参仙组合药物在制备治疗男性不育药物中的应用

摘要

本发明提供的参仙组合药物制备治疗男性不育药物中的应用；更重要的是治疗阳痿病症、治疗弱精子不育病症和治疗免疫性不育病症具有良好的活性，可以适用于治疗弱精子不育、免疫性不育和勃起功能障碍（阳痿）导致的不育。

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药组方的应用，更具体的说涉及参仙组合药物在制备治疗男性不育药物中的应用。 

技术背景

不育症指正常育龄夫妇婚后有正常性生活，在1年或更长时间，不避孕，也未生育；其中由于男方的原因造成女方不孕者，称为男性不育。在已婚夫妇中发生不育者有15%，其中男性不育症的发病率占30%。临床上把男性不育分为性功能障碍和性功能正常两类，后者依据精液分析结果可进一步分为无精子症、少精子症、弱精子症、精子无力症和精子数正常性不育。近年来由于环境、心理、社会等因素的影响，男性不育的发生率呈扩大趋势；有效的预防和治疗男性不育，不仅可以提高患者及其家庭的幸福感，也能在一定程度上增加社会的和谐与稳定。 

西医在男性不育的病因诊断和治疗已取得很大进展，以卵泡浆内精子注射(ICSI)技术为代表的辅助生殖技术(ART)改变了男性不育的治疗状况。但是ART不仅带来的是性与生殖的分离，也存在着巨大的风险(如潜在的遗传风险、出生缺陷、对子代的影响等)，也面临着许多的伦理、法律与社会的争议。在我国，中医药在治疗男性不育症方面发挥了一定的优势，获得了较满意的疗效，是治疗男性不育的主要手段之一。中医认为，男性不育症的病位多与肾、肝、心、脾等脏有关，肾气虚弱、肝郁气滞、湿热下注、气血两虚是不育的常见病机，其治疗原则也多围绕该病机而辨证施治。 

参仙组合药物是由淫羊藿、女贞子、仙茅、人参和制何首乌五味药材组成。方中淫羊藿、仙茅，性味辛温，归肝肾经，不仅补肾壮阳，强筋健骨，而且能助脾胃运化，祛风除湿；女贞子性平、味甘苦，制首乌微温、味甘涩，能养血益精，滋补肾阴；人参补气养血，调理任冲。五药合用，具有温肾益精、补气养心，达到阴阳双补，又不至虚火上炎之功效。 

中国专利（ZL93111650.3、ZL 93111652.X和ZL 93111651.1）分别公开了一种用于治疗抗衰老的参仙药物组合，其配方为人参、仙茅、淫羊藿、制首乌和女贞子。而目前以人参、仙茅、淫羊藿、制首乌和女贞子为主要成分的制剂在治疗男性不育中并没有报道。 

