雷公藤药材或制剂中同时测定雷公藤甲素和雷公藤内酯酮的方法

摘要

本发明提供了雷公藤药材或制剂中同时测定雷公藤甲素和雷公藤内酯酮的方法，它是采用微乳液毛细管电动色谱法检测的。本发明建立了一种全新的微乳液毛细管电动色谱法，用于分离检测雷公藤中重要毒性及有效成分的含量。实验证明本发明方法线性关系良好、精密度高，样品中雷公藤甲素及雷公藤内酯酮在10min内能达到基线分离，且分离度较高，可以用于实际样品的测定，为雷公藤药材及制剂的质量控制提供有力补充。

说明书

技术领域

本发明涉及雷公藤药材或制剂中同时测定雷公藤甲素和雷公藤内酯酮的 方法。

背景技术

雷公藤，为卫矛科植物雷公藤的根，味苦、辛，性凉，大毒。归肝、肾 经。功效祛风除湿、通络止痛、消肿止痛、解毒杀虫。用于湿热结节、癌瘤 积毒，临床上用其治疗麻风反应、类风湿性关节炎等，药理研究也表明其有 抗肿瘤、抗炎等作用，但其有大毒，应须谨慎。

现代研究发现，雷公藤药材中含有雷公藤甲素和内酯酮。其中，雷公藤 甲素具有良好的抗炎和免疫抑制活性，是雷公藤的重要活性成分；而雷公藤 内酯酮的雄性抗生育作用非常显著，是雷公藤抗生育副作用的主要成分。因 此，在对雷公藤药材或雷公藤相关制剂进行质量控制时，多需要对雷公藤甲 素和内酯酮进行测定。

目前，对雷公藤甲素及内酯酮的含量测定主要为高效液相色谱法，且极 少对两成分同时进行分离、检测，

微乳液毛细管电动色谱法（MEEKC），是将微乳液作为分离介质的一种 新的HPCE分离模式，在电渗流的驱动下，可以对阴离子、阳离子和中性物 质同时进行分离，多用于药物分析、生物样品或代谢产物分析等方面。相比 于高效液相色谱，MEEKC具有分析速度快，试剂消耗少，分析成本低等优 势。

目前，尚未见应用微乳液毛细管电动色谱法(MEEKC)同时对雷公藤甲 素和雷公藤内酯酮进行检测的报道。

发明内容

本发明旨在建立一种在雷公藤药材或制剂中同时测定雷公藤甲素和雷公 藤内酯酮的方法，为雷公藤药材及其制剂的质量控制，提供一种有效的分析 手段。

本发明提供了一种雷公藤药材或制剂中同时测定雷公藤甲素和雷公藤内 酯酮的方法，它是采用微乳液毛细管电动色谱法检测的，包括如下操作步骤：

（1）取雷公藤甲素、雷公藤内酯酮对照品，制备对照品溶液；

（2）取雷公藤药材或含雷公藤的制剂，粉碎后，用60～80%v/v乙醇提 取，合并醇提液，除去溶剂至干后，残渣加乙酸乙酯溶解，过中性氧化铝柱， 所得滤液除去溶剂后，甲醇溶解，即可制备供试品溶液；

（3）分别将对照品溶液、供试品溶液注入高效毛细管电泳仪中，计算雷 公藤甲素、雷公藤内酯酮含量即可；其中，电泳条件如下：

色谱柱：未涂层毛细管柱

检测波长：214±2nm；

分离电压：25±0.5kV；

微乳运行液中含有0.5～1.5%w/v十二烷基硫酸钠，2～4%v/v正丁醇， 0.5～1.5%v/v乙酸乙酯，94.5～97.5%v/v硼砂—磷酸二氢钠缓冲溶液，缓冲溶 液pH=8.0～9.0。

优选地，微乳运行液中含有1%w/v十二烷基硫酸钠，3%v/v正丁醇， 1%v/v乙酸乙酯，96%v/v5mmol/L硼砂—10mmol/L磷酸二氢钠缓冲溶液， 缓冲溶液pH=8.5。

在上述条件下，待检样品中雷公藤甲素及雷公藤内酯酮在10min内能达 到基线分离，且分离度良好。

进一步地，步骤（2）中，乙醇浓度为70%v/v。

进一步地，步骤（2）中，所述雷公藤药材为雷公藤生品药材或雷公藤炮 制后药材；所述含雷公藤的制剂为雷公藤多苷片。

优选地，所述雷公藤炮制后药材为水煮品。

进一步地，步骤（3）中，对照品溶液、供试品溶液均采用压力进样，进 样压力0.5psi。

更进一步地，步骤（3）中，进样所用时间为4-10s。

优选地，步骤（3）中，进样所用时间为6s。

其中，步骤（3）中，所述色谱柱柱温为25±2℃。

其中，步骤（3）中，所述色谱柱尺寸为：75μm×61cm。

本发明建立了一种全新的微乳液毛细管电动色谱法，用于分离检测雷公 藤中重要毒性及有效成分的含量。实验证明本发明方法线性关系良好、精密 度高，样品中雷公藤甲素及雷公藤内酯酮在10min内能达到基线分离，且分 离度较高，可以用于实际样品的测定，为雷公藤药材及制剂的质量控制提供 有力补充。

