氢化吡啶4,3-b吲哚类化合物的制备方法

摘要

本发明涉及氢化吡啶[4,3-b]吲哚类化合物的制备方法，具体涉及2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚或其二盐酸盐的制备方法，它包括如本申请中所述的步骤a)～h)。

说明书

本申请是申请号为201080012596.7、申请日为2010年3月29日、 发明名称为“含有四氢吡啶[4,3-b]吲哚衍生物的缓释组合物及该衍生 物的制备方法”的专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及氢化吡啶[4,3-b]吲哚类化合物的制备方法。更具体地 说，本发明涉及2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙 基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚（式I化合物，Dimebolin）或其二盐酸盐的制 备方法，其药用盐最优选为2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡 啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚二盐酸盐（Dimebon）（式II化合物）

本发明还概况地涉及上述缓释组合物如缓释口服剂型的制备方 法，所述可口服剂型优选缓释颗粒剂/多重颗粒剂（multiparticulates） 和压制的多重颗粒剂，例如直径在0.1-0.3mm范围的多重颗粒剂；本 发明方法以高产率提供多重颗粒剂。

背景技术

早在1969年，报道了2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6甲基-3-吡啶 基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚（式I化合物，Dimebolin）和2,3,4,5-四 氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚二盐 酸盐（Dimebon）具有抗组胺和抗过敏的作用（US3484449），1983 年，前苏联将其作为抗过敏的药物上市用于临床（Farmakologiia i Toksikologiia46(4):27-29）；并且一直研究该化合物对神经的保护作 用和对认知功能障碍的改善作用（Vestnik Rossiiskoi Akademii Meditsinskikh Nauk(9):13-17）。

近年来，研究表明Dimebolin具有口服的生物活性，在阿尔茨海 默症和亨廷顿症的临床前试验研究表明本品具有抑制脑细胞死亡的作 用，能够增强健康人和神经退行性病变患者的认知能力，能够治疗狗 的认知功能障碍综合征（US08036400），研究表明Dimebolin能够对 上述的和其他的神经退行性疾病有潜在的治疗作用，（Annals of the New York Academy of Sciences(939):425-435）。

研究还发现Dimebolin对阿尔茨海默症患者具有明显的疗效； 2000年，俄罗斯在阿尔茨海默动物模型上开展的研究表明Dimebolin 对阿尔茨海默症具有明显的疗效（Bulletin of Experimental Biology and Medicine129(6):544-546）；近期，在最初的6个月人的II期临 床研究结果表明Dimebolin跟安慰剂相比较具有明显地改善阿尔茨海 默症患者的作用，现正在开展III期的双盲临床试验（Antihistamine Shows Promise in Treating Alzheimer’s",New York Times (2007-06-11)）。

2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶 [4,3-b]吲哚（式I化合物）和2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3- 吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚二盐酸盐（Dimebolin，Dimebon） 是一类新的具有治疗认知功能障碍综合征、阿尔茨海默症、帕金森氏 综合征、亨廷顿氏综合征、老年性痴呆症等神经退行性疾病的化合物， 目前开发的用于人临床试验的制剂为含有2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基 -5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚（式I化合物）5mg， 20mg二种规格的制剂，其中20mg规格的制剂推荐使用方法为一日三 次，即该制剂的活性可持续8小时，因此需要每天服用三次。

而Dimebolin是治疗具有治疗认知功能障碍综合征、阿尔茨海默 症、帕金森氏综合征、亨廷顿氏综合征、老年性痴呆症等神经退行性 疾病的化合物，其现有的药物组合物为所谓“一日三次”的制剂，这对 于认知功能障碍综合征、阿尔茨海默症、帕金森氏综合征、亨廷顿氏 综合征、老年性痴呆症等神经退行性疾病的患者而言，服药次数过多 不利于患者的记忆，很可能患者因为疾病因素导致漏服药品，从而不 利于患者的治疗；同时，一天服药次数过多也不方便患者的陪护人员。