发明内容

研究发现，淫羊藿中主要活性成分淫羊藿苷(ICA)，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿等功效，对阳痿、遗精、筋骨酸软以及提高机体免疫力、抗肿瘤等方面有着显著的疗效。用体外培养的方法，经Percoll梯度离心法优选后的精子作为正常精子模型，采用次黄嘌呤-黄嘌呤氧化 酶体系产生ROS。在有氧环境下，ROS不同浓度的淫羊藿水提物与精子悬液共同孵育后，检测精子膜脂质过氧化损伤程度，通过精子尾部低渗膨胀试验、精子顶体完整率评估精子膜功能，透射电镜观察精子超微结构，并与维生素C对照。淫羊藿水提物低、中、高组(125、250、500mg/ml)在相同的条件下均可提高精子悬液SOD活力，降低MDA含量，显示对ROS所致精子膜的氧化损伤均具有不同程度的干预作用，对精子膜功能具有一定的保护作用。人参为五加科植物，性甘、微苦，平。主要功能具有大补元气、复脉固脱、补脾益气、生津安神、改善性功能。人参的药物活性成分为皂苷，可以分离出多种单体,包括人参苷(Patmquilon)、人参辛苷(Panaxin)、人参宁(9Ginsenin)和人参酸等。用于中枢、血管和内分泌系统，促进新陈代谢，内分泌系统，促进性腺功能。动物实验证明人参能使人体细胞生命期延长，口服人参果皂苷15Omg/kg后，血浆睾酮水平明显增加，雄性动物交配能力增强。本组资料表明人参治疗后精子密度、成活率、活动力和血睾酮水平，都较治疗前明显增加，治疗前、后组内差异显著(P﹤0.05)，且作用类同HMG，组间差异不显著(P>0.05)。人参治疗后血促问质细胞激素(LH)和睾酮(T)水平增加，说明人参具有绒毛膜促性腺激素(HCG)样的LH样活性，表明皂苷能作用于睾丸的间质细胞并合成和分泌睾酮，增加阴茎勃起功能和促进精子发生、发育和成熟。人参含有的皂苷成分能对睾丸间质细胞发生作用及提高精子数量和质量。仙茅能抑制卵巢和睾丸的萎缩，促进雄性大鼠的睾丸精原细胞的增殖，并使成熟精子量增多；使卵巢各级发育阶段的卵泡及成熟卵泡增多。人参、何首乌在清除氧自由基、一氧化氮、提高ATP水平、调整微量元素含量、抗感染、调整内分泌、调节免疫功能等方面有促进作用。本发明提供了由人参、仙茅、淫羊藿、制首乌和女贞子五味组成的中药组合制剂在制备治疗男性不育药物中的应用。 

所述的参仙组合药物在制备治疗阳痿病症药物中的应用。 

所述的参仙组合药物在制备治疗弱精子不育病症药物中的应用。 

所述的参仙组合药物在制备治疗免疫性不育病症药物中的应用。 

上述任一所述应用，其特征在于：所述参仙组合药物中人参、仙茅、淫羊藿、制首乌和女贞子的重量比1-40:1-40:1-40:1-40:1-40。 

所述应用，所述参仙组合药物的制备方法为： 

1）称取药材，淫羊藿切碎，水提取，浓缩至比重为1.2克/厘米³，乙醇浸泡，再回收乙醇得淫羊藿浸膏； 

2）乙醇提取仙茅与制首乌，回收乙醇至提取液为原生药材体积的2-20倍时，停止回收，加入石灰乳改变提取液pH值至7-8，过滤，滤液注入二氧化碳气体至无沉淀，24小时时效处理，再过滤，滤后加入醋酸调节pH值至6-3，回收乙醇得仙茅制首乌浸膏； 

3）将女贞子粉碎成女贞子粉末，或将女贞子乙醇提取得女贞子浸膏； 

4）将人参粉碎成人参粉末，或用乙醇回流提取得到人参浸膏； 

5）将上述所得淫羊藿浸膏、仙茅制首乌浸膏、女贞子粉末或浸膏、人参粉末或浸膏混合，通过制剂生产工艺加工成制剂，得到参仙组合药物。 

本发明的有益技术效果是：本发明提供的参仙组合药物制备治疗男性不育药物中的应用；更重要的是治疗阳痿病症、治疗弱精子不育病症和治疗免疫性不育病症具有良好的活性，可以适用于治疗弱精子不育、免疫性不育和勃起功能障碍（阳痿）导致的不育。 

具体实施方式

实施例1参仙组合药物的制备 

称取淫羊藿25kg，女贞子20kg，仙茅20kg，人参1kg，制首乌15kg。 

将淫羊藿切碎，水提取，浓缩至比重为1.2克/厘米³，乙醇浸泡，再回收乙醇得淫羊藿浸膏； 

采用乙醇提取仙茅与制首乌，回收乙醇至提取液为原生药材体积的2-20倍时，停止回收，加入石灰乳改变提取液pH值至7-8，过滤，滤液注入二氧化碳气体至无沉淀，24小时时效处理，再过滤，滤后加入醋酸调节pH值至6-3，回收乙醇得仙茅制首乌浸膏； 

