公开/公告号CN103242414A
专利类型发明专利
公开/公告日2013-08-14
原文格式PDF
申请/专利权人 成都彼斯特生物科技有限公司;
申请/专利号CN201310183305.6
申请日2013-05-17
分类号C07J63/00;
代理机构北京天奇智新知识产权代理有限公司;
代理人王泽云
地址 610041 四川省成都市高新区大源北中街6号1栋2层1号
入库时间 2024-02-19 19:20:08
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2022-04-26
未缴年费专利权终止 IPC(主分类):C07J63/00 专利号:ZL2013101833056 申请日:20130517 授权公告日:20150930
专利权的终止
2015-09-30
授权
授权
2013-09-11
实质审查的生效 IPC(主分类):C07J63/00 申请日:20130517
实质审查的生效
2013-08-14
公开
公开
技术领域
本发明涉及一种在南蛇藤中提取雷公藤红素的方法,尤其涉及一种从南蛇 藤药材分离纯化雷公藤红素的方法。
背景技术
雷公藤红素又名南蛇藤素和南蛇藤醇,属于三萜类化合物,其分子式为 C29H38O4,分子量为450.61,结构式如下:
雷公藤红素性质稳定,是南蛇藤及雷公藤药材中的主要有效成分之一,主 要存在于根皮中,具有抗氧化、抗炎、抗病毒、抗生育活性、抗老年痴呆、抗 肿瘤活性及调节自身免疫等功效。目前对雷公藤红素的报道主要集中在中药雷 公藤的研究上,且主要研究的部位是根皮部位。
传统的雷公藤红素提取方法较多,但均存在以下缺陷中的一种或多种:原 料药材提取如果选用有机溶剂低级氯代烷提取大极性杂质少一些,但毒性大, 成本高;雷公藤红素在碱性醇中溶解度大,在中性和酸性试剂中溶解度小会析 出,但沉淀析出不彻底,产品损失量大,收率明显降低;硅胶柱层析分离纯化 雷公藤红素,如果洗脱体系等条件选不好,产品带会拖得比较宽,相近的杂质 会拖进去,产品不能被纯化出来,故需要进一步结晶等方法来纯化,纯化步骤 越多,成本越高,产品的收率越低,因为每一步的纯化都会有产品的损失,尤 其是到后期阶段,产品纯度越高,多次处理损失量越大。
专利号为“ZL200910144620.1”的发明专利公开了一种自南蛇藤根皮中提 取雷公藤红素的方法,其特点是以南蛇藤根皮为原料,先用低级氯代烷烃进行 提取,然后醇萃取,再过正相硅胶和反相硅胶柱,最后用乙醇-水结晶得到雷公 藤红素的纯品。其缺陷在于:用低级氯代烷提取虽然提取杂质少一些,但试剂 毒性大,消耗量大,后面的纯化工艺也较复杂,成本较高。
专利申请号为“201110026191.5”的发明专利申请公开一种雷公藤红素的制 备方法,雷公藤根用85-90%乙醇提取,然后活性炭脱色,浓缩至55-65%醇,滤 出沉淀,用碱性醇溶解,滤出不溶物,调PH=3-5,滤出沉淀,再用碱性醇溶解, 调中性,得沉淀用乙酸乙酯溶解,结晶,结晶物再用90-95%乙醇回流溶解活性 炭脱色,然后结晶得雷公藤红素纯品。其缺陷在于:虽然没有用到有毒试剂, 但要经过多次碱溶酸沉,产品收率会大大降低。
