一种凉血愈伤方提取物及治疗皮肤烧伤的复方白藜芦醇凉血愈伤油制剂

摘要

本发明涉及医药技术领域，更具体地，涉及一种凉血愈伤方提取物及治疗皮肤烧伤的复方白藜芦醇凉血愈伤油制剂。所述的愈伤方提取物，由包含如下用量的原料提取得到：黄连30～50g，黄柏30～50g，黄苓30～50g，大黄20～40g，苦参20～40g，白鲜皮20～40g，蝉衣10～30g，海螵蛸5～15g，紫草50～80g，地榆20～40g，红花10～30g，地龙10～20条。再将愈伤方提取物与白藜芦醇复合，制备得到复方白藜芦醇凉血愈伤油制剂。所述的制剂，具有抗炎、清创作用，不仅能覆盖创面，减少感染，而且还能主动参与烧伤创面愈合，从而极大地改善了烧伤、创伤等创面的治疗效果。

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，更具体地，涉及一种凉血愈伤方提取物及治疗皮肤烧伤的复方白藜芦醇凉血愈伤油制剂。 

背景技术

皮肤烧伤是临床上常见疾病，常伴有并发症，往往给患者带来巨大的痛苦及生活上的不便，多影响患者的外在美观，严重者可威胁到患者的生命。因而，积极促进创面修复对挽救患者生命，减少并发症，减轻患者痛苦，防止瘢痕的形成，提高治疗效果等方面都具有重要的意义。目前，国内外已相继开发了不少治疗皮肤烧伤的药物及制剂，某些药物效果非常确切，为临床开发新药及制剂提供了很好的思路和基础。伴随着仿生学，化工合成技术的发展，使临床上开发更好的药剂材料成为可能。当前，用于治疗烧伤的药物制剂多为水剂、膏剂（或油浸膏）、散剂、喷雾剂、霜剂等，其生物利用度不高，感观性状较差，生物相容性不高，保湿及缓释效果差，使用不便等。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，为了克服现有技术中治疗烧伤的药物存在的上述不足，提供一种凉血愈伤方提取物及其制备方法。 

本发明所要解决的另一个技术问题是，提供一种含有上述凉血愈伤方提取物的治疗皮肤烧伤的复方白藜芦醇凉血愈伤油制剂及其制备方法。 

本发明所要解决的上述技术问题通过以下技术方案予以实现： 

一种凉血愈伤方提取物，由包含如下用量的原料提取得到：黄连30～50g，黄柏30～50g，黄苓30～50g，大黄20～40g，苦参20～40g，白鲜皮20～40g，蝉衣10～30g，海螵蛸5～15g，紫草50～80g，地榆20～40g，红花10～30g，地龙10～20条。 

本发明经过大量实验筛选出来的上述中药原料（凉血愈伤方），其中含有的多种生物碱及其余有机物都具有很好的消炎促愈合及抗氧化作用，此外还具有止血，活血化淤和增强创面抵抗力的作用。 

作为一种优选方案，上述凉血愈伤方提取物，由包含如下用量的原料提取得 到：黄连35～45g，黄柏35～45g，黄苓35～45g，大黄25～35g，苦参25～35g，白鲜皮25～35g，蝉衣15～25g，海螵蛸8～12g，紫草50～70g，地榆25～35g，红花15～25g，地龙12～16条。 

作为一种最优选方案，一种凉血愈伤方提取物，由包含如下用量的原料提取得到：黄连40g，黄柏40g，黄苓40g，大黄30g，苦参30g，白鲜皮30g，蝉衣20g，海螵蛸10g，紫草60g，地榆30g，红花20g，地龙15条。 

上述大黄可为生大黄或炮制过的大黄（大黄炭或酒大黄），上述的地龙可为鲜活地龙，或炮制过的地龙。 

上述凉血愈伤方提取物的制备方法为用体积分数为40%～80%的乙醇提取得到。 

作为一种优选方案，所述的凉血愈伤方提取物的制备方法，由包含如下步骤的方法制备得到： 

将黄连、黄柏、黄苓、大黄、苦参、白鲜皮、蝉衣、海螵蛸、紫草、地榆、红花和地龙按上述重量混合粉碎，加体积分数为40%～80%的乙醇2000～4000ml，控制温度为80～95℃，回流提取2～4次，每次1～3h，将滤液合并，浓缩即得。 