将女贞子粉碎成女贞子粉末，或将女贞子乙醇提取得女贞子浸膏； 

将人参粉碎成人参粉末，或用乙醇回流提取得到人参浸膏； 

将上述所得淫羊藿浸膏、仙茅制首乌浸膏、女贞子粉末或浸膏、人参粉末或浸膏混合，通过制剂生产工艺加工成制剂，在制备工艺也可以采用市售参仙片的制备工艺；得到参仙组合药物Ⅰ。 

称取仙茅40kg,淫羊藿1kg,人参1kg、制首乌40kg和女贞子20kg,按上述方法得到参仙组合药物Ⅱ。 

称取仙茅1kg,淫羊藿40kg,人参40kg、制首乌20kg和女贞子40kg,按上述方法得到参仙组合药物Ⅲ。 

实施例2参仙组合药物对免疫性不育病症的活性考察 

选取成熟、健康、有生育力，体重300～330g(4月龄)雄性豚鼠42只，室温22～28摄氏度，光照12小时/天，动物自由饮水和进食。每周称重1次，以调节给药剂量。 

取雄性豚鼠6只，处死，取睾丸和附睾，剪碎，匀浆，辅以福氏佐剂，在脊柱两侧分四点皮下注射，15天后开始实验。将余下的36只豚鼠随机分成6组，每组6只，其中5组复制模型，1组为空白对照组。分组情况如下： 

空白对照组(以下简称空白组)：整个过程中灌服生理盐水。造模对照组(以下简称造模组)：连续生理盐水灌胃45天。参仙组合药物治疗组：参仙组合药物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(以下称Ⅰ 组、Ⅱ组、Ⅲ组)，在造模后继续用参仙组合药物灌服45天，每日灌药剂量分别为16ml/kg、8ml/kg和4ml/kg，分别是成人剂量的2O倍、1O倍和5倍。六味地黄丸对照组(以下简称六味组)：造模后用市售六味地黄丸混悬液，灌服45天，每日灌药剂量1.5g/只，为成人剂量的10倍。 

解剖豚鼠取附睾尾部，置于2ml Tyroid液中剪碎，37℃恒温5分钟。取上清液0.02ml，加人0.38ml精子稀释液，送精子分析检查。测定精子参数：精子数量、存活率、活动力和直线运动。 

实验结束时，断颈处死动物，取左侧睾丸用bouin液固定24小时，石蜡包埋，HE和PSA染色，Johnsons积分法定量分析曲细精管的面积及各期生精细胞的变化。 

取右侧睾丸，将其切成1mm的组织块，采用25％的戊二醛行前固定，用0.1M磷酸缓冲液配制的1％锇酸溶液(pH 7.4)固定2小时，固定过程温度保持在4℃，固定后用递增浓度的序列酒精脱水，用环氧树脂Epon812包液，进行浸透和包埋，超薄切片经醋酸钠及柠檬酸铅染色，H600电镜观察。 

计算均数及标准误 配对资料t检验。 

各组实验动物体重随治疗时间的延续而持续增长，其中空白组增长速率稍快，但空白组与造模组比较无显著差异(P>0.05)。各组治疗前后体重变化差比较无显著性差异(P>005)。 

各组治疗后睾丸、附睾重量情况见表1，造模组睾丸附睾重量较空白组显著减轻。治疗后，参仙组合药物各组睾丸、附睾重量显著增加。 

表1各组豚鼠睾丸和附睾重量变化（g, ） 

注：*与空白组比较P﹤0.01，与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组比较P﹤0.05，＃与空白组、与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组比较P﹤0.01， 

◇与六味组比较P﹥0.05，与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组比较P﹥0.05。 与Ⅰ组比较P﹥0.01。 