专利申请号为“201110234772.8”的发明专利申请公开了一种雷公藤红素的 用途及制备方法,以雷公藤地上及根为原料,95%乙醇提取,浓缩,浓缩液用乙 醇水混悬,上清液过吸附树脂,乙醇水梯度洗脱,洗脱液过硅胶柱,洗脱液回 收试剂后用乙醇进行结晶,得到雷公藤红素的纯品。其缺陷在于:纯化步骤不 够简化,雷公藤红素的极性偏小,如果找到合适的洗脱条件,可得到合格产品, 此发明中未具体表述洗脱剂的配比,只是过一般的中性硅胶柱,洗脱过程中不 易直接收集到合格产品,需要再进行重结晶,产品的损失较大。
发明内容
本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种工艺简单、收率高的从 南蛇藤药材分离纯化雷公藤红素的方法。
为了达到上述目的,本发明采用了以下技术方案:
本发明所述从南蛇藤药材分离纯化雷公藤红素的方法,包括以下步骤:
(1)从南蛇藤药材中获得浓缩液,用60-80目硅胶按1:1拌样,干燥成分 散状颗粒后得到颗粒状原料,备用;
(2)将200-300目硅胶置于体积比为25:1~15:1的二氯甲烷-甲醇溶液中湿 法装柱,分离柱直径为10~30cm,用体积比为25:1~15:1的二氯甲烷-甲醇溶液 平衡分离柱;平衡好后,按质量比为原料:硅胶=1:(2~4)的比例上颗粒状原料; 然后用洗脱剂进行梯度洗脱,洗脱剂由体积比为20:1~5:1的二氯甲烷-甲醇溶液 和氨水组成,二氯甲烷-甲醇溶液与氨水的体积比例为100:(0.1~0.5),洗脱剂 中还加入少量无水硫酸钠以脱去洗脱剂中的水分;收集洗脱液,得到雷公藤红 素粗溶液;将雷公藤红素粗溶液于40℃~60℃减压回收洗脱剂,得到雷公藤红 素纯品;将雷公藤红素纯品用甲醇或无水乙醇洗涤,得到雷公藤红素单体。
上述过程中,原料过碱性硅胶柱,采用二氯甲烷-甲醇体系洗脱,可一步实 现产品纯化,得到雷公藤红素纯品,避免了再用结晶方法纯化而导致工艺复杂、 收率低的问题。
具体地,所述步骤(2)中,将200-300目硅胶置于体积比为25:1、22:1、 20:1、18:1或15:1的二氯甲烷-甲醇溶液中湿法装柱,分离柱直径为15cm、18cm、 20cm、22cm或25cm,用体积比为25:1、22:1、20:1、18:1或15:1的二氯甲烷 -甲醇溶液平衡分离柱;平衡好后,按质量比为原料:硅胶=1:2、1:3或1:4的比 例上颗粒状原料;然后用洗脱剂进行梯度洗脱,洗脱剂中二氯甲烷-甲醇溶液与 氨水的体积比例为100:0.1、100:0.2、100:0.3、100:0.4或100:0.5;将雷公藤 红素粗溶液于40℃、45℃、50℃、55℃或60℃减压回收洗脱剂。
作为优选,所述步骤(1)中,从南蛇藤药材中获得浓缩液包括以下步骤:
①备料:将南蛇藤的地上藤本部分及地下根部分均粉碎成2~5mm的段;
②提取:用浓度为90%~100%的乙醇对粉碎好的南蛇藤段进行回流提取, 南蛇藤的质量与乙醇的体积的比例为1:(10~30),单位分别是千克和升,提取 温度为60℃~80℃,提取时间为5~10h;提取液于60℃~70℃减压回收乙醇, 得浓缩液。
所述步骤②中,用浓度为90%、92%、95%、98%或100%的乙醇对粉碎好 的南蛇藤段进行回流提取,南蛇藤的质量与乙醇的体积的比例为1:10、1:15、 1:20、1:25或1:30,单位分别是千克和升,提取温度为60℃、65℃、70℃、75 ℃或80℃,提取时间为5h、6h、7h、8h或10h;提取液于60℃、62℃、65 ℃、68℃或70℃减压回收乙醇,得浓缩液。
