OsDLS1基因在调控水稻叶片衰老及抽穗期方面的应用

摘要

本发明涉及HD-ZipIII家族成员OsDLS1在调控水稻衰老及抽穗期方面的应用。其中HD-ZipIII家族成员OsDLS1基因的核苷酸序列为SEQIDNo.1所示，OsDLS1编码一个855个氨基酸的蛋白质，序列为SEQIDNo.2所示。OsDLS1基因的mRNA序列为SEQIDNo.3所示。本发明公开的OsDLS1基因的核苷酸序列对于进一步提高水稻产量，减少因不良环境而导致的水稻产量的损失，为水稻的分子育种提供设计方案，确保粮食安全具有重要的意义。

说明书

本研究得到国家自然科学基金项目 (No. 31171515)及天津市应用基础及前沿技术研究计划重点项目（No. 11JCZDJC17900）的资助。

技术领域

本发明属于水稻整体生长发育情况改进技术领域，涉及对于水稻的育种、品种改良的研究工作，更具体地说是HD-Zip III家族成员OsDLS1基因，及其该基因在调控水稻叶片衰老及抽穗期方面的应用。

背景技术

我国是世界上最大的稻米生产国和消费国，水稻产量直接关系到我国粮食安全，因此提高水稻产量对确保我国农业持续稳定发展和社会稳定有十分重要的战略意义。我国在杂交水稻超高产育种中已取得了重大突破，杂交水稻产量大幅度提高。但是杂交水稻尤其是亚种间杂交水稻容易早衰，使籽粒充实度差（袁隆平1990）。植物的衰老是外界环境和基因网络共同作用的结果，是植物内基因程序性表达的结果。在不良外界环境的影响下，水稻叶片常会发生较早的衰老，叶片过早的变黄枯萎，从而使水稻营养生长不良，造成其生殖器官灌浆不盈，空秕粒增多，大大影响了水稻的产量。由于水稻叶片是水稻最主要的绿色器官之一，是水稻进行光合作用产生营养物质最主要的器官，水稻叶片早衰常引起库源关系转化紊乱，营养物质的产生及运输受阻，从而造成水稻减产。另外，水稻叶片早衰造成细胞结构过早的不合时宜的崩解，内膜系统破坏，大分子物质降解等使整个植株衰亡。因此，从水稻中分离衰老调控途径中重要的功能基因，深入研究其功能，弄清其在水稻叶片衰老过程中的调控途径，研究水稻叶片衰老的机理，发展和完善水稻叶片衰老调控网络，有利于解决水稻生长后期的早衰问题，对于进一步提高水稻产量，减少因不良环境而导致的水稻产量的损失，为水稻的分子育种提供设计方案，确保粮食安全具有重要的意义。

    另外，水稻的抽穗期是水稻的一个重要农艺性状，我国从低纬度海南地区(~ 22° N，短日照热带地区)到高纬度东北黑龙江地区(~ 45° N，长日照寒冷地区)都有栽培稻分布，甚至在黑河(~ 50° N)也有少量分布(徐文霞，1999)。栽培稻如此宽广的分布与水稻的一个重要农艺性状—抽穗期的适应性紧密相关，即水稻在长期的栽培驯化过程中，在人工选择条件下，一些适应当地环境条件的变异品种保存下来，使得其能在当地条件下抽穗开花，并得到推广应用。因此对水稻抽穗期适应性的分子机理研究可以为水稻的驯化历史及水稻未来的适应性推广提供新的证据和洞察力，对于水稻的育种、品种改良提供科学依据。

植物叶片对植物的生长发育至关重要，它可以通过光合作用将光能及CO₂转化成植物可以利用的有机化合物，以供其本身及植物其它组织器官的生长发育。近年来，水稻叶片过早衰老导致水稻减产引起了国内的重视，一些研究者从植物生理的角度进行了研究，例如低浓度的Ca²⁺能提高叶片中叶绿素含量和蛋白质含量，提高过氧化物酶活性，延缓叶片的衰老进程（朱诚等2002）；另外，通过降低库源比，能减缓杂交水稻叶片中蛋白质含量和叶绿素含量的下降（段俊等1997）。虽然国内外在生理生化方面已有数十年的研究，但对于植物叶片衰老的基因调控网络仍不清楚和完善。

正常生长条件下，植物叶片衰老是一个主动的过程。植物叶片衰老主要由叶龄信息控制的，当叶片发育成熟并达到一定的叶龄后，叶片细胞自动启动衰老程序。虽然植物叶片的衰老主要是由内在基因控制的一个主动过程，但其仍然受外界环境的影响。诱发植物衰老的外界因素主要包括一些生物及非生物胁迫。生物因素主要表现病虫害的侵染，当植物受到病虫伤害后，一方面，植物会启动自我保护机制，表现出一种超敏反应，从而诱发植物衰老。实际上，植物所产生的这种超敏反应也是一种细胞程序性死亡(Van Doorn, 2005)。诱发植物叶片衰老的非生物因素包括机械损伤、干旱、高温高热、及氧化胁迫等。这些非生物胁迫常与不同激素途径(乙烯、ABA、JA等调控途径)相互作用调控植物器官的衰老，例如向日葵中，HD-Zip转录因子家族成员HAHB4转录因子在病虫侵蚀、机械损伤及水分胁迫条件下表达量迅速上升。另外，当用乙烯或茉莉酸甲酯MeJA处理时，HAHB4的转录水平也迅速增加。过量表达HAHB4基因的转基因植株在用机械伤害处理前后，JA和乙烯的含量都增加了，表明HAHB4正向调控JA和乙烯的合成量，从而正向调控植物叶片的衰老(Manavella et al. 2008)。

植物叶片衰老首先从叶尖或叶缘开始向叶的中间及基部蔓延，叶片逐渐变黄枯萎至整个叶片脱落死亡。在叶片衰老的进程中，最明显的变化就是叶绿素的降解。最近通过几个滞绿突变体已在拟南芥和水稻中鉴定出几个调控叶绿素降解的功能基因。复旦大学蒯本科研究组利用模式植物拟南芥鉴定了一个调控植物绿色器官衰老进程中叶绿素降解的一个关键基因AtNYE1（Ren et al. 2007），揭示了植物在衰老进程中，植物叶片光合作用的主要物质叶绿素如何被程序性降解。水稻NYC1基因是从水稻滞绿突变体nyc1中克隆得到，NYC1是光系统II(PSII)中LHCPII(light-harvesting complex II )的组成部分，负责叶绿素的降解(Kusaba et al. 2007)。在nyc1突变体中，在植物叶片衰老期，叶绿素不能正确降解，从而使突变体叶片在衰老时期仍然表现绿色。Sato等(Sato et al. 2009)报道了一个类似nyc1突变体nol，该突变体表型与nyc1相似，叶绿素在成熟期能维持较长时间，叶绿体基粒片层结构在成熟衰老期也保持稳定。nyc1nol双突变体能持久抑制叶绿素的降解。另一个水稻滞绿突变体sgr叶片与野生型植株相比，在衰老后期能维持更长时间的绿色，延迟了叶片衰老。过表达SGR明显加速了叶片叶绿素的降解，叶片呈现棕黄色表型，表明SGR正向调控水稻叶片衰老(Park et al. 2007)。Jiang等(Jiang et al. 2007)也报道了一个从水稻滞绿突变体sgr中克隆的基因SGR，该基因编码一个推断的叶绿体转运肽，在正常生长条件下表现组成型低丰度表达，但在黑暗诱导或者ABA处理条件下，表达水平增加，而在细胞分裂素CTK处理条件下表达水平下降。过量表达该基因加速了水稻叶片的衰老，表明该SGR可以正向调控水稻叶片衰老。

