N,N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1,3-二胺衍生物及其制备方法

摘要

本发明涉及N,N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1,3-二胺衍生物及制备方法，主要解决N,N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1,3-二胺衍生物的扩展以及对其药物活性构效关系进行筛选的技术问题。结构通式见下式：式1，其中X为取代官能团，选自H、C1~C10直链或含有取代基侧链的烷基、烷磺酰基或烷甲酰基、芳基、芳香磺酰基、芳香甲酰基、芳香杂环磺酰基中的一种；Y为取代官能团，选自H、C1~C10直链或含有取代基侧链的烷基、烷磺酰基或烷甲酰基、芳基、芳香磺酰基、芳香甲酰基、芳香杂环磺酰基中的一种。

说明书

技术领域

本发明涉及N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺衍生物及其制备方法。

背景技术

烷烃二胺在环氧树脂固化剂、油品钝化剂、腐蚀抑制剂、医药中间体的合成等领域具有广泛的应用价值。特别是在药物研究的过程中，烷烃二胺作为一种桥联单元，可将关键的药效团单元有效连接整合到特定的结构中，形成具有特殊空间构型/构象的分子，从而能匹配生物体内不同生物大分子的空间结构，产生相应的生物活性或效用，所以具有广阔的应用前景。含有烷烃二胺结构单元的化合物被很多的实验证明具有各种各样的生物活性，以下为部分文献中已经公开的并与本发明技术密切相关的一些示例。 

文献药物化学杂志（J.Med.Chem. 2010, Vol.53, No.2, 916-919）以链状烷基二胺作为桥联单元，在传统治疗疟疾的药物氯喹啉上引入逆转剂二芳基，开发了一类新的化合物，用于抑制疟原虫对传统治疗疟疾药物的抗药性。如化合物1的50%抑制浓度为5 纳摩尔每升，且细胞毒性非常低（大于62000 纳摩尔每升）。

                                                  

    文献美国化学学会杂志（J.Am.Chem.Soc.1946,68, 1657-1658)首次报道了N,N-二烷基-N'-邻苯二甲酰基-烷烃二胺的合成方法，并认为大多数该类化合物具有一定的麻醉作用。作者着重研究了化合物2中R碳链的长度以及N原子被直链或带有支链烷基取代的化合物对麻醉作用的影响。

R为烷基链；R1和R2分别为氢或烷基 

肝纤维化是多种慢性肝病发展演变为肝硬化的必经阶段, 肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSC)的活化与增殖是肝纤维化发生的关键环节。通过干扰丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase, MAPK）通路，可以影响动物细胞内基因的转录和调控, 进而影响HSC的增殖、凋亡、分化、转化等生物学反应。文献生物有机化学杂志（Bioorg.Med.Chem.Lett. 16，2006，5809-5813）设计并合成了一种以2-芳基-3-哒嗪酮为模版的P38 MAP激酶通路的阻断剂的合成方法并对其药物活性构效关系进行了研究。其中化合物3对P38 MAP激酶通路的P38-α和P38-β亚型的50%抑制浓度分别为5纳摩尔每升和15纳摩尔每升。

许多自身免疫性疾病，例如多发性肝硬化、类风湿性关节炎、I或II型糖尿病、银屑病、哮喘病等都与电压敏感性钾离子通道(Kv)有着密切的关系。在药物化学研究中，Kv1.x亚属也通常被作为多种疾病研究的靶点。其中，对Kv1.3钾离子通道的抑制可以改善体内胰岛素的灵敏度，还可以通过促进能量释放来达到调节体重的目的。文献生物有机化学杂志（Bioorg.Med.Chem.Lett. (20)，2010，6983-6988）报道了一类新的Kv1.3钾离子通道小分子抑制剂，完善该类抑制剂的药物活性构效关系。其中化合物4对Kv1.3钾离子通道的50%抑制浓度为0.31微摩尔每升。 

基于上述文献的研究，我们设计并合成了新的N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺衍生物，拓宽了N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺衍生物的范围，进一步完善了其药物活性构效关系的研究，有助于我们发现更多的药物活性中间体或药物活性化合物。

发明内容

本发明的目的是在于提供一种N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺衍生物的制备方法。主要解决N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺衍生物的扩展以及对其药物活性构效关系进行筛选的技术问题。

