含有吸收促进剂的肠溶安络小皮伞糖蛋白微球在制备镇痛抗炎的药物中的应用

摘要

本发明公开了含有吸收促进剂的安络小皮伞糖蛋白肠溶微球的制备方法及其在制备镇痛抗炎的药物中的新用途。该微球可保护安络小皮伞糖蛋白在胃中不被溶解，而且可在肠道环境下迅速释放。同时，该微球还含有吸收促进剂，可促进安络小皮伞糖蛋白在肠道中的吸收，提高口服时安络小皮伞糖蛋白的药理作用。

说明书

技术领域

本发明是关于含有吸收促进剂的安络小皮伞糖蛋白肠溶微球的制备方 法，以及以该微球为活性成分的药物组合物在镇痛和抗炎方面的用途 ,属于中药技术领域。

背景技术

据不完全统计，目前世界疼痛的发病率大约为35％～45％，老年人的 发病率较高，约为75％～90％。在以往对慢性疼痛的调查中发现：35 ％的美国人患有慢性疼痛， 29％的加拿大人患有慢性疼痛，患有慢 性疼痛的平均年数是10.7年。在对中国六大城市的慢性疼痛调查中发 现：成人慢性疼痛的发病率为40％，老年人慢性疼痛的发病率为65％ ～80％。近年来，用于止痛的医疗费用在逐年上升。因此，疼痛不仅 是一个世界范畴的医学问题，也是目前我国主要的健康问题之一。炎 症是十分常见而又重要的基本病理过程，体表的外伤感染和各器官的 大部分常见病和多发病（如疖、痈、肺炎、肝炎、肾炎等）都属于炎 症性疾病。炎症疾病也是影响人类健康的重要因素。

安络小皮伞（Maramins androsaceus Fr.）又称鬼毛针，为白蘑科 小皮伞属真菌。其安络小皮伞菌丝体为安络小皮伞的菌种经发酵获得 。在我国医药市场上已有销售“安络痛”是由安络小皮伞菌丝体经乙 醇提取制成的制剂，该制剂通经活络，活血止痛。用于坐骨神经痛、 三叉神经痛、风湿性关节痛等疾病的疾病的治疗。多年的临床应用和 研究发现，安络痛尚主要存在以下不足之处：1、有效成分不清楚：一 直以来，人们把一些脂溶性的小分子化合物作为安络小皮伞有效成分 ，忽略了大分子化合物的研究，致使临床上的一些现象无法解释；2、 质量标准低：由于有效成分不明确，使得制剂标准中缺少含量测定项 ，影响药品的质量控制；3、提取工艺不合理：目前制剂的工艺没有充 分考虑有效部位的提取、分离，使得提取物中占有大量的不溶物及无 效物质，给患者服用带来了不便。4、生物利用度低：我们研究确定安 络小皮伞镇痛作用的有效成分为大分子的糖蛋白类化合物，该类化合 物口服给药时，容易在胃中被胃蛋白酶降解，使生物利用率降低，严 重影响该类成分的疗效。

为了改善安络痛的上述缺陷，提高其生物活性，我们对其工艺进行了 改进，首先通过无水乙醇脱脂、水提取、再经大孔树脂纯化的方法得 到安络小皮伞中真正有镇痛抗炎活性的成分安络小皮伞糖蛋白，为了 进一步提高安络小皮伞糖蛋白的生物活性，通过药剂学的方法，加入 吸收促进剂，制得含有吸收促进剂的安络小皮伞糖蛋白微球。同时， 为了防止胃中蛋白酶将该蛋白水解，采用肠溶包衣材料进行包衣得肠 溶安络小皮伞糖蛋白微球。通过这一工艺得到的安络小皮伞糖蛋白微 球，克服了前述安络痛的缺陷。整个工艺过程中除乙醇外没有使用有 机试剂，具有操作简单、成本低，纯度高、活性强的特点。本发明中 所使用的吸收促进剂可以是胆酸钠、吐温或司盘类表面活性剂。

本发明完成前未发现有关含有吸收促进剂的肠溶安络小皮伞糖 蛋白微球镇痛抗炎方面的应用，本发明具有广泛的应用前景。

发明内容

本发明的目的之一是明确了安络小皮伞菌丝体或子实体中的用于镇痛 消炎的活性成分主要为糖蛋白类，而非脂溶性的小分子化合物。

本发明的目的之二是通过研究确定了含有吸收促进剂的肠溶安络小皮 伞糖蛋白微球的制备工艺，该工艺所需设备简单、可操作性强，通过 该工艺得到的糖蛋白微球直径分布均匀，平均粒径和跨距分别为：6. 5μm, 跨距为 11μm。微球含药量测定结果表明糖蛋白的含量为70 %以上。

本发明的目的之三是将糖蛋白本身具有的特性和微球本身具有的优势 巧妙地结合在一起，通过微球的特点将该糖蛋白本身固有的活性更有 效地发挥出来，吸收促进剂的加入可促进该糖蛋白的吸收，提高生物 利用度。而且通过用PH55包衣使该糖蛋白免于胃中蛋白酶的破坏。本 发明中在人工胃液和水溶液中的溶解性能实验也表明此肠溶微球在水 中可迅速溶解，而在人工胃液中不溶，达到了预想包衣效果，提高口 服时安络小皮伞糖蛋白的药理作用。