植物衰老常受植物激素调控，植物激素在叶片衰老的各个时期都起作用，乙烯对于植物叶片衰老具有正向调控作用，增加乙烯含量可以加速植物叶片衰老。北京大学郭红卫研究组系统的研究了植物激素乙烯调控植物叶片衰老的信号转导途径，并揭示出不同植物激素通过交互作用共同调控植物叶片的衰老（Chen etal. 2009; Zhong et al. 2009, 2010）。Jing等报道了将乙烯信号转导与叶龄依赖的衰老途径整合在一起的调控途径，并利用拟南芥old1(onset of leaf death 1)突变体克隆出了这一调控途径中的关键基因OLD1。给old1突变体施加外源乙烯则会加速早期叶片衰老，表明OLD1负向调控乙烯在叶龄依赖叶片衰老中的作用(Jing et al. 2005)。细胞分裂素（Cytokinin, CTK）对于延缓植物的衰老具有重要的作用。细胞分裂素主要在根部合成，通过木质部转移到植物其它部分起作用。Kim等(Kim et al. 2006)利用拟南芥功能获得性突变体ore12-1克隆获得了CTK受体基因AHK3，发现其在CTK介导的叶片衰老调控中起关键作用。

一些受体激酶也被鉴定涉及植物叶片衰老，南开大学王宁宁研究组鉴定了一个大豆受体激酶基因GmSARK，过表达该基因加速了大豆叶片的衰老进程，表明该基因涉及大豆叶片衰老调控（Li 　et al. 2006）。这些受体激酶是WARK转录因子的靶标，与调控WARK转录因子相互作用共同调控叶片衰老（Robatzek et al. 2002）。另外，植物叶片衰老受光条件的诱导及叶片中糖浓度的调节，拟南芥己糖激酶基因HXK1是一个典型的受光照强度调控植物叶片衰老的基因，该基因从葡萄糖不敏感突变体gin2中克隆得到，当外源葡萄糖浓度达到6%时，野生型植株生长发育停滞，而gin2仍能正常生长。在正常光照条件下，野生型和突变体叶片表现正常生长，然而，在高光照强度处理下，野生型植株叶片迅速衰老变黄，而gin2突变体植株虽减少了生长量，但其叶片衰老延迟，叶色浓绿(Moore et al. 2003)。表明HXK1通过整合外部光照信号和内在基因信号而调控植物的衰老。

发明内容

本发明的目的在于提供HD-Zip III家族成员OsDLS1基因及其应用。

本发明的上述目的是通过如下的方法予以实现：

HD-Zip III家族成员OsDLS1基因的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示，OsDLS1编码一个855个氨基酸的蛋白质序列为SEQ ID No.2所示。

本发明所述HD-Zip III家族成员OsDLS1基因的mRNA序列为SEQ ID No.3所示。

本发明进一步公开了HD-Zip III家族成员OsDLS1基因及蛋白质在制备调控水稻叶片衰老及水稻抽穗期方面的应用。

本发明的实验结果表明：

（1）HD-Zip III家族成员OsDLS1基因可以调控水稻叶片的衰老，当OsDLS1基因功能丧失或下降后，加速了水稻叶片的衰老，当OsDLS1基因功能上调（过表达）后延缓了水稻叶片的衰老。

（2）OsDLS1基因可以促进水稻在长日照条件下的抽穗，当OsDLS1基因功能丧失或下降后，水稻在长日照条件下的抽穗期推迟。

附图说明:

图1 OsDLS1转录因子结构域及其亚家族成员；其中A：OsDLS1转录因子结构域；B：水稻中HD-ZIP III亚家族成员同源关系；

图2　RNAi转基因植株的表型；其中A：RNAi转基因植株的表型。RNAi转基因植株叶片首先叶尖变黄，叶片中下部出现锈斑，之后锈斑扩展至整个叶片，最终使叶片枯萎死亡。B：RNAi转基因植株目的基因表达检测，CK为空载体转基因植株。C：OsDLS1的同源基因在RNAi转基因植株中的表达；

图3　过表达转基因植株的表型；其中A：过表达转基因植株的表型。当野生型植株叶片开始干枯时，过表达转基因植株叶片还处于完全绿色，未表现出干枯。B：过表达转基因植株目的基因表达检测，WT为野生型中花11，OV1~OV5为过表达转基因植株；

图4 OsDLS1在不同组织中的表达；其中A：OsDLS1在叶、第二节间茎、穗下茎、幼穗、成熟花器官及幼嫩分生组织中的表达。B：OsDLS1在叶不同发育时期的表达。

具体实施方式：

为了更充分的解释本发明的实施，提供HD-Zip III家族成员OsDLS1基因的制备实施实例。这些实施实例仅仅是解释、而不是限制本发明的范围。其中所用的试剂均有市售。

实施例1

1植物材料：粳稻品种中花11（有市售）（Oryza sativa L. ssp. Japonica）用于本实验中。

方法

2．1 RNAi载体的构建

  我们构建了两个RNAi载体，一个干涉区段位于5’-UTR区，另一个干涉区段位于3’-UTR区。用于构建RNAi载体的两个干涉区段从水稻基因组DNA中扩增得到，所用引物序列为：RNAi-3’UTR: IHD1：5’-CACCATCCATGGTTTCCAG-3’和IHD2: 5’-GGTAACTCAATGCCGATTGC-3’。RNAi-5’UTR: IHD3: 5’- CACCGGTCGAGAGA GAAAGT-3’和IHD4: 5’-TCCTCCTCGTCGCTGCTTGT-3’。扩增好的片段用pENTR^TM Directional TOPO Cloning Kits(Invitrogen, USA)根据说明书上的程序构建到目的载体pANDA35HK中，通过酶切及PCR方法鉴定正确的克隆用农杆介导的方法转化水稻材料中花11(Hiei et al. 1994)。PCR扩增条件为：1 min / 95℃; 30 cycles (30 sec / 94℃, 30 sec / 59℃, 30 sec / 72℃); 5 min / 72℃。