据资料显示:雷公藤红素在根皮部位含量最高,藤茎部位次之,本发明采 用南蛇藤地上藤本部分及地下根部分为原料,避免了资源的浪费,另外经测定, 雷公藤红素的含量较高,较理想,且相邻杂质也较少,南蛇藤包括藤茎及根可 作为实验原料;提取溶剂采用90%~100%乙醇,高浓度醇提取可把目标产品提 取出来,同时大极性及水溶性杂质较少,提取液的粘度较低,而目标产品雷公 藤红素的极性相对较小,可省去除掉大极性及水溶性杂质的粗分步骤,节约成 本,对原料直接过硅胶柱即可收集到目标产品。
本发明的有益效果在于:
本发明采用南蛇藤地上藤本部分及地下根部分为原料,合理利用了资源, 避免了资源的浪费,且雷公藤红素含量高而其他杂质较低,尤其没有相近的杂 质,纯化步骤容易很多;采用高浓度乙醇提取,目标成分提取彻底,而大极性 及水溶性杂质较少,简化了纯化步骤;硅胶柱纯化步骤采用碱性二氯甲烷-甲醇 体系作为洗脱剂,使产品色带集中,一步洗脱可得到雷公藤红素的纯品。
综上,本发明具有工艺简单、高效、环保、收率高、产量大的优点,适合 工业化生产。
附图说明
图1是本发明所述南蛇藤原料的HPLC图谱示意图;
图2是本发明实施例1中雷公藤红素单体的HPLC图谱示意图;
图3是本发明实施例2中雷公藤红素单体的HPLC图谱示意图;
图4是本发明实施例3中雷公藤红素单体的HPLC图谱示意图;
图5是本发明实施例4中雷公藤红素单体的HPLC图谱示意图;
图6是本发明实施例5中雷公藤红素单体的HPLC图谱示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步具体描述:
实施例1:
按以下步骤制备雷公藤红素单体:
(1)备料:将南蛇藤的地上藤本部分及地下根部分均粉碎成2~5mm的 段。
(2)用浓度为90%的乙醇对粉碎好的南蛇藤段进行回流提取,南蛇藤的 质量与乙醇的体积的比例为1:10,单位分别是千克和升,提取温度为60℃,提 取时间为5h;提取液于60℃减压回收乙醇,得浓缩液。
(3)将上述步骤(2)获得的浓缩液用60-80目硅胶按1:1拌样,干燥成 分散状颗粒后得到颗粒状原料,备用。
(4)将200-300目硅胶置于体积比为25:1的二氯甲烷-甲醇溶液中湿法装 柱,分离柱直径为15cm,用体积比为25:1的二氯甲烷-甲醇溶液平衡分离柱; 平衡好后,按质量比为原料:硅胶=1:2的比例上颗粒状原料;然后用洗脱剂进行 梯度洗脱,洗脱剂由体积比为20:1~5:1的二氯甲烷-甲醇溶液和氨水组成,二氯 甲烷-甲醇溶液与氨水的体积比例为100:0.1,洗脱剂中还加入少量无水硫酸钠以 脱去洗脱剂中的水分;收集洗脱液,得到雷公藤红素粗溶液;将雷公藤红素粗 溶液于40℃减压回收洗脱剂,得到雷公藤红素纯品;将雷公藤红素纯品用甲醇 或无水乙醇洗涤,得到雷公藤红素单体,为红色结晶状粉末。
色谱分析:将雷公藤红素单体用反相高效液相色谱柱分离(RP-HPLC),分 析液相检测,其纯度为98.6%。色谱柱填料为C18,粒度5um,流动相为含1% 醋酸的87%(体积百分比浓度)甲醇水溶液,检测波长为425nm,流速1ml/min。 本实施例的雷公藤红素的液相色谱图如图2所示,图形中杂波很少,最高峰在 12.754分钟,与图1中的最高峰时间13.008分钟很接近,且为峰型尖锐对称的 单一峰,表明本实施例的雷公藤红素的纯度很高。
实施例2:
按以下步骤制备雷公藤红素单体:
(1)备料:将南蛇藤的地上藤本部分及地下根部分均粉碎成2~5mm的 段。
(2)用浓度为92%的乙醇对粉碎好的南蛇藤段进行回流提取,南蛇藤的质 量与乙醇的体积的比例为1:15,单位分别是千克和升,提取温度为65℃,提取 时间为6h;提取液于62℃减压回收乙醇,得浓缩液。