发明内容

本发明的目的是提供含2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡 啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚（式I化合物）或者其药用盐作为活性 成分的缓释可口服单位剂型，其药用盐最优选为2,3,4,5-四氢-2,8-二甲 基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚二盐酸盐 （Dimebon）。该剂型的有效活性持续时间为24小时或者更长时间， 因此适合于每日一次服用，可以大大方便认知功能障碍综合征、阿尔 茨海默症、帕金森氏综合征、亨廷顿氏综合征、老年性痴呆症等神经 退行性疾病的患者及其陪护人员，避免患者漏服导致的治疗作用减弱， 更有利于患者的治疗和恢复。

本发明提供含2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙 基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚（式I化合物）或者其药用盐作为活性成分的 缓释组合物如缓释口服单位剂型，其药用盐最优选为2,3,4,5-四氢-2,8- 二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚二盐酸盐 （Dimebon）。该剂型的有效活性持续时间为24小时或者更长时间， 因此适于每日服用一次。

本发明第一方面涉及一种缓释组合物，其含有以缓释组合物重量 计，10-60%的式I2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙 基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚或者其药用盐，选自氢化植物油(俗称奶精)、 氢化蓖麻油、蜂蜡、巴西棕榈蜡、微晶蜡或单硬脂酸甘油酯的疏水性 易熔载体或稀释剂，0.01-20%的调节释放的组分，该调节释放的组分 选自分子量为1000－20000的聚乙二醇、泊洛沙姆、乳糖或磷酸二钙， 以及任选的常规药用压片赋形剂。

本发明再一方面涉及缓释组合物的制备方法，其包括将2,3,4,5- 四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚或 者其药用盐与疏水性易熔载体或稀释剂，亲水性的调节释放组分及任 选的常规药用压片赋形剂混合。

根据本发明，本发明的缓释组合物或其单位剂型中，2,3,4,5-四氢 -2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚或者其 药用盐的含量以重量计为10%-60%，优选40～60%;若以2,3,4,5-四氢 -2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚的剂量 规格计，则为15-60mg。

本发明中所述的疏水性易熔载体或稀释剂为天然的或合成的蜡或 油之类的疏水物质，例如氢化植物油或氢化蓖麻油，而且熔点宜为 35～100℃，优选45～90℃。

本发明中亲水性调节释放的组分若是水溶性易熔物质，宜为聚乙 二醇或泊洛沙姆（poloxamer），若是颗粒性物质，宜为药学上可接受 的物质，例如磷酸二钙或乳糖。所述聚乙二醇的分子量优选为1000～ 20000，调节释放的组分占所述组合物总重量的0.01～20％,优选 0.01～2%。

本发明所述的常规药用压片赋形剂一般指用于片剂的药用赋形 剂，例如精制滑石、硬脂酸镁等。

根据本发明，本发明的缓释组合物优选以口服的单位剂型形式使 用。所述单位剂型可以是颗粒剂或片剂，其中颗粒剂又可以以胶囊形 式使用。

本发明人发现持续24小时或更长时间的有效治疗活性可以得自 含2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b] 吲哚（式I化合物）或者其药用盐的缓释制剂，该制剂在给兔灌胃给 药后相当快地达到体内血浆浓度峰值，即在服用后1～3小时达到体内 血浆浓度峰值，优选至1～2小时。

按照本发明的单位剂型应含足够量的2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基 -5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚（式I化合物）或者 其药用盐作为活性成分，以得到持续至少24小时的治疗活性。2,3,4,5- 四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚（式 I化合物）或者其药用盐在任何一个具体剂型中的实际量应取决于一 些变量，包括（1）预计在任何一次欲服用的剂型的数量；和（2）对 任何具体病人的预计剂量。为方便起见，按照本发明的单位剂型将含 有15～60mg2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H- 吡啶[4,3-b]吲哚（以2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙 基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚计），因此，例如，按照本发明的典型单位剂 型含有Dimebon为18.4～73.7mg。

按照本发明的另一方面，含有有效量的2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基 -5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚或其药用盐并持续 至少24小时有效的药用制剂的特点在于：对于2,3,4,5-四氢-2,8-二甲 基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚的W₅₀在2～12小 时之间，优选2～5小时。

参数W₅₀定义为在50％Cmax时血浆曲线图（plasma profile）的 宽度，即血浆浓度等于或大于峰浓度的50％时的持续时间。该参数通 过所观测数据的线性内插法来测定，它代表在该血浆曲线图中第一上 升交叉点和最后一个下降交叉点之间的时间差。