反应体系如下(总体积20μL)：

DNA                               10－30ng

10×Buffer(含20 mM Mg²⁺)           2μL

dNTP（2.5mM）                  　　0.2mM

PrimerF (IHD1/IHD3)                0.2μM

PrimerR (IHD2/IHD4)                0.2μM

ExTaq酶（TaKaRa）                  1 U

ddH₂O补至                           20μL

2．2 过表达载体的构建

带有完整ORF的OsDLS1基因的cDAN从15天大小的水稻幼苗中通过RT-PCR方法获得，在引物设计中引入SmaI和SacI两个酶切位点用于与载体中相应酶切位点连接。扩增的引物序列为：OSHDF:5’-ATGACCCGGGCGAGTTCTTGCTGGGTTGTTG-3’和 OSHDR: 5’- TTGCGAGCTCACGGTGGTGGTATTCAGGTCT -3’。连接后转化大肠杆菌DH5α（TaKaRa, 大连），通过酶切鉴定和PCR鉴定后，阳性克隆进行测序分析，测序正确的载体用农杆菌介导的方法转化中花11。PCR扩增条件为：1 min / 95℃; 35 cycles (30 sec / 95℃, 30 sec / 63℃, 3min / 72℃); 5 min / 72℃。

反应体系如下(总体积20μL)：

cDNA　　　　　　　                   1μL 

10×Buffer(含20 mM Mg²⁺)             2μL

dNTP（2.5mM）                  　　 0.2　mM

OSHDF                               0.2μM

OSHDR                               0.2μM

Phusion Taq（NEB）                    1U

ddH₂O补至　　　　　　　　　　　　　 20μL

2．3 OsDLS1基因在不同组织器官中的表达

为了分析OsDLS1基因在水稻不同组织器官中的表达情况，水稻叶片、茎、幼穗、成熟花器官及幼嫩分生组织被收集，总RNA用TRIzol(Invitrogen, USA)试剂提取后用DNase I (Invitrogen, USA)处理消化基因组DNA。1μg的总 RNA用M-MLV 反转录酶 (TaKaRa, Dalian, China)反转录合成cDNA。合成的cDNA用OsDLS1基因的特异引物进行PCR反应扩增，以水稻OsActin1做内参相对分析OsDLS1基因的表达。基因表达特异引物序列为：

FDF: 5’- CACCACGCGACTTTTGGACT-3’和FDR: 5’- GGAGATTCATAGAGCGGTCG-3’。 扩增程序为1 min / 95℃; 30 cycles (30 sec / 94℃, 30 sec / 59℃, 30 sec / 72℃); 5 min / 72℃。

2．4 OsDLS1 在RNAi及过表达转基因植株中的表达分析

为了检测RNAi及过表达转基因植株的干涉效果及过表达效果，总RNA从40天大小的转基因植株及其对照的叶片中提取后用DNase I (Invitrogen, USA)处理消化基因组DNA。1 μg的总 RNA用M-MLV 反转录酶 (TaKaRa, Dalian, China)反转录合成cDNA。反转录好的cDNA用于RT－PCR或Real-time PCR模板。Real-time PCR按照SYBR Green PCR master mix (Tiangen, Beijing, China)试剂盒说明操作，在Stratagene Mx3000P^TM Thermal System (STRATAGENE, USA) PCR仪上进行扩增反应。所用引物序列同2．3所用的序列。每个反应进行3次重复，并用水稻OsActin1作为内参相对定量分析，数据分析采用Livak描述的 2^-△△Ct 方法进行(Livak et al. 2001)。Real-time PCR扩增条件为：2 min / 95℃；40 cycles (20 sec/ 95℃, 30 sec/ 59℃, 30 sec/ 68℃)。

　结果分析

3.1 OsDLS1基因结构及亚家族分析

OsDLS1编码一个855个氨基酸的蛋白质，含有4个结构域，其中Homeobox和bZIP所构成的HD-ZIP结构域在该转录因子中起重要作用(图1A)。特异的DNA序列可以与HD-ZIP中的结合域结合而对其它的基因起调控作用。水稻中，HD-Zip III亚家族有5个成员，它们的同源关系如图1B所示，其中OsDLS1与OsHOX32亲缘关系最近，氨基酸序列同一性高达87%。OsDLS1与其它植物的HD-Zip III亚家族成员的同源性也很高，与已知的拟南芥的ATHB9、ATHB14和ATHB15的氨基酸同一性也都在65%以上。表明该转录因子亚家族的氨基酸序列非常保守。

　OsDLS1 RNAi转基因植株获得及其表型分析

为了探索该转录因子的功能，我们采用反向遗传学方法构建了RNAi和过表达载体，将其导入到中花11中。两个RNAi载体共获得了108株T0代转基因阳性植株(61株RNAi5’-UTR，47株RNAi3’-UTR)，但未见明显表型。随机选取20个RNAi5’-UTR T0代植株和12个RNAi3’-UTR T0代植株播种获得T1代植株，20个RNAi5’-UTR T1株系中有8个株系有表型，开始植株叶片上表现锈斑，之后斑块扩大曼延至整个叶片，最终使叶片枯萎死亡(图2A)。12个RNAi3’-UTR T1代株系中有2个株系有表型，与RNAi5’-UTR表型略有不同，植株叶片首先叶尖变黄，叶片中下部出现锈斑，之后锈斑扩展至整个叶片，最终使叶片枯萎死亡(图2A)。将有表型植株挂牌取样，提取RNA，用RT-PCR方法检测目的基因的表达，发现在RNAi转基因植株中，OsDLS1的表达与对照相比明显降低，表明RNAi的确干扰了OsDLS1基因的表达(图2B)。单株收种种植获得纯合的T2代转基因植株用于后续研究。

T1代RNAi转基因植株在2011年分别在天津(长日照地区，~39° N)和海南(~22° N)种植，统计RNAi转基因植株的抽穗期发现，OsDLS1 RNAi转基因植株在天津种植的抽穗期比对照推迟了35天，而在海南种植的抽穗期比对照推迟了6天。由于两个地区田间种植的光周期和温度都不同，我们在实验室人工气候箱控制条件下种植(LD：14h光照，10 h黑暗；SD：10h光照，14 h黑暗；温度都为28℃)RNAi转基因植株及对照，统计抽穗日期发现在短日照条件下转基因植株和对照基本同时抽穗，但在长日照条件下转基因植株的抽穗期推迟了40天以上。这一结果表明该转录因子在长日照条件下可以促进水稻的抽穗。

为了检测所构建的RNAi载体干涉了HD-ZIP III亚家族其它成员，我们用RT-PCR检测了与OsDLS1同源的几个基因在RNAi转基因植株中的表达，结果表明RNAi3’UTR载体很特异，不能干涉其它HD-ZIP III亚家族成员，但RNAi5’UTR载体可以干涉OsHOX32基因，但不能干涉其它4个成员(图2C)。这可能也是两个构建的RNAi载体所获得的转基因植株表型略有不同的原因。

