舞毒蛾核型多角体病毒杀虫剂的生产工艺

摘要

本发明涉及一种舞毒蛾核型多角体病毒杀虫剂的生产工艺。本发明提供一种价格低廉的舞毒蛾人工饲料，其喂饲的舞毒蛾的体重、发育历期、存活率等均与天然饲料相当，由此可以提高舞毒蛾病毒的产量、降低生产成本、扩大野外应用面积。由该人工饲料生产舞毒蛾病毒杀虫剂的工艺不受外界环境制约，可大规模生产，制备出的杀虫剂安全高效。

说明书

技术领域

本发明涉及一种价格低廉的舞毒蛾人工饲料，其用于生产舞毒蛾病毒杀虫 剂，属于林木害虫——舞毒蛾生物防治领域。

背景技术

舞毒蛾(Lymantria dispar L.)，又名秋千毛虫、苹果毒蛾、柿毛虫，隶属于 鳞翅目Lepidoptera，毒蛾科Lymantriidae，毒蛾属Lymantria，是世界性食叶害虫， 具有分布广、食性杂、危害重、幼虫随风迁移等特点。

由于舞毒蛾对农林业的危害严重，近百年来，人们采用了多种方法对舞毒蛾 进行防治。化学农药防治是应用最早也是迄今为止应用最为广泛的防治手段。因 其具有经济、有效、方法简便、不受地形限制等特点，当森林虫害发生时，能在 短期内取得满意的防治效果，减少经济损失。但大量采用化学制剂防治，产生了 严重的“3R”问题，即抗药性(Resistance)、再猖獗(Resurgence)和残留(Residue)。

近年来，随着人们生活水平的提高和环保意识的增强，使用和开发高效、低 毒、无公害的农药已成为发展的必然趋势。昆虫病毒不仅具有寄主专一性、防治 效果好、不污染环境、对其它生物安全、不使害虫产生抗药性等优点，而且病毒 还能在环境中积累，通过外界因子的刺激或诱发等多种途径在害虫种群中形成流 行病而长期控制虫口密度，在害虫的可持续控制中发挥重要的作用。

在舞毒蛾防治中，核型多角体病毒(NPV)是最常用的一种。利用舞毒蛾核型 多角体病毒(LdNPV)防治舞毒蛾已有几十年的历史。国外对LdNPV的应用研究 较早，60年代初就开始利用舞毒蛾核型多角体病毒进行林间防治，并取得了较 为理想的效果。实验证明，舞毒蛾核型多角体病毒是影响舞毒蛾种群动态的主要 因子之一，常引起舞毒蛾种群数量的急剧下降，是有效防治舞毒蛾、降低其危害 的有效方法。应用舞毒蛾核型多角体病毒(LdNPV)防治舞毒蛾在世界各地均取得 了良好效果，特别是在各种化学合成杀虫剂严重污染环境以及害虫对化学合成杀 虫剂抗性日益增强的情况下，应用舞毒蛾核型多角体病毒防治舞毒蛾显得尤为重 要和迫切。

目前，舞毒蛾病毒(优选核型多角体病毒)以在舞毒蛾幼虫体内复制最为经 济，虽然舞毒蛾人工饲养技术已成功解决，但由于饲养成本较高，严重抑制了舞 毒蛾病毒在野外的大量推广应用。

发明内容

为了克服上述技术问题，本发明提供一种价格低廉的舞毒蛾人工饲料，其喂 饲的舞毒蛾的体重、发育历期、存活率等均与天然饲料相当，由此可以提高舞毒 蛾病毒的产量、降低生产成本、扩大野外应用面积。由该人工饲料生产舞毒蛾病 毒杀虫剂的工艺不受外界环境制约，可大规模生产，制备出的杀虫剂安全高效。

本发明通过如下技术方案实现：

一种人工饲料，其包括如下组分：韦氏盐、麦胚、干酪素、蔗糖、抗坏血酸、 氯化胆碱、肌醇和胆固醇。

优选地，所述饲料进一步包括琼脂和水。

根据本发明的优选技术方案，所述饲料进一步包括山梨酸。

根据本发明，所述人工饲料包括：韦氏盐4-15重量份、麦胚80-180重量份、 干酪素30-90重量份、蔗糖5-15重量份、抗坏血酸4-15重量份、氯化胆碱0.3-6 重量份、肌醇0.3-6重量份、胆固醇0.5-6重量份。优选地，进一步包括琼脂8-25 重量份、水适量。更优选地，所述饲料还包括山梨酸0.3-6重量份。

更优选的，本发明的人工饲料包括：韦氏盐6-10重量份、麦胚100-140重 量份、干酪素35-70重量份、蔗糖8-13重量份、抗坏血酸6-10重量份、氯化胆 碱0.5-4重量份、肌醇0.5-4重量份、胆固醇1-5重量份。优选地，进一步包括琼 脂10-20重量份、水适量。更优选地，所述饲料还包括山梨酸0.5-4重量份。