技术方案为：一种N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺衍生物，结构通式见下式：

式1

其中X为取代官能团，选自H、C1~C10直链或含有取代基侧链的烷基、烷磺酰基或烷甲酰基、芳基、芳香磺酰基、芳香甲酰基、芳香杂环磺酰基中的一种；Y为取代官能团，选自H、C1~C10直链或含有取代基侧链的烷基、烷磺酰基或烷甲酰基、芳基、芳香磺酰基、芳香甲酰基、芳香杂环磺酰基中的一种。

根据本发明，N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺衍生物及其药用盐或溶剂化物，优选的化合物是：当式1中Y为苄基时，为式I所示的N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺衍生物：

其中X为取代官能团，选自H、C1~C10直链或含有取代基侧链的烷基、烷磺酰基或烷甲酰基、芳基、芳香磺酰基、芳香甲酰基、芳香杂环磺酰基中的一种。

在此基础上，本发明进一步优选的化合物包括但不限于：

I-a: N, N-二苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺

I-b: N-苯磺酰基-N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺

I-c: N-3-吡啶磺酰基-N-4-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺

I-d: N-苯甲酰基-N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺

I-e: N-4-磺酰基-1-甲基-1-氢吡唑-N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺

    上述提及的化合物结构式如下所示：

 

    根据本发明，N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺衍生物及其药用盐或溶剂化物，优选的化合物是：当式1中Y为4-吡啶苄基时，为式II所示的N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺衍生物：

其中X为取代官能团，选自H、C1~C10直链或含有取代基侧链的烷基、烷磺酰基或烷甲酰基、芳基、芳香磺酰基、芳香甲酰基、芳香杂环磺酰基中的一种。

在此基础上，本发明进一步优选的化合物包括但不限于：

II-a: N-苯甲酰基-N-4-吡啶苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺

II-b: N-3-吡啶磺酰基-N-4-吡啶苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺

II-c: N-4-磺酰基-1-甲基-1-氢吡唑-N-4-吡啶苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺

上述提及的化合物结构式如下所示：

    根据本发明，N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺衍生物及其药用盐或溶剂化物，优选的化合物是：当式1中Y为5-亚甲基-3-甲基异恶唑时，为式III所示的N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺衍生物：

其中X为取代官能团，选自H、C1~C10直链或含有取代基侧链的烷基、烷磺酰基或烷甲酰基、芳基、芳香磺酰基、芳香甲酰基、芳香杂环磺酰基中的一种。

在此基础上，本发明进一步优选的化合物包括但不限于：

III-a: N-3-吡啶磺酰基-N-5-亚甲基-3-甲基异恶唑-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺

III-b: N-苯甲酰基-N-5-亚甲基-3-甲基异恶唑-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺

III-c: N-4-磺酰基-1-甲基-1-氢吡唑-N-5-亚甲基-3-甲基异恶唑-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺

上述提及的化合物结构式如下所示：

上述化合物为一类结构新颖的1, 3-二胺化合物，目前无任何文献报道其结构及合成方法。

式I所述的N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺衍生物的制备方法，包括以下步骤：采用邻苯二甲酰亚胺1 与丙烯醛反应，得到化合物2，化合物 2与苄胺反应，得到化合物 3，化合物 3 再与苄溴或酰氯反应，得到化合物I-a~e，反应式如下：

其中，X为苄溴、苯磺酰氯、苯甲酰氯、3-磺酰氯吡啶、4-磺酰氯-1-甲基-1-氢吡唑中的一种。

 式II所述的N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺衍生物的制备方法，包括以下步骤：采用化合物 2为原料，化合物 2与4-吡啶苄胺反应，得到化合物 4，化合物 4 再与 酰氯反应，得到化合物II-a~c，反应式如下： 

其中，X为苯甲酰氯、3-磺酰氯吡啶、4-磺酰氯-1-甲基-1-氢吡唑中的一种。

式III所述的N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺衍生物的制备方法，包括以下步骤：采用化合物 2为原料，化合物 2与5-亚甲胺基-3-甲基异恶唑反应，得到化合物 5，化合物 5 再与酰氯反应，得到化合物III-a~c，反应式如下：

其中，X为苯甲酰氯、3-磺酰氯吡啶、4-磺酰氯-1-甲基-1-氢吡唑中的一种。

本发明的有益效果：我们设计并合成了一系列新的N, N-二取代-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺化合物。通过在N原子上引入不同官能团，增加底物分子的多样性的同时，也达到改变了这类化合物的极性、脂溶性、水溶性等目的，而且也很可能改变生理活性，生物代谢稳定性等以期发现具有新的生理活性的化合物，为制备具有生物活性的药物奠定了基础。经实验测试此类化合物对手足口病的EV-71病毒具有一定的抑制作用，有可能发展成为治疗手足口病的药物。