　OsDLS1过表达转基因植株获得及其表型分析

过表达载体共获得68株T0代植株，其中42株为转基因阳性植株。阳性转基因植株中有6株叶片表现延迟衰老，并且穗及花器官表现畸形(图3A)。其余植株没有明显表型差别。单株挂牌取样提取RNA，用RT-PCR方法检测目的基因的表达，过表达转基因植株OsDLS1基因的表达的表达明显增强 (图3B)。

　OsDLS1在不同组织中的表达分析

为了检测OsDLS1在水稻不同组织中的表达情况，收集野生型不同时间和不同组织材料，分离RNA，反转录后用RT-PCR分析目的基因在水稻不同组织中的时空表达特性，结果表明OsDLS1在水稻不同组织中均有表达，但在幼嫩的分生组织和幼穗中的表达量较高，在成熟的花器官中表达量较低 (图4A)。整个生育期OsDLS1都表达。为了检测OsDLS1在水稻叶片不同发育时期的表达，用实时定量PCR方法分析了幼嫩的叶片(15天幼苗叶片)、成熟叶片(60天植株剑叶)及衰老的叶片(叶片开始变黄)中OsDLS1的表达情况，结果表明在幼嫩的叶片中表达量较高，而在衰老叶片中的表达量较低(图4B)，表明该转录因子在幼嫩的组织中表达量较高，随着组织的衰老表达量下降。