治疗后，附睾尾精子的数量、存活率、活动力和直线运动情况见表2。造模组精子质量各项指标较空白组均有下降，其中精子数量、存活率和活动力比较有显著差异(P﹤0.05)。参仙组合药物治疗后，精子质量有不同程度的提高。 

表2各组豚鼠附睾精子质量比较 

注：*与空白组,Ⅰ组比较P﹤0.01，＃与Ⅱ、Ⅲ组比较P﹤0.05， 与Ⅰ组比较P﹤0.04，◇与空白组、Ⅰ组比较P﹤0.01， 

☆与Ⅲ组、六味组比较P﹤0.05，□与Ⅰ组比较P﹤0.05；○与Ⅰ组比较P﹤0.01；与★与Ⅰ组比较P﹤0.01 

空白组呈正常的组织结构，曲细精管内可见各级生精细胞及支持细胞，排列规则，管腔面有很多精子，并可见精子嵌入精子细胞间，曲细精管界膜及间质也无明显异常。 

造模组表现为混合性损伤：(1)生精阻滞：生精细胞发生阻滞于精原细胞、精母细胞阶段。(2)生精细胞退行性病变：生精细胞剥落，排列紊乱，曲细精管管腔中有大量成团的未成熟的生精细胞，充塞于腔面。(3)支持细胞综合症：曲细精管、生精细胞完全缺失，生精上皮仅由支持细胞组成，曲细精管管腔较空白组缩小，腔面内见脱落变性生精细胞的残留。 

Ⅰ组曲细精管基本正常，曲细精管各级生精细胞排列整齐，多数曲细精管发育良好，上皮层次较造模组增多，管腔内见成熟精子。 

Ⅱ组曲细精管大部分排列良好，生精细胞层次较空白组减少，但结构基本完整，恢复程度不如Ⅰ组。Ⅲ组的恢复与六味组基本相似，较Ⅱ组稍差。各组精子发生Johnson计数见表3。 

表3各组精子发生Johnsen计数 

注：*与其他各组比较P﹤0.01；△与Ⅰ组比较P﹤0.01；与Ⅱ、Ⅲ与六味组比较P﹤0.01；○与Ⅰ、Ⅱ比较P﹤0.01。 

空白组睾丸电镜表现为正常结构，精原细胞、精母细胞和各级精子细胞结构完整，生精上皮腔侧见精子形成。 

造模组可见各级睾丸生精细胞形态变异，各级生精细胞间和胞质内见大量空泡，胞质中细胞器结构模糊不清，线粒体肿胀，细胞核形异常，核内出现空泡，核质疏松，核膜模糊而不完整。曲细精管基底膜增厚，伴见空泡。精母细胞有核膜破裂，染色体分解。精子细胞顶体生成异常，顶体与细胞核之间出现增宽的透明间隙，顶体外出现不规则缺损。经参仙组合药物治疗后，大剂量组可见睾丸组织结构基本恢复正常，精原细胞和各级精子细胞形态基本正常，但胞浆中线粒体较少。中剂量组各级生精细胞形态基本正常，但恢复较Ⅰ组稍差。小剂量组精原细胞形态完整，核膜模糊，但各级生精细胞间空泡较造模组显著减少，细胞形态相对完整。六味组与小剂量组变化类似。 

正常的情况下睾丸中因为存在着血睾屏障从而使得男性的精液不和血液接触使得男性血液系统中的免疫系统不能够对男性精液产生危害，但是当血睾屏障因为某些因素被破坏时会使得自身的免疫系统对精液中的抗原产生免疫反应从而精子的正常形态以及功能被免疫系统破坏从而使得男性不育症的产生。 

睾丸是生成精子的地方，附睾头与体段是精子成熟部分，尾段是精子储存部位。精子在附睾继续发育达到成熟阶段，并获得运动能力、固着卵子透明带能力和受精能力。而实验性变态反应性睾丸炎主要作用于睾丸附睾组织，使生殖上皮剥落和精子细胞发生退行性病变，导致曲细精管萎缩及间质纤维化，使睾丸附睾重量下降，影响精子生成发育的内环境，进而使精子质量下降。 