作为一种进一步优选方案，所述的凉血愈伤方提取物的制备方法，由包含如下步骤的方法制备得到： 

S1.将：黄连、黄柏、黄苓、大黄、苦参、白鲜皮、蝉衣、海螵蛸、紫草、地榆、红花和地龙按上述重量混合粉碎，加体积分数为40%～80%的乙醇2000～4000ml，控制温度为80～85℃，回流提取1～3h，过滤，得滤渣1和滤液1； 

S2.将滤渣1加入体积分数为40%～80%的乙醇2000～4000ml，控制温度为80～85℃，回流提取1～3h，过滤，得滤渣2和滤液2； 

S3.将滤渣2加入体积分数为40%～80%的乙醇2000～4000ml，控制温度为80～85℃，回流提取1～2h，过滤，得滤渣3和滤液3； 

S4.取滤液1于旋转蒸发仪中40℃旋转蒸发提取2～3h，得浓缩液1； 

S5.取滤液2于旋转蒸发仪中60℃旋转蒸发提取1～2h，得浓缩液2; 

S6.取滤液3，于旋转蒸发仪中70℃旋转蒸发提取1～2h，得浓缩液3； 

S7.取浓缩液1,2,3，混合后于旋转蒸发仪中80℃旋转蒸发，直至乙醇蒸发除去，即得。 

作为一种最优选方案，所述的凉血愈伤方提取物的制备方法，其特征在于， 由包含如下步骤的方法制备得到： 

S1.将：黄连、黄柏、黄苓、大黄、苦参、白鲜皮、蝉衣、海螵蛸、紫草、地榆、红花和地龙按上述重量混合粉碎，加体积分数为60%的乙醇3000ml，控制温度为80～85℃，回流提取1～3h，过滤，得滤渣1和滤液1； 

S2.将滤渣1加入体积分数为60%的乙醇3000ml，控制温度为80～85℃，回流提取2h，过滤，得滤渣2和滤液2； 

S3.将滤渣2加入体积分数为60%的乙醇3000ml，控制温度为80～85℃，回流提取1h，过滤，得滤渣3和滤液3； 

S4.取滤液1于旋转蒸发仪中40℃旋转蒸发提取2～3h，得浓缩液1； 

S5.取滤液2于旋转蒸发仪中60℃旋转蒸发提取1～2h，得浓缩液2; 

S6.取滤液3，于旋转蒸发仪中70℃旋转蒸发提取1～2h，得浓缩液3； 

S7.取浓缩液1,2,3，混合后于旋转蒸发仪中80℃旋转蒸发，直至乙醇蒸发除去，即得。 

一种治疗皮肤烧伤的复方白藜芦醇凉血愈伤油制剂，包含如下组分：本发明所述的凉血愈伤方提取物1000～2000ml；高山茶油1000～2000ml；冰片5～10g；白藜芦醇3.04～9.12mg；促渗剂：4～20ml；防腐剂：1～30ml。 