本发明的目的之四是含有吸收促进剂的肠溶安络小皮伞糖蛋白微球在 镇痛和抗炎方面的用途。虽然在“安络痛”也具有该用途，但本发明 的工艺得到的成分主要是大分子糖蛋白，而“安络痛”的工艺得到的 是小分子脂溶性物质，两者的物质基础是完全不同的。药效学实验的 结果也表明大分子糖蛋白的活性比“安络痛”好。特别是加入 了吸收促进剂的糖蛋白微球，其镇痛和抗炎的活性不仅明显高于安络 痛，而且与大分子糖蛋白相比，活性具有显著的差异，因此，本发明 的含有吸收促进剂的安络小皮伞糖蛋白肠溶微球具有实质的技术进步 。

本发明的目的之五是提供含有吸收促进剂的肠溶安络小皮伞糖蛋白微 球的药物制剂。特别是胶囊剂、片剂、散剂等各种口服剂型。

本发明的内容是能过以下技术方案来实施的：

一、含有吸收促进剂安络小皮伞糖蛋白肠溶微球的制备：

1.安络小皮伞糖蛋白的制取

取安络小皮伞菌丝体或子实体5kg，加无水乙醇回流提取1小时，滤过 ，反复提取2次，残渣加10倍量水，加热提取1小时，滤过，反复提取 2次，合并滤液，浓缩至10,000毫升，浓缩液上大孔树脂经水洗至无色 后，再用95%的乙醇洗脱至无色，得到95%乙醇洗脱部分，回收乙醇， 真空干燥，得安络小皮伞糖蛋白650g。

2．含吸收促进剂的安络小皮伞糖蛋白微球的制备

取安络小皮伞糖蛋白50g，加入10g胆酸钠为吸收促进剂, 加300ml水 , 充分搅拌使完全溶解。取无水乙醇1000ml，在容器中搅拌（2500- 5000转/分钟）下，加入安络小皮伞糖蛋白与胆酸钠的混合溶液，搅拌 五分钟，开始加热该混悬溶液，在15-20分钟内使该混悬液达到沸腾， 保持沸腾状态至悬浮液体积减少至400ml，加入无水乙醇600ml,继续加 热、搅拌，至悬浮液体积达到400ml。停止加热，继续搅拌至悬浮液降 到室温。放置，待沉降后倾去上清，加入200ml 无 水乙醇洗涤，倾去乙醇，制得含吸收促进剂的安络小皮伞微球，干燥 ，放置备用。 

3.肠溶微球的制备

取含吸收促进剂的安络小皮伞微球50g, 加入到容器中，加入无水乙 醇500ml,搅拌（1000-1500转/分）下，加入羟丙甲纤维素邻苯二甲酸 脂（PH55）10g, 加热至PH55完全溶解，停止加热，继续搅拌4小时， 放置，沉降。倾去上清，沉淀中加入200ml 无水乙醇，搅拌10分钟（ 1000-1500转/分），离心（2000rpm）2分钟，弃去上清。沉淀置于适 当容器中自然干燥。制得含吸收促进剂的安络小皮伞糖蛋白肠溶微球 （以下简称肠溶微球）。 

二、关于安络小皮伞糖蛋白的说明

通过对原料药中有效成分的提取、分离得到了安络小皮伞糖蛋白，其 基本化学表征为：该化合物为糖蛋白，其糖与蛋白是以化学键结合形 式存在的 ；组成糖分析结果表明，该化合物主要由葡萄糖、甘露糖 两种单糖组成， 蛋白质分析结果表明是由丝氨酸等14种氨基酸组成 。 

三、含有吸收剂的安络小皮伞糖蛋白微球理化性质分析结果

1、微球直径分布范围

取制得的肠溶微球适量，加入0.01M的盐酸溶液，震摇，充分混匀。以 LS-13320MW激光粒度分析仪（Beckman-Coulter）测定，得粒径分布范 围。平均粒径和跨距分别为：6.5μm, 跨距为 11μm。

2、微球含药量测定

以苯酚-硫酸法测定肠溶微球中安络小皮伞糖蛋白的含量。以安络小皮 伞糖蛋白为对照品。

对照品溶液的制备：精密称定充分干燥的安络小皮伞糖蛋白15.38mg， 置100ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每一毫升中 含安络小皮伞糖蛋白153.8μg）。

标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml,分别置于具塞试管中。各补水至1.0ml，再加入5%苯酚水溶液1.0m l，旋涡混合，快速加入浓硫酸5.0ml，搅匀，冷却至室温。以0管为空 白，照分光光度法，在490nm波长处测定吸收度，以安络小皮伞糖蛋白 微克数对应的吸收度，计算回归方程。

