一种拮抗杨梅溃疡病菌的黄三素链霉菌

摘要

本发明涉及植物病害的生物防治，属于植物保护学科中的生物防治研究与应用领域。本发明公开了一株拮抗杨梅溃疡病菌黄三素链霉菌（Streptomyces flavotricini）YZF3，它的保藏编号为CGMCC No.7529。该菌株能有效抑制杨梅溃疡病菌，效果明显优于叶枯唑，与农用链霉素相当，有防治杨梅溃疡病的潜力。与化学药剂相比，使用YZF3菌株防治植物病害没有环境污染、农药残留等问题。

说明书

技术领域

本发明涉及植物病害的生物防治，属于植物保护学科中的生物防治研究与应用领域。

背景技术

杨梅溃疡病是许多杨梅种植区的重要病害，极易造成树势衰弱，影响杨梅产量和品质。 目前防治该病害的方法主要是利用化学药剂叶枯唑和农用链霉素涂抹，其他药剂防效均不够 理想。从病害防治角度，仅两种药剂用于病害防治不够丰富，还需开发其它有效药剂供农业 生产选择使用。为了给研制新型生物农药提供基础，丰富防治杨梅溃疡病的药剂种类，本发 明中从土壤中筛选了一株放线菌YZF3菌株，其能有效抑制杨梅溃疡病菌（Pseudomonas  syringae pv.myricae）生长。经鉴定该生防菌为黄三素链霉菌（Streptomyces flavotricini）。该 菌株对杨梅溃疡病菌的抑制效果与农用链霉素相当，明显优于化学药剂叶枯唑。因此可以用 黄三素链霉菌YZF3研发新型生物农药，用于杨梅溃疡病的生物防治。

发明内容

针对防治杨梅溃疡病的药剂种类少问题，筛选了生防微生物黄三素链霉菌YZF3。该菌株 对杨梅溃疡病菌的抑制效果与农用链霉素相当，优于化学药剂叶枯唑。目前已完成对病菌的 抑制效果测定和种类鉴定。

自然界蕴含着许多有益微生物，从环境中大量筛选，得到生防微生物是生物药剂研制的 基础工作，也是业内惯用的工作模式。放线菌是一类产生抗生素的菌类，以杨梅溃疡病菌为 目标细菌，从土壤中筛选能抑制该细菌的放线菌，是一种效率较高的筛选生防微生物的方法。

本发明公开了一种拮抗杨梅溃疡病菌黄三素链霉菌（Streptomyces flavotricini）YZF3，它 的保藏编号为CGMCC No.7529。

黄三素链霉菌YZF3菌株能有效抑制杨梅溃疡病菌，效果明显优于叶枯唑，与农用链霉 素相当，有防治杨梅溃疡病的潜力。与化学药剂相比，使用YZF3菌株防治植物病害没有环 境污染、农药残留等问题。

附图说明图1是黄三素链霉菌YZF3菌株对杨梅溃疡病菌的拮抗效果。

图2是YZF3菌株的菌体形态（×1000）。

本发明所述YZF3菌株于2013年4月28日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， （北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所），分类命名为黄三素链霉菌 （Streptomyces flavotricini），保藏编号为CGMCC7529。

具体实施方式

（1）采集土样，去除石子等大颗粒物质，碾碎风干，过筛。

（2）20g样品放置于200mL无菌水中，充分震荡，以此液为母液，梯度稀释。

（3）取10^-6稀释液0.1mL涂布高氏一号平板。

（4）28℃条件下培养7天。

（5）分离不同颜色、性状的单菌落，保存。

（6）将杨梅溃疡病菌（菌株由本实验室从慈溪市杨梅园病株上分离获得，经形态和分子 生物学鉴定为杨梅溃疡病菌）与30℃的细菌培养基混匀，冷却后制成平板，在平板上打孔， 挖去琼脂块，在孔中滴入分离菌株的菌悬液20μL，28℃培养，观察抑菌圈大小。（7）保留有 抑菌圈的菌株，进行单菌落纯化。

（8）连续转代多代，用（6）方法再测菌株的抑菌圈，确定拮抗稳定性。筛筛选出的菌 株命名为YZF3。如图1。图中培养皿中对照孔（左下孔）周围病菌已长满，其它3个孔滴加了YZF3 菌液，在其周围形成了明显的空白圈即抑菌圈，说明YZF3菌株发酵过程中能产生抑制物质使周围的病菌 不能生长。

（9）对YZF3菌株进行种类鉴定。

（10）采用生理生化（形态特征、培养特征和生理生化特征）和分子生物学方法（16S rRNA 基因序列分析）进行菌株种类鉴定。

形态特征：革兰氏染色阳性；在ISP2琼脂、ISP3琼脂、ISP4琼脂、ISP5琼脂及Bennett’s 琼脂培养基上生长7天后，基内菌丝发育良好，无横隔，不断裂；气生菌丝生长良好、多分 支；孢子丝直、柔曲，孢子圆形或卵圆形、光滑（图2）。

培养特征：菌株YZF3的培养特征见表1：

表1菌株YZF3的培养特征

培养基 基内菌丝 气生菌丝 可溶性色素 Bennett’s培养基 淡黄色 灰白色 无 ISP2培养基 淡黄色 粉红色至白色 无 ISP3培养基 淡黄色 粉红色 无 ISP4培养基 淡黄色 粉红色至白色 无 ISP5培养基 淡黄色 无气丝 无

生理生化特征：菌株的生理生化特征见表2。

表2菌株YZF3的生理生化特征

+，阳性；-，阴性

以上特征与链霉菌一致

16S rRNA基因序列分析：提取YZF3全基因组，用16S rRNA通用引物扩增，扩增的基因序 列测序后在GenBank中进行Blast比较，结果表明菌株YZF3属于链霉菌属；与目前发表的 相关菌株相比，菌株YZF3的16S rRNA基因序列与黄三素链霉菌（Streptomyces flavotricini） 的序列相似性很高，为99.8%。YZF3菌株为黄三素链霉菌。