作为一种优选方案，所述的促渗剂为氮酮，防腐剂为维生素E。 

上述的复方白藜芦醇凉血愈伤油制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 

S1.将权利要求4～7提取后的滤渣干燥后用1000～2000ml高山茶油混合，控制温度为85～90℃，回流提取2～4h，过滤，得滤液4； 

S2.取滤液4和凉血愈伤方提取物于旋转蒸发仪中60～70℃旋转蒸发2h，加入冰片于上述混合液中搅拌溶解，得到凉血愈伤油； 

S3.取白藜芦醇溶于凉血愈伤油中，得到复方白藜芦醇凉血愈伤油；再加入促渗剂，防腐剂搅拌混合，即得。 

作为一种优选方案，所述的促渗剂为氮酮，防腐剂为维生素E。 

一种上述复方白藜芦醇凉血愈伤油制剂的制备方法为在凉血愈伤组方提取物加入冰片，搅拌溶解，然后加入白藜芦醇，最后加入氮酮、维生素E搅拌混合即得。 

本发明将凉血愈伤提取物中的中药原料通过乙醇，高山茶油两种有机溶剂， 分别进行蒸发回流提取，并通过旋转蒸发仪进行去杂浓缩，获得凉血愈伤方提取物，再在提取物中添加具有明显抗氧化，促进细胞修复的白藜芦醇制成改良后的油状制剂。研究表明：白藜芦醇具有抗损伤、抗氧化作用，并且一定剂量下能对动物细胞具有很强的促分裂和增殖的作用。在烧伤修复中能够很好的促进皮肤及其它组织细胞的生长和增殖，能正常调控各种细胞因子的表达，从而加速创面的愈合，提高创面修复的质量。另外，油性环境促进伤口愈合的优点是油与皮肤组织粘合度较高，确保药物持续作用于烧伤创面，并有利于药物特别是油溶性生物碱的吸收和利用，并能长时间保湿温润创面，促进创面愈合，并可防止结痂及瘢痕的形成。伤口在清创期有利于组织的修复，加速坏死组织的溶解及吸收。在肉芽组织形成期，可促进各种生长因子的释放，刺激毛细血管的再生成。在上皮化期，表皮细胞在油性保湿环境中移行的速度加快，且具有迅速修复真皮的作用。油性愈合在伤口愈合进程中，加速伤口愈合，缩短伤口的治疗时间，减少换药次数，节省敷料，减轻伤口的疼痛，并且降低了医疗费用，同时减少护理工作量。治疗烧伤的理想敷料应具备以下功能：防止水分和体液的过度散失；抵御细菌的入侵，防止感染；与创面贴合性良好，药物能够持续作用于创面，增加创面对药物的吸收利用，透气并使创面处于湿润但又没有积液的环境，生物相容性好，并最好能具有能促进伤口愈合的功能。 

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果： 

（1）本发明所述的制剂，具有抗炎、清创作用，能保持创面的油性环境，并创造抗氧化环境，促进毛细血管生成和生长因子的释放，不仅能覆盖创面，减少感染，而且还能主动参与烧伤创面愈合，从而极大地改善了烧伤、创伤等创面的治疗效果；（2）本发明从凉血愈伤方中提取有效成分，结合白藜芦醇，制成油性制剂，与同类药物制剂的膏剂、散剂、喷雾剂、霜剂等相比，具有中西医结合的特点；（3）本发明具有制备方法简单，使用方便，便于皮肤组织渗透和吸收，具有良好的皮肤相容性，对烧伤窗口具有保湿缓释效果，无毒无刺激，细腻美观，稳定安全等优点。 

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对发明不做任何形式的限定。 

实施例1 

称取黄连40g，黄柏40g，黄苓40g，大黄30g，苦参30g，白鲜皮30g，蝉衣20g，海螵蛸10g，紫草60g，地榆30g，红花20g，地龙15条，冰片6克，药材除冰片外其余混合粉碎，过10目的分子目，加入60%乙醇3000ml于圆底烧瓶中80～85℃回流提取3h。然后对药材粉末和乙醇混合物进行过滤，得滤渣1，滤液1。取滤渣1加入60%乙醇3000ml于圆底烧瓶中80～85℃回流提取2h。然后对滤渣和乙醇混合物进行过滤，得滤渣2，滤液2。取滤渣2加入60%乙醇3000ml于圆底烧瓶中80～85℃回流提取1h。然后对滤渣和乙醇混合物进行过滤，得滤渣3，滤液3。 