根据本发明含有有效量2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡 啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚或其药用盐且持续至少24小时有效的 药用制剂的特点在于：对于2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡 啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚的W₅₀在2～12小时之间，优选2～5 小时，而且优选在服用后1～3小时范围内具有t_max，更优选为1～2 小时。

本发明制剂的C_maxs具有剂量依赖性，例如含60mg2,3,4,5-四氢 -2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚的优选 实施在以单剂量形式服用时，其特征在于：兔灌胃服用时2,3,4,5-四氢 -2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚的C_maxs在1.5～4μg/ml的范围之内。

按照本发明，要获得期望的2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基 -3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚的血浆浓度峰值时间并至少24小 时的时间中提供有效活性，该制剂的体外释放特性（转篮法）于100 转/分钟在900ml含0.05%w/v吐温80的水性缓冲液（pH6.5）中于37℃ 测定优选以下所列：

试验开始后（小时） ％释放的dimebolin 2 5－30 4 15－50 6 20－50 12 35－75 18 45－100 24 60－100

本发明的组合物可以多种形式来提供，例如片剂或颗粒剂如含有 颗粒的胶囊剂、球或丸剂。所述组合物通常包括活性成分（2,3,4,5-四 氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚或其 药用盐）以及可用来控制所述活性成分释放的疏水性易熔载体或稀释 剂。

按照本发明，单剂量形式的优选形式包括装有多重颗粒的胶囊， 所述多重颗粒主要包括所述活性成分、疏水性易熔载体或稀释剂，并 且包括亲水性的调节释放的组分。

具体地说，所述多重颗粒优选按照这样的方法来制备，主要包括： 制成干燥的活性成分和疏水性易熔载体或稀释剂的混合物，然后将该 混合物在高速混合器中以某一速度进行机械加工，并提供足够的能量 给所述易熔物质以将共熔化或软化，由此形成含有活性成分的多重颗 粒。将得到的多重颗粒适当过筛并冷却，得到颗粒大小在0.1～3.0mm， 优选0.25mm～2.0mm范围内的多重颗粒。这种优选的方法适于工业 化生产含有2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H- 吡啶[4,3-b]吲哚或其药用盐的剂量单元。

在所述组合物中活性成分的重量比可以在很宽的范围内变动，例 如为10～60％，优选40～60％。

本发明还涉及含有2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基) 乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚或其药用盐的缓释多重颗粒剂的制备方法， 它包括：

1）在高速混合器中，对含有颗粒状的2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基 -5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚或其药用盐和颗粒 状熔点为35～150℃、例如35～100℃的疏水易熔载体或稀释剂以及可 任选性的调节释放的组分的混合物以某一速度进行机械搅拌化处理， 并输入能量以使所述载体或稀释剂熔化或软化，因而形成凝聚物；所 述控释组分包括水溶性易熔物质，或者颗粒状可溶性或不溶性有机或 无机物质；

2）将较大的凝聚物粉碎以获得控制种粒；并

3）继续机械处理，同时再加入低百分量的所述载体和稀释剂；并

4）可重复步骤3）和可能的步骤2）1次或多次，如多达6次。

上述“以某一速度进行机械搅拌化处理”通常是指搅拌速度为 20～200转/分钟；“输入能量使所述载体或稀释剂熔化或软化”中的输 入能量是指将颗粒状的活性成分加热，温度为35～150℃。

该方法可以获得高收率（超过80％）的多重颗粒，所得多重颗粒 在所需大小范围内，具有所需的体外释放速度，而且释放速度均一， 令人惊讶的是，处于其优选形式时，产品的血浆浓度初峰具有24小时 的活性持续。

可将得到的多重粒子过筛以除去过大或过小的粒子，然后用例如 装入硬胶囊中而制成含所需剂量的活性物质的所需剂量单元。

所得颗粒可用于按本身已知的方法制备剂量单元如片剂或胶囊。

本发明活性物质的用量以使多重粒子中2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基 -5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚或其药用盐的含量 在10～60（W/W）%之间，对于低剂量产品在10～45（W/W）％之 间。

上述方法中，所述药物全部连同大部分所用疏水性易熔载体或稀 释剂的量优选在整个生产过程中所加成分总量的25～45％（W/W）之 间，更优选在30～40％（W/W）之间。