OsDLS1基因序列（SEQ ID No.1所示）：

AAATAAGAAACAACGAGACTCTTGATGTACCAAGCCGAGTCTGAAGAAGAGAAAAGAGAGAGAGTTCAGAAAAAGGAAACGACCCTATTCTGATCAGAAAAATTCAATCTTTCTCTCTCTTTCTCTCAGAAAAGGTCGAGAGAGAAAGTGGATGTCTTCATGTGAAGACCAGAGAGAAGACGAGAGGCGATCGCAGTGGAGTGGAGTGAAGTACTAGCAGTATTAAAACCAGCAGCAAGCGAGAGAGAGGCCACCAACCACTTCCTCCTCCAAGAAACCACCCCCACCACGAGCACGAGCACGAGCAACCATGGCGGTGGCAGAGGGAGCTGCGACTGCGAGCTACGGGCCATGACTGCGGCGAGTTCTTGCTGGGTTGTTGTTGTACAAGCAGCGACGAGGAGGAGGGGAGCAGAGGAGGAGGAGGCGGAGGGATGGCAGCGGCGGCGGTGGGGGGAAGGGGGGAGAGGCTGTCGTCCTCCTCCCCGACGGCGGCGGCGCCGCAGGTGGACGCCGGGAAGTACGTCCGGTACACGCCCGAGCAGGTGGAGGCGCTGGAGCGGGTGTACACCGAGTGCCCCAAGCCCAGCTCACTCCGCCGCCAGCAGCTCATCCGGGAGTGCCCCATCCTCAGCAACATCGAGCCCAAGCAGATCAAGGTCTGGTTTCAGAATCGCAGGTCAGTCTCATCTCCTTCTCTCTCTTCGATCTGTTTCTGCTCGGGTTTGTTCAGCAGCCATGGCGTGTGTTCTTCGGTTTCTTTTCTTGGTTTTGTGTAATGTGATGAGATTGATTGCTTTGTTGTTTGCAGTTTTTTTTCATGTTCTTGTGGGAATGGGGGATCCTTTGTGAGGAAGATTTGGGTTCTTGAGATGAGTTTTTTTTTTCTGTTTGATTTGTAGATGTCTGTAACTTTTTGGGTGTTGATTTTAGGGCTTGCAATGTGTTGGATTGGTGACGAGAAGGTTCATTTCTGGGATTTGCATCCTATATGATGGGTTTTGTTTTTTTAGTTCGTCTTGTGCAATAATGAAGCGCAATCTGTTTGCTTGAAATTTATCAGGATATTTTCTTTTATAAAACTTTGCGGCAATGATTTGAGTTCCTGTGCCCACACTGTTCTTCGCTGCATTATTCTGCTGGGTTGTGTGGTGGGTAGGGAGCGAAATGGCAGCATCATTCGTTGGTTTCCTCTTGGATTTTGTGGTGATGTGAATAGCCAAATATCCTGGATCTCTGTACAGACTTTACAGTTAATTTTGTTTGGTTTAAATTGTAAATATATGCTCTCTGATTGTTTTGTTGCTTGTGGTGACCAATGATTGGTTGGAGCAAAATTGCCTTAGGTCATTTCTTGTTTCCTGTGCTTGCCATTTTAAGGGCCATCTTTTTAACCCTGTGTTGTGGGCTGTGGTAGTGTTCATGTTTTCTTGCTATAGGCCTCCATAAGCATCACCTCCTGGTTATCATCTCGCTTTCTTTTTTCAGTGGATCACAAGTAGGGCAATAGTTTTGTCACTGGTGGTGTCACTGTGGAAGAATGTGAAGGGCAACATTTTGAGCAAGTTTGGTATATACTATTACTGTACTCATGAAGGCCAAATATAAATCAAGAATCCTTTTTAGGTAGAGGATGCTCTTGTTTAGAGTTGAGTTCACAGATGCAGACAGAAACATCACTGTCAATTAGGCAATGATTTTCACATATGGAATACTAACTGTTATTGCATAGTATATAGTCATTTGTCTCTTTTGCAAATGACCTTTTGCTTGTTCCTGTTCAATGATCCCCCTTTTAACCTTGGGGAATATTTGCTAAAATGCCTTTGCCTAACTTCCTTTGTGCTCATTTGGGCTGTGCCAATCAGTATCCATTAACAAGTATTGGAATCTTGTGTATTAGAAGACACCATCCTTTAGATAGTTTATTCATGTACTTTTGCCACTGAAATTGTGCCTTCCTTGTAATTGGCAGATGCCGGGAGAAGCAGCGCAAGGAGGCCTCCCGGCTGCAAACTGTGAACCGGAAGCTGAATGCGATGAACAAGCTGTTGATGGAGGAAAATGACCGGCTGCAGAAGCAGGTGTCCCGTCTCGTCTACGAGAACGGCTACATGCGGACTCAACTGCACAATGTGAGCTCCCTGTGCTTACAGGCTTTTGTTCTTACAATTGCTTCATATTTTGATCATCCTGTTTTCTTAATCAGTAATGTTTGTATGTACTTTGTAGCCTTCTGCAGCCACCACAGATACAAGCTGTGAGTCTGTGGTGACAAGTGGTCAGCACCATCAACAGCAAAACCCAGCAGTTCTGCATCCGCAAAGGGATGCGAACAACCCAGCAGGGTATCCACAAAACCTGGTCTATTTTCTTCTTTTGTTAGGCCGTGCTTTTTTGTATGAAAGATTGCTGAGATGATTTTATTTGCGCAGTCTTCTCGCTATTGCTGAGGAGACCTTGGCAGAGTTCATGTCGAAGGCGACAGGAACTGCTGTCGAATGGGTGCAAATGGTTGGGATGAAGGTAATGTATTCGTTGTACAAGAAAACTGTGCAGTATGTTGATTTTCTCTTTCCATTCATGTTTTTTTTGTTCAAATCAACTGAAATGAAAATTTGATTACAGCCTGGTCCGGATTCCATTGGAATCATCGCTGTTTCGCACAATTGCAGTGGCGTAGCAGCACGAGCTTGCGGCCTGGTGAGCCTTGAGCCCACAAAGGTATGATTTGTTTTCCTTGATATTGTGTTACATTTCCCATTAACTGGCATGCTACAGACCCTGATAAGCTTCATTTTAGGTTGCAGAGATCCTCAAGGATCGCCCCTCTTGGTACCGTGATTGCCGATGCGTAGATATCATCCATGTTATCCCTACGGGTAACGGCGGAACCATTGAGCTAATCTACATGCAGGTAAATATACCCAATCGTGACTCATGTGTTGCATTTTTCTCAAGCATCACTAGCTACTCTTTGTTTTTGGTAATAACCATTGCCCTTTTCAATTCCTTAGACATATGCACCGACAACTTTGGCGGCACCACGCGACTTTTGGACTCTCCGCTACACAAGTGGACTTGAAGATGGGAGTCTTGTGGTATTACTTTGATCTTTAATTGCATGCTGTCAGCTCATTAAACAAAATGCTTCCTTTCATTTTCTTGTATGGTCTATTCGTCATGTTATGATCGGACTTGTTCTGTTTGGATCATACCACATCATCATGGTTTTCAACTGAAGTGTAGTTTCTGTTGTATTAAATATTGTTTGACACCATTCCTGTTCTGTAGATCTGTGAAAGGTCATTGACTCAGTCCACTGGTGGCCCATCTGGGCCTAACACTCCGAATTTTATCAGAGCCGAGGTACTTCCCAGTGGTTATCTGATTCGACCATGTGAGGGAGGTGGCTCCATGATTTACATTGTTGATCATGTTGATTTGGATGTAAGTAACAATAGTGTTTTCACATTAACTAGTGTAATATTGAATAGTTTTGAGATACATATCTTATTAATCCTGTGTATTTTACAGGCTTGGAGTGTGCCTGAGGTTCTTCGACCGCTCTATGAATCTCCAAAGATCCTTGCACAGAAGATGACCATTGCAGTATGTGCACTGTTTTATTCTGTTGTTGAAGAGCACTTGGTCACCTCATGGTGATTGTGAGTGCATAACTTTTCTTATCACCAATGACATGGTTCATTCTGTTCAGGCATTGCGACACATTAGGCAAATTGCGCATGAGTCAAGCGGTGAAATCCCCTACGGTGCTGGTCGCCAGCCTGCTGTTTTCAGGACCTTCAGTCAAAGGCTCAGCAGGTCTGTAGCTATTTGAGGGTTCCCATGTATTAGAACCAATTGGCATACTGTCATATGACACAGTTCCATGCATGTCTCATTGCTCACGCATCTGAACTCCATACTCTAATTTGCAGAGGTTTCAATGATGCTGTTAGTGGATTTCCAGATGATGGGTGGTCTTTGTTGAGCAGTGATGGTAGTGAGGACATTACAATTTCAGTAAACTCGTCTCCAAACAAGCTTGTTGGATCCCATGTCAGCCCGAACCCTCTGTTTTCTACTGTTGGAGGTGGCATCTTGTGCGCAAAGGCATCAATGCTACTTCAGGTTGACATAGGCTCTATTTAGTTGCTCAGCTAATTATAGATTGTCTCTATCTTTGTTTCACTTTGACCAAAATTGTTCCAAATCAAAGAATTAAGCTTTACAAAATGTCATTTTTTTTATAATGTAGAATGTACCTCCTGCTCTACTTGTGCGATTTCTGAGGGAGCATCGTTCTGAATGGGCTGATCCTGGTGTTGATGCTTATTCTGCTGCTTCTTTGCGAGCCAGCCCATATGCAGTTCCAGGCTTAAGGACCAGCGGGTTTATGGGCAGTCAGGTTATACTACCCCTCGCTCATACCTTAGAGCATGAAGAGGTAATGTTGTAATTGAGTCCTTGTAGGCTTGTAGCTCCTTTTCCACAATGAATGGCAAATATTAATGCATCAACCTGGCATTCTGAATTGCAGTTCTTGGAGGTTATTAGGCTCGAAGGACATGGTTTCAGCCATGATGAGGTGCTTCTATCACGGGATATGTACCTTCTACAGGTATTGTGGACCATCCGAGTCAACTATTTATTCCTTTGCTGTTGGGCTGGACAAGTGGGCTTCGGTGGGAGGCATGCTGCTGTTCTTGGCCACCGTATGGGCCTAACCTTCTGCTCAGGGTTTCTGGTGGATCAGGTCCTCCTGCGCACGAATTATTTTTTATTTTTGTTCATAATAAAAGCTGAGATGTAAAAGGTTTAAGAGTCTTAGTTTAGGTTATGGTGCTTCGTTAAGTCTAGCAGGGTGTGCTGCAGCTCGAGGACGAGCTGCTCAAAAAGGGGGGAGTAATGTCATGGGCTTTGGGCCGGGCGTCCTAAGTCCATTGGATAGGATTAGGGTTTGTTAGGATTAGATAAGGTTTGTTAGGATTAGATTAAGGAGTCCTCCATCTATATAAGGAGGGATCCTATCTCAGGTCAATTAGGCATTAGATCAAGATTTATCTTAGTGCCCATCGGCCTGCCTTCTCAGTGCGACGGAGAGCGTCGCGCCGTTTAGGTTCAGGACCGTATTCCTTGTTATTTCATCTACTATAATCCAATCTATCCCCATTCATCCCGATTCTTCTCCACATAATCCTTGCTCATGACAATTGCCTTAAGTTGTACCTGTTTGTTGCATTTTCCTGGTTCTGAGAGATTGCTTTCTATGCAGCTTTGCAGCGGGGTTGATGAGAATGCTACTAGTGCATCTGCACAGCTTGTCTTTGCTCCTATTGACGAATCTTTTGCTGATGATGCACCACTTTTACCCTCAGGATTCCGTGTGATACCACTAGATACAAAAATGGTATGACTGGTCCATAATCTTATTCCAGAGGCCTTGTCTTTCCCATGTTGGCTCACCAATTAACCGTTATGCACTCAAACCTGCAGGATGGGCCATCTGCAACACGCACGCTCGACCTTGCATCCGCCCTTGAGGTTGGACCAGGTGGAGCTTCGCGTGCTTCAGTTGAAGCATCTGGCACATGTAACAGATCAGTCCTGACCATTGCTTTCCAATTCTCATACGAGAACCACCTTCGTGAGAGCGTGGCGGCAATGGCTAGGAGTTATGTCAGAGCTGTGATGGCATCCGTGCAGAGGGTGGCTGTGGCAATAGCTCCTTCTCGACTTGGACCCCAGATCGGAATGAAGCACCCTCCAGCCTCTCCTGAGGCGCTTACACTTGCTAGCTGGATTGGTAGGAGCTATAGGTAAGTAAAATACTTATTTTTAGCAAAAGTCTATCTCAGGTTCTTCATCATCAGAACCACCTACACATTGCCACATCTGAAGTTGTGATCAATGATGTTAATGCACTAGTTATTTCCGTGGATCTTTCAGGGCTCACACCGGAGCAGATATCCGTTGGTCTGATACCGAAGATGCCGATTCTCCCCTGGCGCTCCTGTGGAAGCACAGCGACGCAATACTGTGCTGTTCTCTGAAGGTTAGTAGTGCTGCCCACTAATTTTATGCTCATTTCATCACATGCATGTTCTGGAAACCTTGCTAATGGTCAGTTTGGTTATCTACTGGCAGCCTGCTCCTATGTTCACCTTCGCCAACAATGCCGGCCTCGACATCCTTGAGACGACGCTGGTCAACCTCCAGGACATCTCGCTCGAGATGATCCTGGATGACGAGGGCCGGAAGGCGCTGTGCTCGGAGTTCCCCAAGATCATGCAGCAGGTAAAACCACCGTGTCCCTGCCTCGCGACAATCGGTGACGCATCCATCAGAGTACTACCAGACCATGAGCAATGTTCCTGATCAAGCCTGTTTGGGGTCTGTCTATCTTCTTTCAGGGTTTCACCTATCTCCCTGGAGGCGTCTGCAAGTCGAGCATGGGGCGGCAGGCATCGTATGAGCAGGCGGTGGCGTGGAAGGTTCTTAGCGACGACGACGCGCCGCACTGCCTCGCCTTCATGCTCGTCAACTGGACCTTCATGTGATCCACCATCCATGGTTTCCAGCTTCCAGCTAGTGCTTTTGCTTTTGTGCCATTGTGGCAAACTGAACAAAGACCTGAATACCACCACCGTATTGTATTAAACATATGCGTCCATACATGCATGGTGCTTGCTTTATCCTAGCTAGTGCTAGCACCTGTGTGTATGGTCTCTCCATGTTTGAAGCTTAAAATTTTAGAACCCTGGTTTTTTTTTTTCTGCTGCTGTGTGGATGAACAAGTTTCAGGACCTATGTATCTCTATCTATCTATGCTAATGCTATGAATTGTGTGATGTGTGTATGCTTTGAGCAATCGGCATTGAGTTACCTTGGTTGGTTTATGCCGTGCTGAACCATTGTTGATGCATATGTAGCTGAAGGAAGTATTTGCTGAATGTGATTCGTATTCCTCCACCGTTAAACTAAAACAAAAGCGTTTCTACCTATCAAAACCGGCTCATTATGCTCTCAGCTTAAACCATTATCCTTTGCTGATTGTGGTACATAGTTGAGGGAGCCCAAATAGACTTTTCTCAGTGCTACGTCCTGCTCACTGATCTCGGCCACGAATAGAATCGT。