样品测定：精密称定干燥的肠溶微球20mg, 置100ml 量瓶中，加水 溶液至刻度，摇匀，即得样品溶液（每一毫升中含肠溶微球200μg） 。

分别取样品0.4 和0.8ml, 置于具塞试管中。各补水至1.0ml。以下 操作按标准曲线，测定吸收度，根据回归方程计算微球中安络小皮伞 糖蛋白的含量为70%。

3、在人工胃液和水溶液中的溶解性能

取肠溶微球10mg, 置100ml 量瓶中，加水溶液至刻度，摇匀，即得 样品水溶液（每一毫升中含肠溶微球100μg）。观察微球溶解情况和 立刻离心后测定上清溶液在280nm处的吸收度（以水为空白），并每隔 30分钟测定一次。另取肠溶微球10mg, 置100ml 量瓶中，加人工胃 液至刻度，摇匀，即得样品溶液（每一毫升中含肠溶微球100 μg）。观察微球溶解情况和离心后立刻测定上清溶液在280nm处的吸 收度（以人工胃液为空白），并每隔30分钟测定一次。另取安络小皮 伞糖蛋白配制成每一毫升中含70μg的溶液，测定吸收度。结果如表1 .

表1 肠溶微球在不同溶液中溶解时间

表1的结果表明，肠溶微球在水中迅速溶解，溶液变为澄清；肠溶微球 在人工胃液中未见溶解，直至过夜，溶液仍为混悬液。吸收度测定结 果表明，肠溶微球在水溶液中迅速溶解，安络小皮伞糖蛋白基本全部 释放，表明该微球在肠道中释放良好；在人工胃液中除极少量未包裹 完全的安络小皮伞糖蛋白迅速释放外，绝大部分被PH55包裹，在胃中 不被释放。

三、含有吸收剂的安络小皮伞糖蛋白微球药效学实验

经过药理学实验筛选，本发明的肠溶微球具有镇痛和抗炎的作用，下 述的药理实验证实了含有吸收剂的安络小皮伞糖蛋白微球具有镇痛、 抗炎的药理作用。

1．安络小皮伞糖蛋白微球的抗炎作用

取体重250—300g威斯塔种大白鼠50只，按文献大鼠足肿胀法进行实验 。以消炎痛为阳性药，安络痛为市售安络小皮伞的制剂，安络小皮伞 糖蛋白和肠溶微球为按所述方法自制。用0.1ml 10%鸡蛋清 溶液致炎，结果见表2。

表2  安络痛、安络小皮伞糖蛋白及其肠溶微球对抗炎症的作用

*，**：与空白对照组比较P<0.05;  P<0.01。  ＋:含安络小皮伞 糖蛋白量。

由表2可见，阳性药消炎痛抗炎作用明显；安络痛仅有抗炎的趋势，但 无统计学意义；安络小皮伞糖蛋白在致炎后1小时、3小时表现出较好 地对抗炎症的作用，与空白对照组比较具有显著性差异；而其肠溶微 球抗炎作用明显高于安络痛和安络小皮伞糖蛋白，1小时和3小时抗炎 作用与空白比较具有极显著差异，并且作用持续时间明显延长。

2. 安络小皮伞糖蛋白和其肠溶微球的镇痛作用

取体重20—30g 昆明种小白鼠50只，分空白对照组、阳性药组（阿司 匹林）、安络痛组、安络小皮伞糖蛋白组、肠溶微球组四组，雌雄各 半。样品同抗炎试验。给药组口服安络痛、安络小皮伞糖蛋白和肠溶 微球（300mg/kg, 按含糖蛋白计算），阿司匹林100mg/kg, 对照组 给等量生理盐水，给药结束后一小时，各组腹腔注射0.6%的醋酸，20 0μl/只，观察20分钟扭体次数。结果见表3。

表3  安络小皮伞糖蛋白及其肠溶微球的镇痛作用

*， **：与空白组比较 P<0.05; P<0.01。

结果表明，阳性药镇痛作用明显；安络痛具有镇痛作用的趋势，但无 统计学意义；安络小皮伞糖蛋白具有镇痛作用，与空白组比较，镇痛 作用具有显著差异；肠溶微球的镇痛作用明显好于糖蛋白，与空白对 照组比较具有极显著性差异。

上述药效学结果表明含有吸收促进剂的安络小皮伞糖蛋白微球具有镇 痛和抗炎的活性，其活性无论与安络痛相比，还是与安络小皮伞糖蛋 白相比，均具有显著性差异。

本发明是通过如下的实验施例得以实现的，但本发明不受实施例的任 何限制。

实施例1（胶囊剂）

含吸收促进剂的肠溶安络小皮伞糖蛋白微球100g ，药用淀粉适量， 混合均匀，装入1号胶囊，制成1000粒，即得。每次3粒、每日2次。

实施例２（片剂）

含吸收促进剂的肠溶安络小皮伞糖蛋白微球100g，药用淀粉适 量，糊精适量，混合均匀，制粒，干燥，整粒，干燥，加入润滑剂适 量，压片，制成1000片，即得。每次3片、每日2次。

实施例3（散剂）

含吸收促进剂的肠溶安络小皮伞糖蛋白微球300g，蔗糖适量，混合均 匀，包装，制成1000袋，每次1袋，一日2次。