一种光温敏核不育系盐582S种子纯度检测方法

摘要

本发明公开了一种光温敏核不育系盐582S种子纯度检测方法。将光温敏核不育系盐582S种子在实验室培育幼苗，出苗后至3-4叶期，连续出现叶尖发生卷曲、叶片出现萎蔫、生长减缓症状的、说明不耐盐即为杂株；而在盐(Nacl)胁迫条件下生长正常的、说明耐盐即为盐582S，从而可以计算出盐582S种子纯度。应用本发明技术可以较快速地检测光温敏核不育系盐582S种子纯度，节省了将盐582S种子送海南进行田间种植鉴定的费用和时间。同时按本发明方法，亦可以鉴定耐盐性较好的其他光温敏核不育系种子纯度。

说明书

技术领域

本发明属于种子质量检测技术领域，涉及水稻种子纯度检测的方法，更具体地说 是一种光温敏核不育系盐582S种子纯度检测方法。

背景技术

我国是世界上最大的杂交水稻种子生产国和消费国，生产高纯度的水稻杂交种都 是充分发挥杂种优势增产潜力的基础。近期，两系杂交水稻的研究和推广为我国水稻生 产做出了积极贡献。生产高纯度两系杂交水稻种子的关键首先是要有高纯度的光温敏核 不育系亲本种子。

杂交水稻亲本种子纯度的快速鉴定，一直是种子质量检测部门、科研单位、种子 生产单位等共同关心的问题。目前，杂交水稻亲本种子纯度的鉴定主要有异地种植鉴定 法、同工酶鉴定法和分子鉴定法等几种方法。异地种植鉴定法是较常用的方法，但由于 杂交水稻亲本种子异地种植鉴定常常安排在海南进行，一般需要一个水稻生长周期，即 每年11月份送样到海南种植、在次年的4-5月份才能知道鉴定结果，鉴定结果往往都 滞后于种子的销售，这也造成每年都有因种子纯度问题而引起种子质量纠纷事件。近期， 同工酶鉴定法和分子鉴定法统等室内鉴定技术已相对成熟，应用亦较为普遍。室内鉴定 法较异地种植鉴定法所需的鉴定时间短、相对成本亦要少许多。

水稻品种间耐盐性差异很大。国内外水稻耐盐性鉴定的方法较多，主要有种子萌 发鉴定、苗期鉴定，田间筛选鉴定，培养室生化鉴定等方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种对光温敏核不育系盐582S种子的纯度进行准确、快捷、 实用检测的方法。

本发明的技术方案是：一种光温敏核不育系盐582S种子纯度检测方法，其具体步 骤是：

（1）浸种催芽：选择籽粒饱满、整齐一致、无破损、无霉病的盐582S种子6000 粒以上，按照常规做法进行消毒、浸种、催芽，催芽要适度，掌握种子破胸、露白即可。

（2）沙培基质准备：先将大小均匀一致消毒后的细沙装在培养皿(箱)中，高度 1.5-2.0cm；往培养皿(箱)中加入配制好的浓度为0.5%盐(Nacl)溶液至细沙湿润、适合种 子萌发即可，3次重复，每个重复能够播种2000粒以上。

（3）盐(Nacl)胁迫培育幼苗：将破胸露白的盐582S种子均匀播种在培养皿(箱)内 的沙培基质上，然后用消毒过的细沙进行覆盖，不露种即可；将播种后培养皿(箱)放置 在人工气候箱中，温度保持28-30℃，湿度保持70-75%；3-5d后培养皿(箱)中保持0.5% 盐(Nacl)浓度的薄水层，同时每12h更换一次0.5%盐(Nacl)溶液，以减少盐浓度的变化。

（4）幼苗生长观察记载：出苗后至3-4叶期（播种后15d左右），连续观察记载幼 苗生长情况，统计连续出现叶尖发生卷曲、叶片出现萎蔫、生长减缓症状的幼苗数量（表 现不耐盐即为杂株），而在盐(Nacl)胁迫条件下生长正常（表现耐盐即为盐582S）的秧 苗数量。

（5）计算受检样品纯度：受检样品纯度为3次重复平均值，即为盐582S种子的 实际纯度。受检样品纯度计算公式是：

受检样品纯度(%)=(供检样品幼苗总株数-非本品种幼苗株数)∕供检样品幼苗总 株数×100。

本发明的技术效果是：本发明利用根据经多年研究发现江苏沿海地区农业科学研 究所育成的光温敏核不育系盐582S幼苗期的耐盐性显著高于一般水稻品种的原理，在 0.5%盐(Nacl)浓度胁迫条件下，将光温敏核不育系盐582S种子在实验室培育幼苗，出苗 后至3-4叶期（播种后15d左右），观察记载幼苗生长情况，连续出现叶尖发生卷曲、 叶片出现萎蔫、生长减缓症状的、说明不耐盐即为杂株；而在盐(Nacl)胁迫条件下生长 正常的、说明耐盐即为盐582S，从而可以计算出盐582S种子纯度。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。