附图说明

图1对照品色谱图1-雷公藤甲素，2-雷公藤内酯酮

图2雷公藤生品药材色谱图1-雷公藤甲素，2-雷公藤内酯酮

图3雷公藤水煮品色谱图1-雷公藤甲素，2-雷公藤内酯酮

图4雷公藤多苷片色谱图1-雷公藤甲素，2-雷公藤内酯酮

具体实施方式

实施例1本发明测定方法

本发明使用Beckman P/ACE^TM MDQ型毛细管电泳仪（配备二极管阵列 检测器）进行方法测定。未涂层熔融石英毛细管（Beckman公司，内径75μm， 外径375μm，总长61cm，有效长度50.5cm）。

3.1微乳液的组成

表面活性剂：1%(w/v)十二烷基硫酸钠(SDS)；

助表面活性剂：3%(v/v)正丁醇；

油相：1%(v/v)乙酸乙酯；

水相：96%(v/v)5mmol/L硼砂-10mmol/L磷酸二氢钠溶液(pH8.5)

3.2电泳运行条件

分离电压25kV，压力进样0.5psi×6s，检测波长214nm，温度25℃

4具体方法：

4.1微乳液制备

将组成微乳液的各成分混合置于具塞容量瓶中，超声30min后得到透 明、稳定的溶液即可。为了防止微乳液在室温下变得浑浊不清，有必要在超 声过一次后再超声一次，使用前均需过0.22μm微孔滤膜。

4.2对照品溶液的制备

精密称定雷公藤甲素及内酯酮标准品各1.0mg，分别置于1ml容量瓶， 甲醇溶解并定容至刻度，即得，标准品溶液浓度为1.0mg/ml。

4.3样品制备

4.3.1样品前处理

生品：将雷公藤根或根茎去皮，取其根芯切成符合炮制规格大小的饮片， 粉碎备用。

水煮品：称取上述饮片100g置锅内，加水浸泡至内无干心，水没过药 面，武火煮沸后，改用文火煮至内无白心，置烘箱内烘干（35～40℃）至恒 重，粉碎备用。

雷公藤多苷片（购买市售产品）：取一定数量的片剂，研磨成粉状。

4.3.2供试品溶液的制备

取药物粉末约2g，加70%乙醇（料液比1:9），超声提取30min，温度 25℃，滤过，残渣重复提取1次，合并两次滤液，水浴挥干后，残渣用乙酸 乙酯溶解，此溶液过中性氧化铝柱，所得滤液水浴挥干，用甲醇溶解并定容 至1ml，过0.22μm微孔滤膜，即得。

5结果

5.1方法学考察及样品含量测定

表1雷公藤甲素和雷公藤内酯酮的方法学考察指标

表2样品含量及回收率

5.2重现性、稳定性考察

重现性为连续3天测定，峰面积RSD分别为雷公藤甲素：2.58%，雷公藤 内酯酮：2.12%；迁移时间RSD分别为雷公藤甲素：3.42%，雷公藤内酯酮： 3.03%，说明重现性良好。

稳定性是在一天之内测定，时长在10h左右，从测定结果看，峰面积和迁 移时间的RSD均<5%，说明样品稳定性良好。

6、小结：

本发明前期选择了三种电泳模式，分别是毛细管区带电泳（CZE）、胶束 毛细管电动色谱（MEKC）、微乳液毛细管电动色谱（MEEKC），对样品色谱 峰分离效果进行了对比。结果表明，CZE模式下，两标准品无法分离；MEKC 模式下，虽然两标准品可以较好分离，但应用到实际样品中，目标样品峰的 测定受到其他峰干扰；MEEKC模式下，两样品峰均可以很好的分离测定， 避免干扰。

本发明建立了一种全新的微乳液毛细管电动色谱法，用于分离检测雷公 藤中重要毒性及有效成分的含量。实验证明本发明方法线性关系良好、精密 度高，样品中雷公藤甲素及雷公藤内酯酮在10min内能达到基线分离，且分 离度较高，可以用于实际样品的测定，为雷公藤药材及制剂的质量控制提供 有力补充。