合现有文献资料，未发现意大利牛舌草及其所含成分具有抗氧化作用的文 献和专利报道。

发明内容

本发明旨在提供一种意大利牛舌草活性部位的用途，将该意大利牛舌草活性 部位应用于制备具有抗氧化效果的药物、化妆品和保健品。

本发明所要解决的技术问题是在于寻找开发高效且对人体无副作用或副作 用小的天然植物抗氧化剂。本发明提供了一种在抗氧化领域有应用潜能的意大利 牛舌草活性部位。

一种意大利牛舌草活性部位在制备具有抗氧化作用的药物、化妆品和保健品 领域中的应用。

所述的意大利牛舌草活性部位的提取方法，步骤包括：

(1)取干燥的意大利牛舌草全草粉末，加入乙醇溶液冷浸后提取2～5次， 取滤液；

提取方法为常温(10～30℃)下用体积浓度为30％～95％乙醇溶液(优选 为60％～95％)冷浸、超声提取10～60分钟；每次提取时，乙醇溶液与意大利 牛舌草粉末的用量比为5～15ml/g；

(2)合并滤液，依次以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，各萃取物蒸干， 即得。

本发明的技术方案为，取意大利牛舌草全草，干燥、粉碎成粗粉，取干燥粉 末，以乙醇提取，滤液合并，减压回收溶剂，得到意大利牛舌草全草粗提物；意 大利牛舌草全草粗提物依次以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，其中乙酸乙酯和 正丁醇部位具有良好的抗氧化作用。

通过上述方法得到的意大利牛舌草活性部位，是一种天然的植物抗氧化剂， 对人体无副作用，在抗氧化领域有应用潜能。这种意大利牛舌草活性部位可用于 制备具有抗氧化效果的药物、化妆品和保健品。

具体实施方式

实施例1

意大利牛舌草全草干燥粉末20g，室温下(10～30℃)以体积浓度为30％ 乙醇200ml冷浸、超声提取2次，每次10min(500W)，取滤液合并，减压回 收溶剂至干，取提取物适量，配制成0.5mg/ml溶液备用，测定其清除DPPH自 由基能力和弹性蛋白酶抑制作用，以便与后续制得的意大利牛舌草活性部位的活 性作比较。

结果：意大利牛舌草全草粗提物在50μg/ml浓度时DPPH自由基清除率为 9％，在1mg/ml浓度时对弹性蛋白酶抑制率为2％。

实施例2

意大利牛舌草全草干燥粉末20g，室温下以体积浓度为60％乙醇200ml冷 浸、超声提取2次，每次30min(500W)，取滤液合并，减压回收溶剂至干， 取提取物适量，配制成0.5mg/ml溶液备用，测定其清除DPPH自由基能力，以 便与后续制得的意大利牛舌草全草活性部位的活性作比较。

结果：意大利牛舌草全草粗提物在50μg/ml浓度时DPPH自由基清除率为 14％，在1mg/ml浓度时对弹性蛋白酶抑制率为4％。

实施例3

意大利牛舌草全草干燥粉末20g，室温下以体积浓度为70％乙醇200ml冷 浸、超声提取2次，每次30min(500W)，取滤液合并，减压回收溶剂至干， 取提取物适量，配制成0.5mg/ml溶液备用，测定其清除DPPH自由基能力，以 便与后续制得的意大利牛舌草全草活性部位的活性作比较。

结果：意大利牛舌草全草粗提物在50μg/ml浓度时DPPH自由基清除率为 25％，在1mg/ml浓度时对弹性蛋白酶抑制率为12％。

实施例4

意大利牛舌草全草干燥粉末20g，室温下以体积浓度为75％乙醇200ml冷 浸、超声提取2次，每次30min(500W)，取滤液合并，减压回收溶剂至干， 取提取物适量，配制成0.5mg/ml溶液备用，测定其清除DPPH自由基能力，以 便与后续制得的意大利牛舌草全草活性部位的活性作比较。