具体实施方式

列举实施例以对本发明做详细描述，但本发明并不限于这些实施例。

实施例1：N, N-二苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺I-a的制备

操作步骤：

在一个250毫升的三颈反应瓶中，将钠（0.18克，7.8毫摩尔）溶于无水乙醇（100毫升）中，用冰浴冷却到0℃，将邻苯二甲酰亚胺1（11克，74.8毫摩尔）加入，然后滴加丙烯醛（5.3克，93.6毫摩尔），滴完后在室温下搅拌反应2小时。将反应液用冰醋酸淬灭，用乙酸乙酯萃取三次，干燥有机相并浓缩干得粗品。将粗品经柱层析纯化得到5.9克N-邻苯二甲酰基-3-氨基丙醛2，收率39%。 HNMR (CDCl₃) d: 9.58（s，1H），7.23-7.26（m，4H），4.60-4.62（m，2H），2.98-3.18（m，2H）。

将N-邻苯二甲酰基-3-氨基丙醛2（2克，10毫摩尔）和三乙胺（2.1 毫升）溶于1,2-二氯乙烷（150毫升）溶液中，用冰浴冷却到0℃，然后滴加苄胺（2.2克，20毫摩尔），滴完后在室温下搅拌反应5分钟，然后将三乙酰氧基硼氢化钠（4.2克，20毫摩尔）加入，加完后在室温下搅拌反应45分钟。将反应液用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭，用二氯甲烷萃取三次，干燥有机相并浓缩干得粗品。将粗品经柱层析纯化得到1.9克N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺3，收率65%。HNMR (CDCl₃) d: 7.54-7.66（m，4H），7.23-7.26（m，5H），4.60-4.62（m，2H），4.02（s，2H），2.43-2.56（m，2H），1.89-2.01（m，2H）。 

将N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺3（2克，3.4毫摩尔）溶于四氢呋喃（20毫升）溶液中，用冰浴冷却到0℃，然后将钠氢（140毫克，3.5毫摩尔）加入，加完后在0℃下搅拌反应30分钟。然后滴加苄溴（581毫克，3.4毫摩尔），滴完后在0℃下搅拌反应45分钟，将反应液用水淬灭，用二氯甲烷萃取三次，干燥有机相并浓缩干得粗品。将粗品经柱层析纯化得到849毫克N, N-二苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺I-a，收率65%。HNMR (CD₃OD) d: 7.54-7.66（m，4H），7.23-7.26（m，10H），4.60-4.62（m，2H），4.05（s，4H），2.42-2.58（m，2H），1.70-1.91（m，2H）。

实施例2：N-苯磺酰基-N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺I-b的制备

操作步骤：

将N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺3（2克，6.8毫摩尔）和三乙胺（2.1 毫升）溶于二氯甲烷（150毫升）溶液中，用冰浴冷却到0℃，然后滴加苯磺酰氯（952毫克，6.8毫摩尔），滴完后在室温下搅拌反应2小时。将反应液用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭，用二氯甲烷萃取三次，干燥有机相并浓缩干得粗品。将粗品经柱层析纯化得到2.9克N-苯磺酰基-N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺I-b，收率65%。HNMR (CD₃OD) d: 7.73-7.77（m，4H），7.43-7.65（m，5H），7.07-7.15（m，5H），4.25（s，2H），3.42-3.45（m，2H），3.01-3.10（m，2H），1.62-1.69（m，2H）。 

实施例3：N-3-吡啶磺酰基-N-4-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺I-c的制备

操作步骤：

将N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺3（2克，6.8毫摩尔）和三乙胺（2.1 毫升）溶于二氯甲烷（150毫升）溶液中，用冰浴冷却到0℃，然后滴加3-吡啶磺酰氯（1.2克，6.8毫摩尔），滴完后在室温下搅拌反应2小时。将反应液用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭，用二氯甲烷萃取三次，干燥有机相并浓缩干得粗品。将粗品经柱层析纯化得到1.9克N-3-吡啶磺酰基-N-4-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺I-c，收率65%。HNMR (CD₃OD) d: 8.97-9.02 (m, 1H), 8.82-8.86 (m, 1H), 8.34-8.38 (m, 1H) 7.81-7.85 (m, 4H), 7.68-7.72 (m, 1H), 7.19-7.22 (m, 2H), 7.12 -7.16 (m, 3H), 4.34-4.38 (m, 2H), 3.48-3.52 (m, 2H), 3.17-3.21 (m, 2H), 1.67-1.74 (m, 2H)。