OsDLS1编码一个855个氨基酸的蛋白质序列为SEQ ID No.2所示：

MAAAAVGGRGERLSSSSPTAAAPQVDAGKYVRYTPEQVEALERVYTECPKPSSLRRQQLIRECPILSNIEPKQIKVWFQNRRCREKQRKEASRLQTVNRKLNAMNKLLMEENDRLQKQVSRLVYENGYMRTQLHNPSAATTDTSCESVVTSGQHHQQQNPAVLHPQRDANNPAGLLAIAEETLAEFMSKATGTAVEWVQMVGMKPGPDSIGIITVSHNCSGVAARACGLVSLEPTKVAEILKDRPSWYRDCRCVDIIHVIPTGNGGTIELIYMQTHAPTTLAAPRDFWTLRYTSGLEDGSLVICERSLTQSTGGPSGPNTLNFIRAEVLPSGYLIRPCEGGGSMIYIVDHVDLDAWSVPEVLRPLYESPKILAQKMTIAALRHIRQIAHESSGEIPYGAGRQPAVFRTFSQRLSRGFNDAVSGFPDDGWSLLSSDGSEDITISVNSSPNKLVGSHVSPNPLFSTVGGGILCAKASMLLQNVPPALLVRFLREHRSEWADPGVDAYSAASLRASPYAVPGLRTSGFMGSQVILPLAHTLEHEEFLEVIRLEGHGFSHDEVLLSRDMYLLQLCSGVDENATSASAQLVFAPIDESFADDAPLLPSGFRVIPLDTKMDGPSATRTLDLASALEVGPGGASRASVEASGTCNRSVLTIAFQFSYENHLRESVAAMARSYVRAVMASVQRVAVAIAPSRLGPQIGMKHPPASPEALTLASWIGRSYRAHTGADIRWSDTEDADSPLALLWKHSDAILCCSLKPAPMFTFANNAGLDILETTLVNLQDISLEMILDDEGRKALCSEFPKIMQQGFTYLPGGVCKSSMGRQASYEQAVAWKVLSDDDAPHCLAFMLVNWTFM.