睾丸的免疫病理变化，导致了睾丸及生精细胞生理变化。抗体通过破损的血睾屏障，在生精小管壁沉积，损伤基底膜，使基底膜增厚及纤维化，支持细胞和生精细胞因缺乏营养而变性，使曲细精管内生精微环境发生变化。抗体通过受损的基底膜，直接作用于生精细胞，破坏生精细胞的功能。抗体在间质血管壁沉积，造成血管壁的损伤及纤维增厚，间质组织缺血、缺氧，加重睾丸的生精微环境障碍，睾丸的生精功能进一步遭到破坏，表现为生精功能低下，生精阻滞，生精细胞排列紊乱，生精细胞脱落，导致精子生成减少或消失。临床上表现为少精子症，甚至无精子症。 

参仙组合药物由淫羊藿、仙茅、何首乌、女贞子和人参共五味中药组成，具有补气益元、滋阴补肾、生精补髓的功能。各组治疗后发现，睾丸曲细精管上皮层次有不同程度的修复，生精细胞功能得以恢复。其中尤以Ⅰ组、Ⅱ组更为明显。因此，我们推测参仙组合药物治疗免疫性不育的机制可能为直接作用于睾丸生精细胞，减轻抗体对局部生精细胞的损伤，改善局部组织的缺血、缺氧，从而使受损的睾丸生精细胞得以修复，生精功能得以恢复。光镜下Johnsen精子发生计数在治疗后明显上升，接近正常，提示动物睾丸生精功能的恢复。 

实施例3参仙组合药物对弱精子不育病症的活性考察 

健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠，体重200-230g。30只大鼠适应性饲养1周后，按体重随机分成6组：正常对照组、雷公藤多苷组、生理盐水组及参仙组合药物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组，每组5只。正常对照组每日予正常饮食，共42d；生理盐水组予生理盐水1ml/d，共28d；其余4组建立弱精子症大鼠模型：雷公藤多苷20mg/(kg·d)灌胃4周，之后将动物处死，分别进行睾丸组织切片的HE染色，并检测精子的密度、活力、活率及运动速度等各项指标，以判断模型建立是否成功。参仙组合药物组每日分别用小(0.01g/只)、中(0.02g/只)、大剂量(0.03g/只)参仙组合药物灌胃14d，最后将各组大鼠处死，并检测精子的密度、活力、活率及运动速度等各项功能指标。 

应用扩散法收集附睾尾精子。将左侧附睾取尾部放入2ml37℃生理盐水(需要提前预热)中，剪碎，放置2min，取100μl精子混悬液，加入1ml ML99精子培养液中，37℃恒温水浴2min，取lO μl加到预温的血细胞计数板用于精子质量分析。ML99精子培养液的配制：ML99冻干粉9.5g，NaHCO₃，2.2g，牛血清白蛋白5g，加双蒸水至1000ml，调pH值至7.2～7.4，用0.22um孔径的滤膜抽滤除菌，-20℃保存。 

采用计算机辅助精子分析系统(CASA)检测精子的密度、活力、活率及运动速度等各项功能指标。检测温度37℃，将经处理的精子混悬液涂于计数板上，选取6个视野，于2min内完成测试。主要检测指标有：精子密度、精子活力、精子活率、曲线运动速度(VCL)、直线运动速度(VSL)、平均路径速度(VAP)、直线性(LIN)、前向性(STR)、摆动性(WOB)、精子头侧摆幅度(ALH)、鞭打频率(BCF)、平均移动角度(MAD)。 