取滤渣3放在自然环境中通晾晒风烘干24h后，加入高山茶油1500ml于圆底烧瓶中90℃回流提取3.5h。然后对滤渣和高山茶油混合物进行过滤，得滤渣4，滤液4。取滤液1于旋转蒸发仪中40℃旋转蒸发提取2～3h，得浓缩液1。取滤液2于旋转蒸发仪中60℃旋转蒸发提取1～2h，得浓缩液2。取滤液3，于旋转蒸发仪中70℃旋转蒸发提取1～2h，得浓缩液3。取浓缩液1,2,3，混合后于旋转蒸发仪中80℃旋转蒸发，直至乙醇蒸发除去，得到约1500ml凉血愈伤方提取物。取滤液4和凉血愈伤方提取物于旋转蒸发仪中60～70℃旋转蒸发2h，将滤液4和凉血愈伤方提取物的混合物从蒸馏烧瓶中取出，并加入6g冰片于上述混合液中搅拌溶解，得到约1500ml凉血愈伤油。取白藜芦醇4.56mg溶于凉血愈伤油中，得到复方白藜芦醇凉血愈伤油。再加入氮酮约6.25ml，维生素E约10mg搅拌混合，即可使用。 

实施例2 

称取黄连30g，黄柏50g，黄苓30g，大黄40g，苦参40g，白鲜皮40g，蝉衣25g，海螵蛸15g，紫草80g，地榆40g，红花30g，地龙20条，冰片10克，药材除冰片外其余混合粉碎，过10目的分子目，加入80%乙醇4000ml于圆底烧瓶中80～85℃回流提取3h。然后对药材粉末和乙醇混合物进行过滤，得滤渣1，滤液1。取滤渣1加入80%乙醇4000ml于圆底烧瓶中80～85℃回流提取2h。然后对滤渣和乙醇混合物进行过滤，得滤渣2，滤液2。取滤渣2加入80%乙醇4000ml于圆底烧瓶中80～85℃回流提取1h。然后对滤渣和乙醇混合物进行过滤，得滤渣3，滤液3。 

取滤渣3放在自然环境中通晾晒风烘干24h后，加入高山茶油2000ml于圆底烧瓶中90℃回流提取3.5h。然后对滤渣和高山茶油混合物进行过滤，得滤渣4，滤液4。取滤液1于旋转蒸发仪中40℃旋转蒸发提取2～3h，得浓缩液1。取滤液2于旋转蒸发仪中60℃旋转蒸发提取1～2h，得浓缩液2。取滤液3，于旋转蒸发 仪中70℃旋转蒸发提取1～2h，得浓缩液3。取浓缩液1,2,3，混合后于旋转蒸发仪中80℃旋转蒸发，直至乙醇蒸发除去，得到约2000ml凉血愈伤方提取物。取滤液4和凉血愈伤方提取物于旋转蒸发仪中60～70℃旋转蒸发2h，将滤液4和凉血愈伤方提取物的混合物从蒸馏烧瓶中取出，并加入10g冰片于上述混合液中搅拌溶解，得到约2000ml凉血愈伤油。取白藜芦醇9.12mg溶于凉血愈伤油中，得到复方白藜芦醇凉血愈伤油。再加入氮酮约15ml，维生素E约30mg搅拌混合，即可使用。 

实施例3 

称取黄连30g，黄柏30g，黄苓30g，大黄20g，苦参20g，白鲜皮20g，蝉衣15g，海螵蛸5g，紫草40g，地榆20g，红花10g，地龙10条，冰片5克，药材除冰片外其余混合粉碎，过10目的分子目，加入40%乙醇2000ml于圆底烧瓶中80～85℃回流提取3h。然后对药材粉末和乙醇混合物进行过滤，得滤渣1，滤液1。取滤渣1加入40%乙醇2000ml于圆底烧瓶中80～85℃回流提取2h。然后对滤渣和乙醇混合物进行过滤，得滤渣2，滤液2。取滤渣2加入40%乙醇2000ml于圆底烧瓶中80～85℃回流提取1h。然后对滤渣和乙醇混合物进行过滤，得滤渣3，滤液3。 