OsDLS1　mRNA序列（SEQ ID No.3所示）：

ATGGCAGCGGCGGCGGTGGGGGGAAGGGGGGAGAGGCTGTCGTCCTCCTCCCCGACGGCGGCGGCGCCGCAGGTGGACGCCGGGAAGTACGTCCGGTACACGCCCGAGCAGGTGGAGGCGCTGGAGCGGGTGTACACCGAGTGCCCCAAGCCCAGCTCACTCCGCCGCCAGCAGCTCATCCGGGAGTGCCCCATCCTCAGCAACATCGAGCCCAAGCAGATCAAGGTCTGGTTTCAGAATCGCAGATGCCGGGAGAAGCAGCGCAAGGAGGCCTCCCGGCTGCAAACTGTGAACCGGAAGCTGAATGCGATGAACAAGCTGTTGATGGAGGAAAATGACCGGCTGCAGAAGCAGGTGTCCCGTCTCGTCTACGAGAACGGCTACATGCGGACTCAACTGCACAATCCTTCTGCAGCCACCACAGATACAAGCTGTGAGTCTGTGGTGACAAGTGGTCAGCACCATCAACAGCAAAACCCAGCAGTTCTGCATCCGCAAAGGGATGCGAACAACCCAGCAGGTCTTCTCGCTATTGCTGAGGAGACCTTGGCAGAGTTCATGTCGAAGGCGACAGGAACTGCTGTCGAATGGGTGCAAATGGTTGGGATGAAGCCTGGTCCGGATTCCATTGGAATCATCACTGTTTCGCACAATTGCAGTGGCGTAGCAGCACGAGCTTGCGGCCTGGTGAGCCTTGAGCCCACAAAGGTTGCAGAGATCCTCAAGGATCGCCCCTCTTGGTACCGTGATTGCCGATGCGTAGATATCATCCATGTTATCCCTACGGGTAACGGCGGAACCATTGAGCTAATCTACATGCAGACACATGCACCGACAACTTTGGCGGCACCACGCGACTTTTGGACTCTCCGCTACACAAGTGGACTTGAAGATGGGAGTCTTGTGATCTGTGAAAGGTCATTGACTCAGTCCACTGGTGGCCCATCTGGGCCTAACACTCTGAATTTTATCAGAGCCGAGGTACTTCCCAGTGGTTATCTGATTCGACCATGTGAGGGAGGTGGCTCCATGATTTACATTGTTGATCATGTTGATTTGGATGCTTGGAGTGTGCCTGAGGTTCTTCGACCGCTCTATGAATCTCCAAAGATCCTTGCACAGAAGATGACCATTGCAGCATTGCGACACATTAGGCAAATTGCGCATGAGTCAAGCGGTGAAATCCCCTACGGTGCTGGTCGCCAGCCCGCTGTTTTCAGGACCTTCAGTCAAAGGCTCAGCAGAGGTTTCAATGATGCTGTTAGTGGATTTCCAGATGATGGGTGGTCTTTGTTGAGCAGTGATGGTAGTGAGGACATTACAATTTCAGTAAACTCGTCTCCAAACAAGCTTGTTGGATCCCATGTCAGCCCGAACCCTCTGTTTTCTACTGTTGGAGGTGGCATCTTGTGCGCAAAGGCATCAATGCTACTTCAGAATGTACCTCCTGCTCTACTTGTGCGATTTCTGAGGGAGCATCGTTCTGAATGGGCTGATCCTGGTGTTGATGCTTATTCTGCTGCTTCTTTGCGAGCCAGCCCATATGCAGTTCCAGGCTTAAGGACCAGCGGGTTTATGGGCAGTCAGGTTATACTACCCCTCGCTCATACCTTAGAGCATGAAGAGTTCTTGGAGGTTATTAGGCTCGAAGGACATGGTTTCAGCCATGATGAGGTGCTTCTATCACGGGATATGTACCTTCTACAGCTTTGCAGCGGGGTTGATGAGAATGCTACTAGTGCATCTGCACAGCTTGTCTTTGCTCCTATTGACGAATCTTTTGCTGATGATGCACCACTTTTACCCTCAGGATTCCGTGTGATACCACTAGATACAAAAATGGATGGGCCATCTGCAACACGCACGCTCGACCTTGCATCCGCCCTTGAGGTTGGACCAGGTGGAGCTTCGCGTGCTTCAGTTGAAGCATCTGGCACATGTAACAGATCAGTCCTGACCATTGCTTTCCAATTCTCATACGAGAACCACCTTCGTGAGAGCGTGGCGGCAATGGCTAGGAGTTATGTCAGAGCTGTGATGGCATCCGTGCAGAGGGTGGCTGTGGCAATAGCTCCTTCTCGACTTGGACCCCAGATCGGAATGAAGCACCCTCCAGCCTCTCCTGAGGCGCTTACACTTGCTAGCTGGATTGGTAGGAGCTATAGGGCTCACACCGGAGCAGATATCCGTTGGTCTGATACCGAAGATGCCGATTCTCCCCTGGCGCTCCTGTGGAAGCACAGCGACGCAATACTGTGCTGTTCTCTGAAGCCTGCTCCTATGTTCACCTTCGCCAACAATGCCGGCCTCGACATCCTTGAGACGACGCTGGTCAACCTCCAGGACATCTCGCTCGAGATGATCCTGGATGACGAGGGCCGGAAGGCGCTGTGCTCGGAGTTCCCCAAGATCATGCAGCAGGGTTTCACCTATCTCCCTGGAGGCGTCTGCAAGTCGAGCATGGGGCGGCAGGCATCGTATGAGCAGGCGGTGGCGTGGAAGGTTCTTAGCGACGACGACGCGCCGCACTGCCTCGCCTTCATGCTCGTCAACTGGACCTTCATGTGA。

SEQUENCE LISTING

 