实施例4：N-苯甲酰基-N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺I-d的制备

操作步骤：

将N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺3（200毫克，0.68毫摩尔）和三乙胺（137毫克，1.36毫摩尔）溶于二氯甲烷（10毫升）溶液中，用冰浴冷却到0℃，然后滴加苯甲酰氯（123毫克，1.02毫摩尔），滴完后在室温下搅拌反应2小时。将反应液用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭，用二氯甲烷萃取三次，干燥有机相并浓缩干得粗品。将粗品经柱层析纯化得到176毫克N-苯甲酰基-N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺I-d，收率65%。 HNMR (CD₃OD) δ：7.65 - 7.80 (m, 4 H), 6.90 - 7.45 (m, 10 H), 4.72 (s, 1 H), 4.49 (s, 1 H), 3.65 (brs, 1 H), 3.44 (brs, 1 H), 3.36 (brs, 1 H), 3.11 (brs, 1 H), 1.98 (brs, 1 H), 1.81 (brs, 1 H)。

实施例5：N-4-磺酰基-1-甲基-1-氢吡唑-N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺I-e的制备

操作步骤：

将N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺3（200毫克，0.68毫摩尔）和三乙胺（3 毫升）溶于二氯甲烷（5毫升）溶液中，用冰浴冷却到0℃，然后滴加4-磺酰氯-1-甲基-1-氢吡唑（170毫克，1.01毫摩尔），滴完后在室温下搅拌反应2小时。将反应液用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭，用二氯甲烷萃取三次，干燥有机相并浓缩干得粗品。将粗品经柱层析纯化得到194毫克N-4-磺酰基-1-甲基-1-氢吡唑-N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺I-e，收率65%。HNMR (CD₃OD) d: 8.76-8.77 (m, 3H), 8.25 (s, 1H), 8.07-8.09 (m, 2H), 7.88 (s, 1H), 7.75-7.82 (m 4H), 4.54 (s, 2H), 3.86 (s, 1H), 3.62-3.69(m 2H), 3.29-3.32(m, 2H), 1.75-1.80 (m, 2H)。

实施例6：N-苯甲酰基-N-4-吡啶苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺II-a的制备

操作步骤：

将N-邻苯二甲酰基-3-氨基丙醛2（1克，4.9毫摩尔）和三乙胺（1.4 毫升）溶于1,2-二氯乙烷（75毫升）溶液中，用冰浴冷却到0℃，然后滴加4-吡啶苄胺（0.8克，7.3毫摩尔），滴完后在室温下搅拌反应5分钟，然后将三乙酰氧基硼氢化钠（1.5克，7.1毫摩尔）加入，加完后在室温下搅拌反应45分钟。将反应液用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭，用二氯甲烷萃取三次，干燥有机相并浓缩干得粗品。将粗品经柱层析纯化得到795毫克N-4-吡啶苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺4，收率55%。HNMR (CDCl₃) d: 7.44-7.66（m，4H），7.13-7.28（m，4H），4.58-4.62（m，2H），4.00（s，2H），2.45-2.67（m，2H），1.90-2.11（m，2H）。 

将N-4-吡啶苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺4（200毫克，0.7毫摩尔）和三乙胺（1.1 毫升）溶于二氯甲烷（10毫升）溶液中，用冰浴冷却到0℃，然后滴加苯甲酰氯（100毫克，0.7毫摩尔），滴完后在室温下搅拌反应2小时。将反应液用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭，用二氯甲烷萃取三次，干燥有机相并浓缩干得粗品。将粗品经柱层析纯化得到140毫克N-苯甲酰基-N-苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺II-a，收率50%。HNMR (CDCl₃) d: 8.77 (s, 2H), 7.98-7.99 (m, 2H), 7.79 (s, 4H), 7.35-7.37 (m, 3H), 7.16-7.19 (m, 2H), 4.99 (s, 2H), 3.48-3.51 (m, 2H), 3.38-3.40 (m, 2H), 1.95-1.98 (m, 2H)。

实施例7：N-3-吡啶磺酰基-N-4-吡啶苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺II-b的制备