结果：意大利牛舌草全草粗提物在50μg/ml浓度时DPPH自由基清除率为 29％，在1mg/ml浓度时对弹性蛋白酶抑制率为14％。

实施例5

意大利牛舌草全草干燥粉末20g，室温下(10～30℃)以体积浓度为95％乙 醇200ml冷浸、超声提取2次，每次30min(500W)，取滤液合并，减压回收 溶剂至干，取提取物适量，配制成0.5mg/ml溶液备用，测定其清除DPPH自由 基能力，以便与后续制得的意大利牛舌草全草活性部位的活性作比较。

结果：意大利牛舌草全草粗提物在50μg/ml浓度时DPPH自由基清除率为 41％，在1mg/ml浓度时对弹性蛋白酶抑制率为26％。

实施例6活性部位富集

取意大利牛舌草全草干燥粉末500g，室温下(10～30℃)以体积浓度为95 ％乙醇5000ml冷浸、超声提取2次，每次30min(500W)，取滤液合并，减压 回收溶剂至无醇味；依次以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别收集各萃取液、 蒸干，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位，并配制成不同浓度的 溶液备用。

实施例7清除DPPH自由基能力测试

在药物、化妆品和保健品领域，通常抗氧化性能的优劣是用清除DPPH自由 基能力测试来表征的，清除DPPH自由基能力测试原理如下：

1，1-二苯基-2-三硝基苯肼[1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2，2-Diphenyl-1-(2，4，6-trinitrophenyl)hydrazyl，DPPH]是一种稳定的氮中心有 机自由基。DPPH法于1958年被提出，广泛用于地量测定生物试样、分类 物质和食品的抗氧化能力。此法是根据DPPH自由基有单电子，在517nm 处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性。当有自由基清除剂存在时，由于 与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成 定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量分析，来检测自由基清除 情况，从而评价样品的抗氧化能力。其能力用清除率来表示，清除率越大， 则表明其抗氧化能力越强。

试验方法：

1)将不同稀释度的待测样品溶液2ml加入试管中；

2)加入2ml76μmol/L DPPH乙醇溶液，混匀；

3)室温下避光在黑暗处反应30min；

4)在525nm处测定吸光度Abs；每个浓度重复三次测试以保证实验结果的 准确性，最后取平均值作为拟合数据。

清除率I(％)＝[1-(T-T0)/(C-C0)]×100％

式中：

T0：2ml水或DMSO加2ml DPPH溶液的吸光度；

T：2ml样品液加2ml DPPH溶液的吸光度；

C：2ml样品液加2ml95％乙醇的吸光度；

C0：2ml水或DMSO加2ml95％乙醇的吸光度；

按照上面公式计算清除率，清除率越大抗氧化能力越强。结果如表1。

表1意大利牛舌草各部位清除DPPH自由基活性测试结果

实施例6所得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位中，在0.05mg/ml 时，对DPPH自由基清除率分别为10％，87％和76％，由此可见，乙酸乙酯和正 丁醇部位均具有很强的自由基清除作用，其中，以乙酸乙酯部位抑制作用最强。。

实施例8弹性蛋白酶抑制作用

测定方法按照文献(Am.J.Pharmacol.Toxicol.，2009，4，127-129)方法进行， 测定步骤为：在96孔板中加入10uL样品溶液和130uL含有1.015mM反应底 物Succ-Ala-Ala-Ala-p-硝基酰替苯胺的0.1M Tris-Cl缓冲溶液(PH8.0)，在25 ℃下温育5分钟，加入15uL弹性蛋白酶溶液(0.5U/ml)，继续在25℃下温育 30min，然后用酶标仪测定410nm波长的吸光度A410。用去离子水替换样品水 溶液，作为参比溶液同样测定吸光度。结果见表2。

表2意大利牛舌草各部位弹性蛋白酶抑制作用

实施例6所得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位中，在1.0mg/ml时， 对弹性蛋白酶抑制率分别为2％，50％和56％，由此可见，乙酸乙酯和正丁醇部 位均具有较强的弹性蛋白酶抑制作用，其中，以正丁醇部位抑制作用最强。