为生产按照本发明的片剂，可将按上述制得的多重颗粒与所需的 赋形剂用常规的方法混合，并将得到的混合物按常规压片法用适宜尺 寸的压片设备压片。

本发明另一方面涉及制备通式I化合物方法，其包括：

a）以6-甲基烟酸甲酯制备得到2-甲基-5-乙酰基吡啶;

b)将2-甲基-5-乙酰基吡啶与吗啉反应制备得到2-(6-甲基吡啶-3- 基)吗啉乙基硫酮;

c)2-(6-甲基吡啶-3-基)吗啉乙基硫酮在碱性条件下制备得到2-甲 基-5-吡啶乙酸;

d)2-甲基-5-吡啶乙酸与对甲苯胺反应制备得到2-(6-甲基吡啶-3- 基)N-p-甲苯基酰胺；

e)2-(6-甲基吡啶-3-基)N-p-甲苯基酰胺与硼氢化钠反应制备得到 5-(2-p-甲苯基氨乙基)-2-甲基吡啶；

f)5-(2-p-甲苯基氨乙基)-2-甲基吡啶经过重氮化反应制备得到2- 甲基-5-(N-亚硝基-2-p-甲苯基氨乙基)吡啶；

g)2-甲基-5-(N-亚硝基-2-p-甲苯基氨乙基)吡啶与硫代硫酸钠反应 制备2-甲基-5-(N-氨基-2-p-甲苯基氨乙基)吡啶；

h)由2-甲基-5-(N-氨基-2-p-甲苯基氨乙基)吡啶制备得到2,3,4,5- 四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚或 其二盐酸盐;

本发明一方面涉及至少一种式I化合物或其药用盐如式II化合物 作为活性成分的缓释药用制剂用于认知功能障碍综合征、阿尔茨海默 症、帕金森氏综合征、亨廷顿氏综合征、老年性痴呆症的用途。

为能使本发明得到充分理解，仅用举例说明的方式给出下列实施 例。

具体实施方式

实施例1.制备2-甲基-5-乙酰基吡啶

将50g6-甲基烟酸甲酯溶于200ml乙酸乙酯；于三颈瓶中加入 60%NaH26.5g、甲苯400ml、DMF34ml，加入10%的20ml的6-甲基 盐酸甲酯的乙酸乙酯溶液，加热80℃,搅拌0.5h。向反应瓶中缓慢滴加 剩余的6-甲基盐酸甲酯的乙酸乙酯溶液，用时约1.5h。滴毕，80℃反 应8h。停止反应，降至室温。反应瓶中加水300ml，分液，水层用乙 酸乙酯萃取3次，每次200ml。合并乙酸乙酯层，减压蒸馏蒸干乙酸 乙酯层，加入10%H₂SO₄水溶液400ml，加热110℃，回流2h。停止 反应，降至室温，固体K₂CO₃调PH至9，抽滤，滤饼乙酸乙酯洗。 滤液用乙酸乙酯萃取4次，合并旋干，得2-甲基-5-乙酰基吡啶35g， 收率约为65%。

MS(EI)135.1(M+)

实施例2.制备2-(6-甲基吡啶-3-基)吗啉乙基硫酮

2-甲基-5-乙酰基吡啶35g、硫磺7.5g、吗啉60ml放置在250ml 圆底烧瓶中，加热110℃，回流反应7h。7h后终止反应，降至室温。 加水100ml稀释，乙酸乙酯萃取多次，合并、旋干乙酸乙酯。所得固 体混合物用乙酸乙酯进行重结晶，得棕色针状固体2-(6-甲基吡啶-3- 基)吗啉乙基硫酮25g。

MS(EI)236.1(M+)

实施例3.制备2-甲基-5-吡啶乙酸

2-(6-甲基吡啶-3-基)吗啉乙基硫酮25g，加乙醇200ml溶解，然 后加入60%NaOH水溶液（21gNaOH溶于25ml水），加热80℃，回 流17h。停止反应，降至室温，旋干溶剂。加少量水溶解，浓盐酸调 PH值至2，抽滤不溶物，滤液用乙醚萃取两次，合并乙醚层水洗一次。 合并水层待用。旋干溶剂水，放入真空干燥箱，干燥24h。得2-甲基 吡啶乙酸11g，收率约为70%。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ2.43(3H,s,CH₃);3.57(2H,s,CH₂); 7.17-7.19(1H,d,ArH);7.53-7.56(1H,dd,ArH);8.30-8.31(1H,d,ArH); 12.42(1H,s,COOH)。