操作步骤：

将N-4-吡啶苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺4（200毫克，0.7毫摩尔）和三乙胺（1.1 毫升）溶于二氯甲烷（10毫升）溶液中，用冰浴冷却到0℃，然后滴加3-吡啶磺酰氯（135毫克，0.7毫摩尔），滴完后在室温下搅拌反应2小时。将反应液用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭，用二氯甲烷萃取三次，干燥有机相并浓缩干得粗品。将粗品经柱层析纯化得到198毫克N-3-吡啶磺酰基-N-4-吡啶苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺II-b，收率65%。HNMR (CDCl₃) d:  9.04 (s, 1H), 8.84-8.85 (m, 1H), 8.79-8.80 (m, 2H), 8.31-8.34 (m, 1H), 8.09-8.11 (m, 2H), 7.79-7.80 (m, 4H), 7.66-7.69 (m, 1H), 4.69 (s, 2H), 3.60-3.63 (m, 2H), 3.36-3.40 (m, 2H), 1.73-1.77 (m, 2H)。

实施例8：N-4-磺酰基-1-甲基-1-氢吡唑-N-4-吡啶苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺II-c的制备

操作步骤：

将N-4-吡啶苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺4（200毫克，0.7毫摩尔）和三乙胺（1.1 毫升）溶于二氯甲烷（10毫升）溶液中，用冰浴冷却到0℃，然后滴加4-磺酰氯-1-甲基-1-氢吡唑（126毫克，0.7毫摩尔），滴完后在室温下搅拌反应2小时。将反应液用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭，用二氯甲烷萃取三次，干燥有机相并浓缩干得粗品。将粗品经柱层析纯化得到168毫克N-4-磺酰基-1-甲基-1-氢吡唑-N-4-吡啶苄基-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺II-c，收率55%。HNMR (CDCl₃) d: 8.76 (d, J = 8 Hz, 2H), 8.24 (s, 1H), 8.06-8.08 (m, 2H), 7.86 (s, 1H), 7.76-7.82 (m, 4H), 4.53 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.62-3.67(m, 2H), 3.293.30 (m, 2H), 1.77-1.80 (m, 2H)。 

实施例9：N-3-吡啶磺酰基-N-5-亚甲基-3-甲基异恶唑-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺III-a的制备

操作步骤：

将N-邻苯二甲酰基-3-氨基丙醛2（1克，4.9毫摩尔）和三乙胺（1.4 毫升）溶于1,2-二氯乙烷（75毫升）溶液中，用冰浴冷却到0℃，然后滴加5-亚甲胺基-3-甲基异恶唑（810毫克，7.3毫摩尔），滴完后在室温下搅拌反应5分钟，然后将三乙酰氧基硼氢化钠（1.5克，7.1毫摩尔）加入，加完后在室温下搅拌反应45分钟。将反应液用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭，用二氯甲烷萃取三次，干燥有机相并浓缩干得粗品。将粗品经柱层析纯化得到747毫克N-5-亚甲基-3-甲基异恶唑-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺5，收率51%。HNMR (CDCl₃) d: 7.85-7.88（m，4H），5.87（s，1H），4.58-4.62（m，2H），4.01（s，2H），2.45-2.67（m，2H），2.33（s，3H），1.70-1.79（m，2H）。 

 将N-5-亚甲基-3-甲基异恶唑-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺5（200毫克，0.67毫摩尔）和三乙胺（1.1 毫升）溶于二氯甲烷（10毫升）溶液中，用冰浴冷却到0℃，然后滴加3-吡啶磺酰氯（136毫克，0.7毫摩尔），滴完后在室温下搅拌反应2小时。将反应液用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭，用二氯甲烷萃取三次，干燥有机相并浓缩干得粗品。将粗品经柱层析纯化得到192毫克N-3-吡啶磺酰基-N-5-亚甲基-3-甲基异恶唑-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺III-a，收率65%。HNMR (CDCl₃) d: 8.94 (s, 1H), 8.77 -8.78 (m, 1H), 8.24-8.26 (m, 1H), 7.81-7.86 (m, 4H), 7.60-7.64 (m, 1H), 6.18 (s, 1H), 4.63 (s, 2H), 3.65-3.68 (m, 2H), 3.32-3.34 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 1.90-1.94 (m, 2H)。 

实施例10：N-苯甲酰基-N-5-亚甲基-3-甲基异恶唑-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺III-b的制备