大鼠断颈处死后取睾丸，10％中性甲醛固定，梯度酒精脱水二甲苯透明，常规石蜡包埋。切片厚5um，贴于载玻片上，室温干燥。常规HE染色：切片于37℃的二甲苯中脱蜡10min，然后在室温下保温5min。梯度酒精逐级复水后，苏木精染液染色6min，自来水冲洗，1％盐酸酒精溶液分色数秒，自来水冲洗，入淡氨水中3min蓝化胞核，自来水冲洗，0.5％伊红染液中染色5min，自来水冲洗，乙醇系列逐级脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光镜下观察照相。 

所有实验数据均采用Prim 5.0软件进行统计分析和处理。实验数据以 表示。2组间数据的差异应用非配对t检验，各组间差异的分析采用方差分析并继之以Bonferroni posthoc检验，以P﹤0.05表示差异有统计学意义。 

造模第28日时，雷公藤多苷组大鼠精子的活率、活力、密度以及VSL、VAP、VCL等功能指标均较正常对照组和生理盐水组显著降低。睾丸组织HE染色发现，模型组大鼠生精小管内各级精母细胞和精子细胞数明显减少，生精细胞排列紊乱。与雷公藤多苷组相比，参仙组合药物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组均可显著提高模型大鼠精子的活率、活力、密度和运动速度(VSL、VAP、VCL)；而对精子的运动方式，参仙组合药物大剂量组可改善BCF、MAD。见表3、表4。 

表3各组大鼠附睾精子活率、活力、密度及运动速度比较 

注：与正常对照组比较，*P﹤0.05，**P﹤0.01；与生理盐水组比较，#P﹤0.05：与雷公藤多苷组比较，△P﹤0.05，△△P﹤：0.01，△△△P﹤0.001(下同) 

表4各组大鼠附睾精子运动方式比较 

参仙组合药物前期的研究表明，参仙组合药物能够明显提高弱精症患者的精子质量，增强其精子的活动力。有研究表明，ca²⁺是精子运动、获能、超活化，以及顶体反应和精卵结合等过程中起关键作用的信号分子；淫羊藿和何首乌能显著提升人体对钙的吸收，从而提高精子的质量，增强精子的运动力。结合本研究的实验结果，我们推论，参仙组合药物可能是通过激活精子细胞内的ca²⁺信号通路来提高精子的活力与运动能力，从而达到治疗弱精子症的作用。 

实施例4参仙组合药物对勃起功能障碍（阳痿）病症的活性考察 

健康SPF级雄性2月龄SD大鼠，体重250g左右，经交配实验证实均有正常性功能。正常喂养，置实验室适应环境1周后进行实验。采用实施例1所述的参仙组合药物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组，使用时按比例以蒸馏水溶解、稀释成为浓度分别为1.6g（原药材）/ml，前列素E1每天注射剂量为2μg/kg。 

低氧环境模型制备：大鼠喂养在无色玻璃制作的低氧舱内，自由饮食、昼夜交替饲养。舱体容积600L，容纳6个鼠笼，每个鼠笼内喂养4只大鼠。舱内置温湿度计、二个窗式空调器控制舱内温湿度：温度22-28℃，湿度50％-60％。舱内按照预定值充入氮氧混合气体，形成10％氧浓度的常压低氧环境。低氧舱内放置变色硅胶吸收湿气，大鼠呼吸产生的二氧化碳气体由钠石灰吸收，保持舱内的二氧化碳体积数低于3％。对照组在正常环境中饲养，其他条件相同。各组大鼠分别于6周后处死，取中段阴茎海绵体组织进行实验。 

取大鼠120只，适应性饲养1周后，按体质量随机分为6组，分别为常氧组组、模型组、前列腺E1组、参仙组合药物Ⅲ组、参仙组合药物Ⅱ组、参仙组合药物Ⅰ组，每组20只。 

相应实验时间称重，观察箱适应环境10min。每只大鼠在颈项松弛皮肤处注射阿朴吗啡，用生理盐水和0.5％维生素C注射液配制，按l00μg/kg给药，给药后立刻观察30min，记录阴茎有无勃起及勃起次数。判断指标：阴茎头充血及末端阴茎体出现为勃起一次。 