(3)将上述步骤(2)获得的浓缩液用60-80目硅胶按1:1拌样,干燥成分 散状颗粒后得到颗粒状原料,备用。
(4)将200-300目硅胶置于体积比为22:1的二氯甲烷-甲醇溶液中湿法装 柱,分离柱直径为18cm,用体积比为22:1的二氯甲烷-甲醇溶液平衡分离柱; 平衡好后,按质量比为原料:硅胶=1:3的比例上颗粒状原料;然后用洗脱剂进行 梯度洗脱,洗脱剂由体积比为20:1~5:1的二氯甲烷-甲醇溶液和氨水组成,二氯 甲烷-甲醇溶液与氨水的体积比例为100:0.2,洗脱剂中还加入少量无水硫酸钠以 脱去洗脱剂中的水分;收集洗脱液,得到雷公藤红素粗溶液;将雷公藤红素粗 溶液于45℃减压回收洗脱剂,得到雷公藤红素纯品;将雷公藤红素纯品用甲醇 或无水乙醇洗涤,得到雷公藤红素单体,为红色结晶状粉末。
色谱分析:将雷公藤红素单体用反相高效液相色谱柱分离(RP-HPLC),分 析液相检测,其纯度为98.5%。色谱柱填料为C18,粒度5um,流动相为含1% 醋酸的87%(体积百分比浓度)甲醇水溶液,检测波长为425nm,流速1ml/min。 本实施例的雷公藤红素的液相色谱图如图3所示,图形中杂波很少,最高峰在 12.754分钟,与图1中的最高峰时间13.008分钟很接近,且为峰型尖锐对称的 单一峰,表明本实施例的雷公藤红素的纯度很高。
实施例3:
按以下步骤制备雷公藤红素单体:
(1)备料:将南蛇藤的地上藤本部分及地下根部分均粉碎成2~5mm的 段。
(2)用浓度为95%的乙醇对粉碎好的南蛇藤段进行回流提取,南蛇藤的 质量与乙醇的体积的比例为1:20,单位分别是千克和升,提取温度为70℃,提 取时间为7h;提取液于65℃减压回收乙醇,得浓缩液。
(3)将上述步骤(2)获得的浓缩液用60-80目硅胶按1:1拌样,干燥成分 散状颗粒后得到颗粒状原料,备用。
(4)将200-300目硅胶置于体积比为20:1的二氯甲烷-甲醇溶液中湿法装 柱,分离柱直径为20cm,用体积比为20:1的二氯甲烷-甲醇溶液平衡分离柱; 平衡好后,按质量比为原料:硅胶=1:3的比例上颗粒状原料;然后用洗脱剂进行 梯度洗脱,洗脱剂由体积比为20:1~5:1的二氯甲烷-甲醇溶液和氨水组成,二氯 甲烷-甲醇溶液与氨水的体积比例为100:0.3,洗脱剂中还加入少量无水硫酸钠以 脱去洗脱剂中的水分;收集洗脱液,得到雷公藤红素粗溶液;将雷公藤红素粗 溶液于50℃减压回收洗脱剂,得到雷公藤红素纯品;将雷公藤红素纯品用甲醇 或无水乙醇洗涤,得到雷公藤红素单体,为红色结晶状粉末。
色谱分析:将雷公藤红素单体用反相高效液相色谱柱分离(RP-HPLC),分 析液相检测,其纯度为98.9%。色谱柱填料为C18,粒度5um,流动相为含1% 醋酸的87%(体积百分比浓度)甲醇水溶液,检测波长为425nm,流速1ml/min。 本实施例的雷公藤红素的液相色谱图如图4所示,图形中杂波很少,最高峰在 12.754分钟,与图1中的最高峰时间13.008分钟很接近,且为峰型尖锐对称的 单一峰,表明本实施例的雷公藤红素的纯度很高。
实施例4:
按以下步骤制备雷公藤红素单体:
(1)备料:将南蛇藤的地上藤本部分及地下根部分均粉碎成2~5mm的 段。
(2)用浓度为98%的乙醇对粉碎好的南蛇藤段进行回流提取,南蛇藤的 质量与乙醇的体积的比例为1:25,单位分别是千克和升,提取温度为75℃,提 取时间为8h;提取液于68℃减压回收乙醇,得浓缩液。