取滤渣3放在自然环境中通晾晒风烘干24h后，加入高山茶油1000ml于圆底烧瓶中90℃回流提取3.5h。然后对滤渣和高山茶油混合物进行过滤，得滤渣4，滤液4。取滤液1于旋转蒸发仪中40℃旋转蒸发提取2～3h，得浓缩液1。取滤液2于旋转蒸发仪中60℃旋转蒸发提取1～2h，得浓缩液2。取滤液3，于旋转蒸发仪中70℃旋转蒸发提取1～2h，得浓缩液3。取浓缩液1,2,3，混合后于旋转蒸发仪中80℃旋转蒸发，直至乙醇蒸发除去，得到约1000ml凉血愈伤方提取物。取滤液4和凉血愈伤方提取物于旋转蒸发仪中60～70℃旋转蒸发2h，将滤液4和凉血愈伤方提取物的混合物从蒸馏烧瓶中取出，并加入5g冰片于上述混合液中搅拌溶解，得到约1000ml凉血愈伤油。取白藜芦醇3.5mg溶于凉血愈伤油中，得到复方白藜芦醇凉血愈伤油。再加入氮酮约4ml，维生素E约20mg搅拌混合，即可使用。 

实施例4 

实验方法 

一、小鼠热力烫伤模型制备与给药 

将30只小鼠按体重完全随机分为3组：阴性对照组、凉血愈伤油组和复方 白藜芦醇凉血愈伤油组，每组10只。用4%硫化钠脱去小鼠背毛，面积约7cm²。实验当天，戊巴比妥钠（30mg/kg）腹腔麻醉下，面积为2.25的方形铁片置于酒精灯外焰灼烧2min，将灼烧后的铁片接触背部脱毛部位，接触时间为4s，造成约深Ⅱ度烫伤模型。 

烫伤0.5h后分别在烫伤部位按组别涂抹给药，阴性对照组给予0.9%氯化钠溶液，凉血愈伤油组给予凉血愈伤油，复方白藜芦醇凉血愈伤油组给予复方白藜芦醇凉血愈伤油制剂（实施例1制备得到的制剂），每日2次，连续14天。 

二、小鼠化学烧伤模型制备与给药 

将30只小鼠按体重完全随机分为3组：阴性对照组、凉血愈伤油组和复方白藜芦醇凉血愈伤油组，每组10只。用4%硫化钠脱去小鼠背毛，面积约7cm2。实验当天，戊巴比妥钠（30mg/kg）腹腔麻醉下，将用2mol/L Naoh浸泡过的直径为2cm的圆形滤纸片紧贴于背部脱毛部位，4min后除去滤纸片，用清水彻底冲洗，造成约Ⅱ度烧伤模型。 

烫伤0.5h后分别在烫伤部位按组别涂抹给药，给药方法同热力烫伤各组。以药液覆盖整个创面为度，每日2次，连续14天。 

三、观察指标与方法 

3.1创面大体观察观察热力烫伤小鼠与化学烧伤小鼠第1天、第3天、第5天、第7天和第14天后创面水肿渗出程度，是否干燥，有无创周红肿及分泌物等。 

3.2小鼠创面面积测定给药后第1天、第3天、第5天、第7天和第14天用硫酸纸临摹小鼠创面,放在边长为1mm的小格子纸，计算创面范围的全部小格子面积，以创面范围内的全部小格子面积表示创面面积，通过创面面积减小程度反映创面愈合情况。 

3.3小鼠创面愈合率测定给药后第1天、第3天、第5天、第7天和第14天用硫酸纸临摹小鼠创面,放在边长为1mm的小格子纸，计算创面范围的全部小格子面积，此时计算出的面积为原始面积，后以同样的方法计算出创面愈合过种中未愈合的面积，并按下列公式计算伤后不同时相点的创面愈合率：愈合率=（原始创面面积-未愈合创面面积）/原始创面面积。 

3.4小鼠创面愈合时间以创面完全上皮化为愈合标准,并经创面病理切片HE染色证实。 

3.5统计学处理数据以x±s表示，对各组数据先进行方差齐性检验。如方差齐性，用SAS for windows8.1进行单因素方差分析;如果方差不齐，进行对数转化后，再进行方差分析。 