实施例4.制备2-(6-甲基吡啶-3-基)N-p-甲苯基酰胺

将2-甲基吡啶乙酸溶于150ml DMF，加入DIEA40ml、对甲苯胺 10.2g、HOBt18g搅拌15min。再加入EDC.HCl21g，加毕，室温反 应12h。然后加水800ml稀释，搅拌，出现不溶固体，搅拌2小时后， 抽滤、水洗，得类白色粉末状固体。干燥、得到2-(6-甲基吡啶-3-基)N-p- 甲苯基酰胺12g，收率约为68%。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ2.19(3H,s,CH₃);2.39(3H,s,CH₃); 3.56(2H,s,CH₂);7.06-7.04（2H,d，ArH）；7.15-7.17（1H,d，ArH）； 7.40-7.42（2H,d，ArH）；7.55-7.57（1H,dd,ArH）；8.32（1H,d,ArH）； 10.07（1H,s，NH）。

实施例5.制备5-(2-p-甲基苯基氨乙基)-2-甲基吡啶

于三颈瓶中加入二氧六环150ml，冰水浴冷却至10℃，然后加入 上步制备的2-(6-甲基吡啶-3-基)N-p-甲苯基酰胺和NaBH₄搅拌10min。 温度保持10℃，滴加冰醋酸的二氧六环溶液（10ml冰醋酸溶于100ml 二氧六环）。用时约1h。生成大量氢气。滴毕，缓慢升温至105℃， 回流反应2.5h。

停止反应，降至室温，加水300ml稀释。析出黄色沉淀，抽滤， 水洗。乙酸乙酯乙醇混合溶剂重结晶。得近白色粉末状固体。干燥得 到5-(2-p-甲基苯基氨乙基)-2-甲基吡啶4.5g。收率约为40%。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ2.14(3H,s,CH₃);2.58(3H,s,CH₃); 2.85-2.88(2H,t,CH₂)；3.22-3.26(2H,t,CH₂)；5.48（1H,s，NH）；6.49-6.51 （2H,d，ArH）；6.88-6.90（2H,d，ArH）；7.55-7.57（1H,d，ArH）； 7.93-7.95（1H,dd,ArH）；8.57（1H,d,ArH）。

实施例6.制备2-甲基-5-(N-亚硝基-2-p-甲基苯基氨乙基)吡啶

三颈瓶中加入5-(2-p-甲基苯基氨乙基)-2-甲基吡啶4.5g和2N HCl 200ml加热30℃搅拌至溶解，完全溶解后，冰水浴冷却至0～5℃，滴 加NaNO₂的水溶液（13.8g NaNO₂溶于50ml水）。滴毕，升温到室 温反应1h。向反应液中缓慢滴加饱和NaHCO₃溶液，至无气体生成位 置。出现大量固体，搅拌1h后，抽滤，水洗。得到淡黄色固体粉末。 干燥称重得到2-甲基-5-(N-亚硝基-2-p-甲基苯基氨乙基)吡啶4.3g。收 率约为85%。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ2.36(3H,s,CH₃);2.40(3H,s,CH₃); 2.70-2.74(2H,t,CH₂)；4.24-4.28(2H,t,CH₂)；7.12-7.14（1H,d，ArH）； 7.31-7.33（2H,d，ArH）；7.43-7.46（2H,d，ArH）；7.46-7.50 （1H,dd,ArH）；8.20-8.21（1H,d,ArH）。