(3)将上述步骤(2)获得的浓缩液用60-80目硅胶按1:1拌样,干燥成分 散状颗粒后得到颗粒状原料,备用。
(4)将200-300目硅胶置于体积比为18:1的二氯甲烷-甲醇溶液中湿法装 柱,分离柱直径为22cm,用体积比为18:1的二氯甲烷-甲醇溶液平衡分离柱; 平衡好后,按质量比为原料:硅胶=1:4的比例上颗粒状原料;然后用洗脱剂进行 梯度洗脱,洗脱剂由体积比为18:1~5:1的二氯甲烷-甲醇溶液和氨水组成,二氯 甲烷-甲醇溶液与氨水的体积比例为100:0.4,洗脱剂中还加入少量无水硫酸钠以 脱去洗脱剂中的水分;收集洗脱液,得到雷公藤红素粗溶液;将雷公藤红素粗 溶液于55℃减压回收洗脱剂,得到雷公藤红素纯品;将雷公藤红素纯品用甲醇 或无水乙醇洗涤,得到雷公藤红素单体,为红色结晶状粉末。
色谱分析:将雷公藤红素单体用反相高效液相色谱柱分离(RP-HPLC),分 析液相检测,其纯度为98.4%。色谱柱填料为C18,粒度5um,流动相为含1% 醋酸的87%(体积百分比浓度)甲醇水溶液,检测波长为425nm,流速1ml/min。 本实施例的雷公藤红素的液相色谱图如图5所示,图形中杂波很少,最高峰在 12.754分钟,与图1中的最高峰时间13.008分钟很接近,且为峰型尖锐对称的 单一峰,表明本实施例的雷公藤红素的纯度很高。
实施例5:
按以下步骤制备雷公藤红素单体:
(1)备料:将南蛇藤的地上藤本部分及地下根部分均粉碎成2~5mm的段。
(2)用浓度为100%的乙醇对粉碎好的南蛇藤段进行回流提取,南蛇藤的 质量与乙醇的体积的比例为1:30,单位分别是千克和升,提取温度为80℃,提 取时间为10h;提取液于70℃减压回收乙醇,得浓缩液。
(3)将上述步骤(2)获得的浓缩液用60-80目硅胶按1:1拌样,干燥成分 散状颗粒后得到颗粒状原料,备用。
(4)将200-300目硅胶置于体积比为15:1的二氯甲烷-甲醇溶液中湿法装 柱,分离柱直径为25cm,用体积比为15:1的二氯甲烷-甲醇溶液平衡分离柱; 平衡好后,按质量比为原料:硅胶=1:2的比例上颗粒状原料;然后用洗脱剂进行 梯度洗脱,洗脱剂由体积比为15:1~5:1的二氯甲烷-甲醇溶液和氨水组成,二氯 甲烷-甲醇溶液与氨水的体积比例为100:0.5,洗脱剂中还加入少量无水硫酸钠以 脱去洗脱剂中的水分;收集洗脱液,得到雷公藤红素粗溶液;将雷公藤红素粗 溶液于60℃减压回收洗脱剂,得到雷公藤红素纯品;将雷公藤红素纯品用甲醇 或无水乙醇洗涤,得到雷公藤红素单体,为红色结晶状粉末。
色谱分析:将雷公藤红素单体用反相高效液相色谱柱分离(RP-HPLC),分 析液相检测,其纯度为98.3%。色谱柱填料为C18,粒度5um,流动相为含1% 醋酸的87%(体积百分比浓度)甲醇水溶液,检测波长为425nm,流速1ml/min。 本实施例的雷公藤红素的液相色谱图如图6所示,图形中杂波很少,最高峰在 12.754分钟,与图1中的最高峰时间13.008分钟很接近,且为峰型尖锐对称的 单一峰,表明本实施例的雷公藤红素的纯度很高。
机译: 由草药材料制成的瓷器组合物及其制造方法技术领域本发明涉及一种由草药材料制成的瓷器组合物及其制造方法。
机译: 由草药材料制成的瓷器组合物及其制造方法技术领域本发明涉及一种由草药材料制成的瓷器组合物及其制造方法。
机译: 由草药材料制成的瓷器组合物及其制造方法技术领域本发明涉及一种由草药材料制成的瓷器组合物及其制造方法。