一种光温敏核不育系盐582S种子纯度检测方法，其具体步骤是：

（1）浸种催芽：选择籽粒饱满、整齐一致、无破损、无霉病的盐582S种子6000 粒以上，按照常规做法将种子用0.1%Hgcl消毒10min，然后用蒸馏水冲洗4-5次，再浸 种、催芽，催芽要适度，掌握种子破胸、露白即可。

（2）沙培基质准备：先将大小均匀一致消毒后的细沙装在培养皿(箱)中，高度 1.5-2.0cm；往培养皿(箱)中加入配制好的浓度为0.5%盐(Nacl)溶液至细沙湿润、适合种 子萌发即可，3次重复，每个重复能够播种2000粒以上。每个重复要根据培养皿(箱)的 大小可以设置多个培养皿(箱)。所述浓度为0.5%盐(Nacl)溶液是由5gNacl溶解于1000ml 的蒸馏水配制而成。

（3）盐(Nacl)胁迫培育幼苗：将破胸露白的盐582S种子均匀播种在培养皿(箱)内的 沙培基质上，然后用消毒过的细沙进行覆盖，不露种即可；将播种后培养皿(箱)放置在 人工气候箱中，温度保持28-30℃，湿度保持70-75%；3-5d后培养皿(箱)中保持0.5%盐 (Nacl)浓度的薄水层，同时每12h更换一次0.5%盐(Nacl)溶液，以减少盐浓度的变化。

（4）幼苗生长观察记载：出苗后至3-4叶期（播种后15d左右），连续观察记载幼 苗生长情况，统计连续出现叶尖发生卷曲、叶片出现萎蔫、生长减缓症状的幼苗数量（表 现不耐盐即为杂株），而在盐(Nacl)胁迫条件下生长正常（表现耐盐即为盐582S）的秧 苗数量。

（5）计算受检样品纯度：受检样品纯度为3次重复平均值，即为盐582S种子的实 际纯度。受检样品纯度计算公式是：

受检样品纯度(%)=(供检样品幼苗总株数-非本品种幼苗株数)∕供检样品幼苗总 株数×100。

几年来，盐582S种子纯度检验结果与田间种植鉴定纯度结果对照比较，二者的结 果高度一致(见附表1、2、3)。

表1：2010年利用耐盐性检测盐582S种子纯度与田间种植鉴定纯度对照表

样品编号 田间鉴定结果(%) 耐盐鉴定结果(%) 1 99.94 99.96 2 99.93 99.94 3 99.93 99.95 4 99.95 99.96 5 99.95 99.96 6 99.94 99.95 7 99.95 99.97 8 99.90 99.91 9 99.94 99.95 10 99.92 99.93 11 99.89 99.90 12 99.94 99.95

表2：2011年利用耐盐性检测盐582S种子纯度与田间种植鉴定纯度对照表

样品编号 田间鉴定结果(%) 耐盐鉴定结果(%) 1 99.95 99.95 2 99.94 99.96 3 99.92 99.94 4 99.93 99.93 5 99.95 99.96 6 99.93 99.94 7 99.94 99.95 8 99.93 99.94 9 99.94 99.95 10 99.94 99.96 11 99.93 99.93 12 99.95 99.97 13 99.94 99.96 14 99.92 99.93 15 99.90 99.92

表3：2012年利用耐盐性检测盐582S种子纯度与田间种植鉴定纯度对照表

样品编号 田间鉴定结果(%) 耐盐鉴定结果(%) 1 99.96 99.98 2 99.94 99.95 3 99.93 99.94 4 99.96 99.98 5 99.93 99.95 6 99.91 99.92 7 99.92 99.94 8 99.95 99.96 9 99.95 99.95 10 99.93 99.95 11 99.93 99.96 12 99.92 99.94 13 99.91 99.94 14 99.90 99.94 15 99.93 99.96 16 99.93 99.95 17 99.94 99.95 18 99.92 99.93 19 99.91 99.92 20 99.92 99.94

2010年、2011年、2012年利用耐盐性检测盐582S种子纯度与田间种植鉴定纯度结 果，经t测验：各年度利用耐盐性检测盐582S种子纯度与田间种植鉴定纯度结果之间 的差异不显著，说明两种不同方法检测的纯度结果的一致性。同时也说明利用不同水稻 品种耐盐性的差异不仅可以鉴定光温敏核不育系盐582S的真实性和种子纯度的检验， 而且相对于田间种植鉴定方法，其纯度检测准确、快捷、实用。

应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换， 而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。