实施例7.制备2-甲基-5-(N-氨基-2-p-甲基苯基氨乙基)吡啶

三颈瓶中加入20%NaOH水溶液、乙醇，加入2-甲基-5-(N-亚硝 基-2-p-苯甲基胺乙基)吡啶，氮气保护，冷凝管。加热60℃搅拌0.5h。 加入Na₂S₂O₄，氮气保护，60℃反应12h。停止反应，降至室温。反应 液用乙醚萃取三次。合并乙醚层，无水硫酸钠干燥过夜。醚层蒸干得 到粗品，粗品用石油醚/乙酸乙酯(1/2）为洗脱液柱层析纯化分离得到 淡黄色固体2-甲基-5-(N-氨基-2-p-甲苯基氨乙基)吡啶1.4g。收率约为 35%。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ2.17(3H,s,CH₃);2.41(3H,s,CH₃); 2.80-2.84(2H,t,CH₂)；3.46-3.49(2H,t,CH₂)；4.22-4.23（2H,s，NH₂）； 6.87-6.89（2H,d，ArH）；6.90-6.96（2H,d，ArH）；7.15-7.17（1H,d， ArH）；7.57-7.59（1H,dd,ArH）；8.34（1H,d,ArH）

实施例8.制备2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3- 吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚及其二盐酸盐

加入2-甲基-5-(N-氨基-2-p-甲基苯基氨乙基)吡啶1.4和N-甲基-4- 哌啶酮0.8g，加甲苯100ml溶解，加热120℃，回流反应24h。停止 反应，降温，减压蒸干溶剂甲苯。向剩余物中滴加5.3N盐酸乙醇20ml， 残余物完全溶解，然后加热80℃，回流反应1.5h。

终止反应，加水稀释，6N NaOH中和至pH14。用乙醚萃取反应 液三次，合并乙醚层，水溶液洗一次，饱和食盐水洗两次，得到的乙 醚层减压蒸干得到粗品。所得粗品用乙酸乙酯重结晶，过滤干燥、得 到2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b] 吲哚（式I化合物）1.2g。收率约为65%。

所得式I化合物溶于5ml甲醇，缓慢滴加饱和的盐酸甲醇溶液， 至溶液PH值2～3。酸性溶液在0℃下搅拌2小时，抽滤得到粗品， 粗品干燥。所得的粗品用乙醇和乙醚混合溶液重结晶，得到2,3,4,5- 四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚二 盐酸盐（式II化合物）1g，收率约为83%。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ2.36(3H,s,CH₃);2.39(3H,s,CH₃); 2.45(3H,s,CH₃);2.56(2H,s,CH₂)；2.72(2H,s,CH₂)；2.88-2.91(2H,t, CH₂)；3.58(2H,s,CH₂)；4.20-4.23(2H,t,CH₂)；6.88-6.90（1H,d， ArH）；7.10（1H,s，ArH）；7.12（1H,s，ArH）；7.35-7.58（1H,d， ArH）；7.35-7.3（1H,dd,ArH）；8.14（1H,d,ArH）

实施例9～11

具有下表2所示配方的颗粒采用下列步骤来制备：

1）将成分a至c放入装有可变速混合和制粒叶片的混合器（或相 当的设备）的槽中；

2）将所述成分在约150～350转/分钟混合，同时加热直至槽中物 料被凝聚；

3）将所述凝聚的物料分粒，得到控释种粒；

4）将所述已分粒的物料在混合器的槽中温热并混合，同时加入成 分d，直至以高于80％的收率制得所需预定大小范围的均匀颗粒；

5）将所述颗粒由混合器中卸出并将其过筛以分出在0.5和2mm 孔径筛之间收集到的颗粒。

表2

实施例/成份 9 10 11 a.式I化合物（Wt％） 55.0 52.0 53.5 b.氢化植物油（Wt％） 34.95 33.17 34.00 c.聚乙二醇6000（Wt％） 0.05 0.047 0.05 d.氢化植物油（Wt％） 10.0 14.79 12.54 收率（％） 90.5 88.5 92.5

实施例12

重复实施例11的程序，但有以下变动：将已经分粒的颗粒加至混 合器的冷槽中，然后加入成分d混合，在混合间用夹套加热和微波加 热。

实施例9～12的体外释放速度用改良的转篮法于100转/分钟在 900ml含0.05%(W/V)吐温80的水性缓冲液（pH6.5）中于37℃检测。 对于按照实施例9～12制备得到的每种不同产品，分别测试了6个颗 粒样品，每个样品含有总计60mg的2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6- 甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚，下表3中的结果为所测试 的每种产品的6个样品的平均值。