PCR扩增反应过程在75V电压条件下，进行电泳分析，溴化乙锭染色后，其产物利用凝胶成像分析系统分别进行扫描分析，结果以大鼠α-actin、OPN基因和内参β-actin照的光密度比值表示为各基因mRNA相对表达水平。利用NCBI基因数据库中已报道的大鼠α-actin、OPN和内参β-actin序列，采用Oligo6.71引物分析软件进行设计。 

采用SPSS 13.0统计软件包进行统计，各组数据采用均数加标准差 表示，根据数据资料性质采用t检验进行显著性分析，检验水准以P﹤0.05为有统计学意义，P﹤0.01为差异有显著性。 

实验组大鼠在低氧舱内仅一天即有明显的低氧症状出现，表现为精神不振、呼吸急促、厌食、体重增长缓慢，甚至体重减轻。6周后各组大鼠注射APO评价其勃起功能，常氧组为(5.31±1.77)次，低氧组为(1.43±0.89)次，Ⅲ组为(3.62±1.31)次Ⅰ组为(5.42±0.87)次模型组与对照组比较，勃起次数明显降低(P﹤0.001)，说明低氧实验动物模型建立成功。 

а-actin和OPN相对表达量的影响如表5所示。与常氧组比较，低氧模型组的-actin含量显著。降低(P﹤0.01)，OPN含量明显升高(P﹤0.01)。与低氧模型组比较，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的参仙组合药物组α-actin含量上升(P﹤0.05)，其中Ⅰ组含量上升明显(P﹤0.01)；OPN含量降低(P﹤0.05)，其中Ⅰ、Ⅱ剂量组含量下降明显(P﹤0.01)。 

表5参仙组合药物对低氧CCSM α-actin、OPN相对表达量的影响 

注：与常氧模型组比较，P﹤0.05；与低氧组比较，**P﹤0.01 

阴茎海绵体组织中平滑肌虽然只占45％，但其在调节阴茎勃起及维持勃起中起重要作用，是阴茎神经调控的主要效应器部位。因此，关于CCSMC的研究显得尤为重要。根据结构和功能的不同，人们将平滑肌分为收缩型和合成型两种类型。平滑肌细胞从收缩型转化为合成型并获得增殖能力，这个过程称为表型转化(phenotypic modulation)。病理条件下细胞的表型转化对机体有双重细胞生物学意义。在急性病变或慢性病变初期，表型转化的细胞通过增殖和分泌细胞外基质(ECM)等代偿反应进行必要的组织修复，对机体是有利的。但在慢性病变的进展过程中，由于致病因素持续作用，细胞的表型转化常失去调控而导致细胞过度增殖或肥大、分泌及降解ECM的能力失衡，有些细胞甚至可完全转化为另一类细胞表型，这些细胞将主动参与、促进或放大病变进程。 

研究发现：CCSMC中的α-肌动蛋白(α-actin)染色明显，据此推测阴茎海绵体平滑肌的收缩成分与血管平滑肌的收缩成分相似，CCSMC应与血管平滑肌细胞具有相似的收缩舒张功能。平滑肌仅α-actin球蛋白是SMC中普遍存在的含量丰富的蛋白质，在收缩型细胞中呈优势表达，而在合成型细胞中含量甚微，平滑肌α-actin表达是收缩表型的重要标志，也是应用 最的收缩型标志蛋白。而骨桥蛋白(OPN)是合成型的标志性蛋白，研究表明，合成型的血管平滑肌高表达OPN mRNA，用差异显示技术发现，OPN是血管平滑肌收缩型向合成型表型转化的标志基因。鉴于α-actin和OPN在血管平滑肌表型检测中的重要地位，本实验通过检测这两个特异标志物来观测参仙组合药物方对平滑肌表型转化的影响。