操作步骤：

    将N-5-亚甲基-3-甲基异恶唑-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺5（200毫克，0.67毫摩尔）和三乙胺（1.1 毫升）溶于二氯甲烷（10毫升）溶液中，用冰浴冷却到0℃，然后滴加苯甲酰氯（109毫克，0.7毫摩尔），滴完后在室温下搅拌反应2小时。将反应液用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭，用二氯甲烷萃取三次，干燥有机相并浓缩干得粗品。将粗品经柱层析纯化得到176毫克N-苯甲酰基-N-5-亚甲基-3-甲基异恶唑-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺III-b，收率65%。HNMR (CDCl₃) d:7.75-7.79 (m, 2H), 7.44-7.47 (m, 2H), 7.24-7.27 (m, 2H), 7.11-7.14 (m, 2H), 6.91-6.98 (m, 1H), 6.28 (s, 1H), 4.82 (s, 2H), 4.60-4.62 (m, 1H), 3.70-3.75 (m, 1H), 3.49 (s, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.91-1.94 (m, 2H)。 

实施例11：N-4-磺酰基-1-甲基-1-氢吡唑-N-5-亚甲基-3-甲基异恶唑-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺III-c的制备

操作步骤：

    将N-5-亚甲基-3-甲基异恶唑-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺5（200毫克，0.67毫摩尔）和三乙胺（1.1 毫升）溶于二氯甲烷（10毫升）溶液中，用冰浴冷却到0℃，然后滴加4-磺酰氯-1-甲基-1-氢吡唑（126毫克，0.7毫摩尔），滴完后在室温下搅拌反应2小时。将反应液用饱和的碳酸氢钠水溶液淬灭，用二氯甲烷萃取三次，干燥有机相并浓缩干得粗品。将粗品经柱层析纯化得到193毫克N-4-磺酰基-1-甲基-1-氢吡唑-N-5-亚甲基-3-甲基异恶唑-N'-邻苯二甲酰基-1, 3-二胺III-c，收率65%。HNMR (CDCl₃) d:  8.07 (s, 1H), 7.83-7.85 (m, 2H), 7.77-7.80 (m, 2H), 7.69 (s, 1H), 6.22 (s, 1H), 4.47 (s, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.65-3.68 (m, 2H), 3.19-3.23 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 1.88-1.92 (m, 2H)。 

为了更好地理解本发明的实质，下面用本发明所涉及的化合物II-c对手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)的EV-71病毒进行了细胞内抑制作用的药理实验，其结果说明了该发明在制药领域中的新用途。

实施例12：本发明所涉及化合物II-c对EV-71病毒在细胞内的抑制实验

操作步骤：

1) 植入细胞：取汇合率达90%以上的RD细胞，胰酶消化后植入96孔板，每孔100 uL，密度为 10000 细胞/孔，37℃，二氧化碳培养箱中孵育24小时；

2) 化合物准备：先用二甲基亚砜（DMSO）将化合物母液进行梯度稀释，再用质量百分浓度为 2% 的胎牛血清培养基（FBS DMEM ）稀释成4倍；

3) 化合物加入：将4倍化合物按照排布信息加入已植入细胞的96孔板种，每孔50uL (双复孔)；

4) 病毒液加入：将病毒母液融化，用质量百分浓度为 2%的 FBS DMEM 稀释 8000 倍后加入相应孔中，每孔50uL，所有96孔板置于37℃，二氧化碳培养箱中孵育72小时；

5) CCK-8检测：孵育完毕，向孔板中加入检测试剂20 uL每孔的CCK-8检测细胞的活力以判断化合物的抗病毒效果。37℃孵育4小时后用酶标仪读取吸光值；

6) 数据处理： 使用如下公式计算化合物的抑制率：抑制率=（加药孔吸光值-病毒对照孔吸光平均值）/（细胞对照孔吸光平均值-病毒对照孔吸光平均值）×100， 细胞存活率=（加药孔吸光值-培液与CCK8对照吸光平均值）/（细胞对照孔吸光平均值-培液与CCK8对照吸光平均值）×100；

7) 实验数据:

II-c>100 uMII-c>VCCC0.42781.09840.4011.36070.47881.00590.4311.4547

         VC：病毒对照孔；CC：细胞对照孔

       根据6) 中公式计算得到化合物II-c在100uM和33.3uM时的抑制率分别为3.8%和64.2%。

 实验结论：本实验表明此类化合物对手足口病的EV-71病毒具有一定的抑制作用，有可能发展成为治疗手足口病的药物。

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