四、结果 

本发明具有中西医结合的优点，对治疗烧烫伤的传统中药油制剂——凉血愈伤油有进一步改良。实验数据显示：首先从创面大体观察结果看，复方白藜芦醇凉血愈伤油组的炎症反应在伤后第7天均比阴性对照组弱，创面皮肤肿胀消失、痂下渗出分泌物减少及创周红肿减轻，创面炎症范围相对较小，愈合面积较大，毛囊再生明显。表明复方白藜芦醇凉血愈伤油具有减轻炎症反应作用。其次从创面面积看，从表2中可看出化学烧伤小鼠的创面面积从第1天起，复方白藜芦醇凉血愈伤油组与阴性对照组相比创面面积明显减小（p<0.05），创面面积达到293.3±38.32mm²。由此可见，复方白藜芦醇凉血愈伤油烧伤早期的治疗效果显著。从第3天起，复方白藜芦醇凉血愈伤油组与阴性对照组相比创面面积均明显减小（凉血愈伤油p<0.05，复方白藜芦醇凉血愈伤油p<0.01），创面面积分别达到196.89±143.18mm²、184.89±56.31mm²。由此可见，在烧伤创面愈合过程中两种药物均有一定的治疗效果。而到第7天，凉血愈伤油组与阴性对照组比较创面面积差异性不大(p>0.05)；复方白藜芦醇凉血愈伤油组与阴性对照组相比依然维持在差异较大的水平（p<0.01），并且在第14天前已全部愈合。因此从创面面积动态的变化可以判断在凉血愈伤油和复方白藜芦醇凉血愈伤油治疗皮肤烧伤具有较好地促进皮肤生长，有较好的创面愈合效果。而复方凉血愈伤油则具有短期的愈合效果，但稳定性不好，在热力烧伤的小鼠中其短期愈合效果并不明显（结果可见表1）。再次从愈合率看，从表4中可看出，化学烧伤小鼠的愈合率从第3天到第5天，凉血愈伤油组和复方白藜芦醇凉血愈伤油组与阴性对照组相比愈合率显著增大（凉血愈伤油p<0.05，复方白藜芦醇凉血愈伤油p<0.01），在第3天愈合率分别达到0.4857±0.3912、0.3887±0.1628，第5天愈合率分别达到0.8179±0.09523、0.8098±0.1037。由此可见，在烧伤治疗早期两种药物均有一定的治疗效果。而到第7天，凉血愈伤油组与阴性对照组相比愈合率差异性不大（p>0.05）;复方白藜芦醇凉血愈伤油组与阴性对照组相比依然维持在差异较大的水平（p<0.05），并且在第14天前愈合率已达100%。而在热力烫伤的小鼠中，复方凉血愈伤油的治疗效果也是最明显的（结果可见表3），由此可见，复方白藜芦 醇凉血愈伤油的治疗效果更佳。最后从创面愈合时间来看，从表5中可看出，热力烫伤小鼠凉血愈伤油组和复方白藜芦醇凉血愈伤油组的愈合时间均比阴性对照组明显缩短（P<0.05），愈合时间分别为24.6±2.07天、22.6±1.67天，其中复方白藜芦醇凉血愈伤油组愈合时间缩短更明显（p<0.01）。综上所述，本发明制备得到的复方白藜芦醇凉血愈伤油制剂具有明显的促进烫烧伤皮肤创面愈合、抑制皮肤炎症反应的作用，且作用强于传统的凉血愈伤油。 

表1热力烫伤各组小鼠不同时间皮肤烧伤创面面积比较（mm2,x s） 

注：与阴性对照组对照比较：*P<0.05,**P<0.01 

表2化学烧伤各组小鼠不同时间皮肤烧伤创面面积比较（mm2,x s） 

注：与阴性对照组对照比较：*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001 

表3热力烫伤各组小鼠不同时间皮肤烧伤愈合率比较（x s） 

注：与阴性对照组对照比较：*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001 

表4化学烧伤各组小鼠不同时间皮肤烧伤愈合率比较（x s） 

注：与阴性对照比较：*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001 

表5热力烫伤各组小鼠愈合天数的比较（day,x s） 

注：与阴性对照组对照比较：*P<0.05,**P<0.01 

表6化学烧伤各组小鼠愈合天数的比较（day,x s） 

注：与阴性对照组对照比较：*P<0.05,**P<0.01。