特别优选的，本发明的人工饲料中的组分及其重量份为：韦氏盐8重量份、 麦胚120重量份、干酪素50重量份、蔗糖10重量份、抗坏血酸8重量份、氯化 胆碱2重量份、肌醇2重量份、胆固醇3重量份。优选地，进一步包括琼脂15 重量份、水780重量份。更优选地，所述饲料还包括山梨酸2重量份。

根据本发明，其中麦胚是饲料主体，为昆虫提供蛋白质、糖、脂肪酸、维生 素、无机盐等物质。干酪素，提供蛋白质。韦氏盐，提供无机盐。蔗糖，提供营 养，并用于合成昆虫脂肪。抗坏血酸、氯化胆碱、胆固醇、肌醇，为昆虫提供维 生素；而琼脂和水，用于保持饲料的物理性状。

本发明还涉及一种人工饲料的制备方法，其特征在于，将前述任一方案的上 述组分按一定重量比进行混合。

本发明还涉及人工饲料在制备舞毒蛾病毒(优选核型多角体病毒)杀虫剂中 的应用。

本发明还涉及一种由人工饲料生产舞毒蛾病毒(优选核型多角体病毒)杀虫 剂的工艺，包括以下步骤：采自野外的卵经消毒后孵出幼虫，接入装有舞毒蛾幼 虫人工饲料的舞毒蛾幼虫饲养容器内，放入健康养虫间内饲养到4龄初；舞毒蛾 幼虫人工饲料装入舞毒蛾幼虫饲养容器中，饲料表面接上舞毒蛾病毒(优选核型 多角体病毒)，每容器中接入健康养虫间饲养的幼虫，放入复制养虫间饲养感染 病毒后幼虫，粉碎、过滤，将滤液离心后收集沉淀。

特别优选的，舞毒蛾病毒(优选核型多角体病毒)杀虫剂的生产工艺包括：

一、饲养室

昆虫饲养室(可控温、控湿、控光)要达到千级洁净水平，优选≥0.5μm的 灰尘≤35粒/L。室顶和四壁使用隔热彩钢板建造，顶部进风口安装空气净化装 置及送风机组，功率优选达循环60次/小时，加温采用空调机，顶及四壁安装日 光灯，光照强度优选要达到3000LX以上，顶部安装紫外灯，洁净室入口安装风 淋机。

二、卵的消毒

将野外采集到的舞毒蛾卵块用塑料纱(优选40目)包好放在次氯酸钠溶液 (优选2％)浸渍，优选5分钟，取出后用无菌水洗涤(优选3次)，阴干后放入 的冰箱内(优选4℃)备用，但储存期超过6个月的虫卵不能再用。

三、健康虫的饲养

将卵放入健康虫饲养室(优选温度25℃-28℃；湿度40％-70％；光照16小时)， 优选4-5天后1龄幼虫破壳而出，要及时将1龄幼虫用毛笔接入已装好人工饲料 的养虫瓶中，每瓶优选20头。将接入幼虫的养虫瓶倒立放入养虫筐，再将养虫 筐放在养虫架上。幼虫发育到4初时，送病毒增殖室用于复制病毒。

四、舞毒蛾病毒的复制增殖

将毒株(优选核型多角体病毒)加入适量蒸馏水配制成一定浓度的接毒水， 倒入人工饲料表面，待其表面干燥无水滴便可以放入4龄初虫(优选6条)任其 自由取食。

五、感毒虫的收集、保存

发现感毒虫或死亡虫，要随时加以回收。将收集的病死虫尸加水稀释(优选 2～3倍)，在高速组织捣碎机上，做间断匀浆(优选2-3分钟)后取出，用纱布 过滤；滤液再用筛子过滤(优选80目)并加水稀释(优选2-3倍)，此滤液用离 心机离心(优选16000r/min)，弃上清液，得沉淀，兑入等量甘油，零下10度 保存。

本发明的有益效果：相对于传统的人工饲料，用本发明的饲料喂饲的舞毒蛾 各龄期幼虫以及蛹的体重较高，幼虫发育历期较短，存活率较高，用本发明的饲 料喂饲的舞毒蛾各龄期幼虫以及蛹的体重、幼虫发育历期、存活率等均与天然饲 料(如108杨)相当。并且，本发明的饲料成本以及饲养的舞毒蛾幼虫单头成本 均显著降低。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围并不限于实施 例。

一、人工饲料的制备及其对舞毒蛾生长发育和存活的影响

1、人工饲料的制备

本发明人工饲料由以下组分混合配制而成：韦氏盐8g、麦胚120g、干酪素 50g、蔗糖10g、山梨酸2g、抗坏血酸8g、氯化胆碱2g、肌醇2g、胆固醇3g、 琼脂15g、水780ml；