表3

从表3的结果可以看出，尽管实施例11和12的产品的组成相同， 但是处理不同则导致释放速度改变。

将按照实施例9～12生产出的颗粒各自与精制滑石粉和硬脂酸镁 混合并用来填充硬胶囊，使每个胶囊含有60mg的2,3,4,5-四氢-2,8-二 甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚。将制备得到的 胶囊用于兔的药物动力学研究，在以下时间取血样：灌胃给药后 1,1.5,2,2.5,3,4,6,9,12,18,24和36小时。

用上述方法制备的胶囊进行药物代谢动力学研究，抽取血样后 1～3小时之间的中点时间，得到1～3μg/ml的2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基 -5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚的血浆浓度峰值，平 均Tmax为1.65小时，平均Cmax为1.653μg/ml，在服用24小时血 浆中浓度比直接接受普通片剂的兔在4小时的浓度还要高。兔灌胃口 服含有2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶 [4,3-b]吲哚的普通片剂，其血浆浓度在2h时为1.3μg/ml,然后在4h内 迅速降低到0.11μg/ml，然后只有痕量存在（小于0.1μg/ml）。

基于实施例9～12制得的颗粒，对兔口服灌胃服用含60mg2,3,4,5- 四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚的 胶囊后进行的药代动力学研究表明，对于2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基 -5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚的W₅₀在1～12小时 之间，优选在2～9小时之间，更优选在2～5小时之间。

实施例13

按照与实施例9～12的类似方法制备颗粒，但是所述颗粒含有下 列成分：

然后将所述颗粒样品与硬脂酸镁和精制滑石粉按照两批（见表4 的第1和2批）混合，然后将混合后的混合物各用压片机压片。每剂 量单位的成分含量如下：

表4

用转篮法测定未压片颗粒样品（每样品含有60mg2,3,4,5-四氢 -2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚）的溶 解，对于片剂用Ph.Eur.Paddle法测定，结果见表5：

表5

上述试验结果表明，压片会显著降低活性成分的释放速度。

实施例14

按照与实施例13的类似方法制备颗粒，但是所述颗粒含有下列成 分：

然后将所述颗粒样品与硬脂酸镁和精制滑石粉按照两批（见表6 的第3和4批）混合，然后将混合后的混合物各用压片机压片。每剂 量单位的成分含量如下：

表6

用转篮法测定未压片颗粒样品（每样品含有60mg2,3,4,5-四氢 -2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚）的溶 解，对于片剂用Ph.Eur.Paddle法测定，结果见表7：

表7

上述试验结果表明，压片会显著降低活性成分的释放速度，比较 片剂3和4的释放速度可看出：使用表面活性剂（Poloxamer188）作 压片赋形剂可以调节释放速度，含有该表面活性剂的片剂4的释放速 度比未含该表面活性剂的片剂3的高。

实施例15

按照与实施例13的类似方法制备颗粒，但是所述颗粒含有下列成 分：

表8

然后将所述颗粒样品与硬脂酸镁和精制滑石粉按照一批（见表9 的第5批）混合，然后将混合后的混合物各用压片机压片。每剂量单 位的成分含量如下：

表9

用转篮法，照药典中紫外分光光度法（2005版附录IV A）测定 未压片颗粒样品（每样品含有30mg2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6- 甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚）的溶解，对于片剂用 Ph.Eur.Paddle法测定，结果见表10：

表10

上述试验结果表明，压片会显著降低前8h活性成分的释放速度。

实施例16

按照与实施例13的类似方法制备颗粒，但是所述颗粒含有下列成 分：

表11

然后将所述颗粒样品与硬脂酸镁和精制滑石粉按照两批（见表12 的第6和7批）混合，然后将混合后的混合物各用压片机压片。每剂 量单位的成分含量如下：

表12

用转篮法，照药典中紫外分光光度法（2005版附录IV A）测定 未压片颗粒样品（每样品含有15mg2,3,4,5-四氢-2,8-二甲基-5-[2-(6- 甲基-3-吡啶基)乙基]-1H-吡啶[4,3-b]吲哚）的溶解，对于片剂用 Ph.Eur.Paddle法测定，结果见表13：

表13

上述试验结果表明，压片会显著降低活性成分的释放速度。