采用以下饲料作为对比例：

饲料①：干酪素35g、韦氏盐10g、蔗糖12g、果糖23g、麦胚60g、氯化胆 碱1g、对羟1.5g、琼脂25g、金霉素0.3g、抗坏血酸4g、4M KOH 5ml、38％甲 醛0.5ml、55％亚麻酸4.3ml、混合维生素10ml(烟酸100g、泛酸钙100g、核黄 素50g、盐酸硫胺素25g、盐酸吡哆醇25g、叶酸25g、生物素2g、B120.2g)、水 860ml(王延年等，1982)；

饲料②：干酪素40g、蔗糖30g、韦氏盐10g、山梨酸2g、麦胚100g、琼脂 16g、对羟1g、混合维生素10g(抗坏血酸280g、氯化胆碱55g、叶酸250ml、 肌醇20g、烟酸1g、吡哆辛230mg、胆固醇50g、B121.5g)、水800ml；

CK：108杨Populus euramericana Guariento。

2、不同人工饲料对舞毒蛾(2010年4月采自内蒙古赤峰市乌兰察布林区) 生长发育和存活的影响

选取刚孵化的舞毒蛾1龄幼虫，单头放于盛有新鲜不同人工饲料的带盖透明 塑料养虫杯(底Φ＝3.5cm，顶Φ＝5.0cm，高(H)＝5cm)内，每3天更新一次 人工饲料。将养虫杯倒置于T＝25±1℃，RH＝70％，L∶T＝8∶16的人工气候箱 (SANYO MLR-351H)内，每24小时记录一次体重、蜕皮、死亡情况，直至完 全化蛹，以108杨喂饲的为CK，不同处理重复100次。统计分析不同人工饲料 对舞毒蛾生长发育、存活的影响。应用SAS8.0对上述数据进行单因素方差分析。

2.1不同饲料对舞毒蛾体重的影响

通过表1可以看出，利用人工饲料喂饲舞毒蛾，对不同龄期幼虫和蛹重存在 不同程度的影响。四种饲料喂饲的1龄幼虫，彼此间体重无显著差异。自2龄幼 虫至蛹期，本发明饲料喂饲的舞毒蛾体重同CK无显著差异，但自4龄开始至蛹 期，其体重同饲料①和②喂饲的舞毒蛾存在显著差异。饲料②喂饲的舞毒蛾幼虫 体重略高于饲料①，但相同龄期和蛹间体重无显著差异。因此，本发明饲料为最 适人工饲料，其次为饲料②，饲料①最差。

表1  不同饲料对舞毒蛾体重的影响(单位：头/g)

注：表中同列字母相同，表示5％水平上无显著差异，下表同。

2.2不同饲料对舞毒蛾发育历期的影响

利用不同饲料喂饲舞毒蛾，对其发育历期也存在不同程度的影响(见表2)。 其中，取食108杨(CK)和本发明饲料的舞毒蛾各龄期幼虫发育历期最短，且 幼虫期仅为17.52和17.89d，明显低于其它人工饲料喂饲的结果，差异显著。以 饲料①和②喂饲的舞毒蛾各龄期幼虫以及幼虫期之间均无显著差异，幼虫期分别 为24.48和22.63d。就幼虫发育历期而言，本发明饲料喂饲结果最佳。

表2  不同饲料对舞毒蛾发育历期的影响(单位：d)

2.3不同饲料对舞毒蛾存活的影响

通过表3可知，不同饲料对舞毒蛾各龄期幼虫的存活率也存在一定影响。同 一种饲料喂饲的舞毒蛾，1龄幼虫存活率受其影响最大，存活率最低。根据舞毒 蛾幼虫总存活率，不同饲料由高到低排列为CK＞本发明饲料＞饲料②＞饲料①。 综合3种人工饲料，本发明饲料对舞毒蛾各龄期幼虫以及总存活率的影响最小。

表3  不同饲料对舞毒蛾存活的影响(单位：％)

3、不同人工饲料的成本分析

从表4可以看出，本发明饲料成本最低，为130元/1000g，比饲料①和②分 别低11.54％和6.15％；而用本发明饲料饲养的舞毒蛾幼虫单头饲养成本为0.10 元/头，分别比饲料①和②饲养的舞毒蛾低30％和40％，大大节约了幼虫的饲养 成本，因此，以本发明饲料饲养的舞毒蛾价格最为低廉。

表4  不同人工饲料成本分析(单位：元)

综上所述，通过分析不同饲料对舞毒蛾幼虫和蛹体重、发育历期以及存活率 的影响，可以看出，本发明饲料为最适人工饲料，因为利用其饲养的舞毒蛾各龄 期幼虫以及蛹的体重均最高，且幼虫发育历期最短、存活率最高，同以108杨饲 养的舞毒蛾无显著差异。而以饲料①和②饲养的舞毒蛾幼虫和蛹体重、发育历期 和存活率均明显低于本发明饲料，彼此差异显著。其次，本发明饲料的成本以及 饲养的舞毒蛾幼虫单头成本均显著低于饲料①和②，可见，本发明饲料为最佳饲 养舞毒蛾的人工饲料。