<110>  天津师范大学

<120>  OsDLS1基因在调控水稻叶片衰老及抽穗期方面的应用

<160>  3    

<170>  PatentIn version 3.5

<210>  1

<211>  7140

<212>  DNA

<213>  OsDLS1基因 

<400>  1

aaataagaaa caacgagact cttgatgtac caagccgagt ctgaagaaga gaaaagagag       60

agagttcaga aaaaggaaac gaccctattc tgatcagaaa aattcaatct ttctctctct      120

ttctctcaga aaaggtcgag agagaaagtg gatgtcttca tgtgaagacc agagagaaga      180

cgagaggcga tcgcagtgga gtggagtgaa gtactagcag tattaaaacc agcagcaagc      240

gagagagagg ccaccaacca cttcctcctc caagaaacca cccccaccac gagcacgagc      300

acgagcaacc atggcggtgg cagagggagc tgcgactgcg agctacgggc catgactgcg      360

gcgagttctt gctgggttgt tgttgtacaa gcagcgacga ggaggagggg agcagaggag      420

gaggaggcgg agggatggca gcggcggcgg tggggggaag gggggagagg ctgtcgtcct      480

cctccccgac ggcggcggcg ccgcaggtgg acgccgggaa gtacgtccgg tacacgcccg      540

agcaggtgga ggcgctggag cgggtgtaca ccgagtgccc caagcccagc tcactccgcc      600

gccagcagct catccgggag tgccccatcc tcagcaacat cgagcccaag cagatcaagg      660

tctggtttca gaatcgcagg tcagtctcat ctccttctct ctcttcgatc tgtttctgct      720

cgggtttgtt cagcagccat ggcgtgtgtt cttcggtttc ttttcttggt tttgtgtaat      780

gtgatgagat tgattgcttt gttgtttgca gttttttttc atgttcttgt gggaatgggg      840

gatcctttgt gaggaagatt tgggttcttg agatgagttt tttttttctg tttgatttgt      900

agatgtctgt aactttttgg gtgttgattt tagggcttgc aatgtgttgg attggtgacg      960

agaaggttca tttctgggat ttgcatccta tatgatgggt tttgtttttt tagttcgtct     1020

tgtgcaataa tgaagcgcaa tctgtttgct tgaaatttat caggatattt tcttttataa     1080

aactttgcgg caatgatttg agttcctgtg cccacactgt tcttcgctgc attattctgc     1140

tgggttgtgt ggtgggtagg gagcgaaatg gcagcatcat tcgttggttt cctcttggat     1200

tttgtggtga tgtgaatagc caaatatcct ggatctctgt acagacttta cagttaattt     1260

tgtttggttt aaattgtaaa tatatgctct ctgattgttt tgttgcttgt ggtgaccaat     1320

gattggttgg agcaaaattg ccttaggtca tttcttgttt cctgtgcttg ccattttaag     1380

ggccatcttt ttaaccctgt gttgtgggct gtggtagtgt tcatgttttc ttgctatagg     1440

cctccataag catcacctcc tggttatcat ctcgctttct tttttcagtg gatcacaagt     1500

agggcaatag ttttgtcact ggtggtgtca ctgtggaaga atgtgaaggg caacattttg     1560

agcaagtttg gtatatacta ttactgtact catgaaggcc aaatataaat caagaatcct     1620 

ttttaggtag aggatgctct tgtttagagt tgagttcaca gatgcagaca gaaacatcac     1680

tgtcaattag gcaatgattt tcacatatgg aatactaact gttattgcat agtatatagt     1740

catttgtctc ttttgcaaat gaccttttgc ttgttcctgt tcaatgatcc cccttttaac     1800

cttggggaat atttgctaaa atgcctttgc ctaacttcct ttgtgctcat ttgggctgtg     1860

ccaatcagta tccattaaca agtattggaa tcttgtgtat tagaagacac catcctttag     1920

atagtttatt catgtacttt tgccactgaa attgtgcctt ccttgtaatt ggcagatgcc     1980

gggagaagca gcgcaaggag gcctcccggc tgcaaactgt gaaccggaag ctgaatgcga     2040

tgaacaagct gttgatggag gaaaatgacc ggctgcagaa gcaggtgtcc cgtctcgtct     2100

acgagaacgg ctacatgcgg actcaactgc acaatgtgag ctccctgtgc ttacaggctt     2160

ttgttcttac aattgcttca tattttgatc atcctgtttt cttaatcagt aatgtttgta     2220

tgtactttgt agccttctgc agccaccaca gatacaagct gtgagtctgt ggtgacaagt     2280

ggtcagcacc atcaacagca aaacccagca gttctgcatc cgcaaaggga tgcgaacaac     2340

ccagcagggt atccacaaaa cctggtctat tttcttcttt tgttaggccg tgcttttttg     2400

tatgaaagat tgctgagatg attttatttg cgcagtcttc tcgctattgc tgaggagacc     2460

ttggcagagt tcatgtcgaa ggcgacagga actgctgtcg aatgggtgca aatggttggg     2520

atgaaggtaa tgtattcgtt gtacaagaaa actgtgcagt atgttgattt tctctttcca     2580

ttcatgtttt ttttgttcaa atcaactgaa atgaaaattt gattacagcc tggtccggat     2640

tccattggaa tcatcgctgt ttcgcacaat tgcagtggcg tagcagcacg agcttgcggc     2700

ctggtgagcc ttgagcccac aaaggtatga tttgttttcc ttgatattgt gttacatttc     2760

ccattaactg gcatgctaca gaccctgata agcttcattt taggttgcag agatcctcaa     2820

ggatcgcccc tcttggtacc gtgattgccg atgcgtagat atcatccatg ttatccctac     2880

gggtaacggc ggaaccattg agctaatcta catgcaggta aatataccca atcgtgactc     2940

atgtgttgca tttttctcaa gcatcactag ctactctttg tttttggtaa taaccattgc     3000

ccttttcaat tccttagaca tatgcaccga caactttggc ggcaccacgc gacttttgga     3060

ctctccgcta cacaagtgga cttgaagatg ggagtcttgt ggtattactt tgatctttaa     3120

ttgcatgctg tcagctcatt aaacaaaatg cttcctttca ttttcttgta tggtctattc     3180

gtcatgttat gatcggactt gttctgtttg gatcatacca catcatcatg gttttcaact     3240

gaagtgtagt ttctgttgta ttaaatattg tttgacacca ttcctgttct gtagatctgt     3300

gaaaggtcat tgactcagtc cactggtggc ccatctgggc ctaacactcc gaattttatc     3360

 

agagccgagg tacttcccag tggttatctg attcgaccat gtgagggagg tggctccatg     3420

atttacattg ttgatcatgt tgatttggat gtaagtaaca atagtgtttt cacattaact     3480

agtgtaatat tgaatagttt tgagatacat atcttattaa tcctgtgtat tttacaggct     3540

tggagtgtgc ctgaggttct tcgaccgctc tatgaatctc caaagatcct tgcacagaag     3600

atgaccattg cagtatgtgc actgttttat tctgttgttg aagagcactt ggtcacctca     3660 

tggtgattgt gagtgcataa cttttcttat caccaatgac atggttcatt ctgttcaggc     3720

attgcgacac attaggcaaa ttgcgcatga gtcaagcggt gaaatcccct acggtgctgg     3780

tcgccagcct gctgttttca ggaccttcag tcaaaggctc agcaggtctg tagctatttg     3840

agggttccca tgtattagaa ccaattggca tactgtcata tgacacagtt ccatgcatgt     3900

ctcattgctc acgcatctga actccatact ctaatttgca gaggtttcaa tgatgctgtt     3960

agtggatttc cagatgatgg gtggtctttg ttgagcagtg atggtagtga ggacattaca     4020

atttcagtaa actcgtctcc aaacaagctt gttggatccc atgtcagccc gaaccctctg     4080

ttttctactg ttggaggtgg catcttgtgc gcaaaggcat caatgctact tcaggttgac     4140

ataggctcta tttagttgct cagctaatta tagattgtct ctatctttgt ttcactttga     4200

ccaaaattgt tccaaatcaa agaattaagc tttacaaaat gtcatttttt ttataatgta     4260

gaatgtacct cctgctctac ttgtgcgatt tctgagggag catcgttctg aatgggctga     4320

tcctggtgtt gatgcttatt ctgctgcttc tttgcgagcc agcccatatg cagttccagg     4380

cttaaggacc agcgggttta tgggcagtca ggttatacta cccctcgctc ataccttaga     4440

gcatgaagag gtaatgttgt aattgagtcc ttgtaggctt gtagctcctt ttccacaatg     4500

aatggcaaat attaatgcat caacctggca ttctgaattg cagttcttgg aggttattag     4560

gctcgaagga catggtttca gccatgatga ggtgcttcta tcacgggata tgtaccttct     4620

acaggtattg tggaccatcc gagtcaacta tttattcctt tgctgttggg ctggacaagt     4680

gggcttcggt gggaggcatg ctgctgttct tggccaccgt atgggcctaa ccttctgctc     4740

agggtttctg gtggatcagg tcctcctgcg cacgaattat tttttatttt tgttcataat     4800

aaaagctgag atgtaaaagg tttaagagtc ttagtttagg ttatggtgct tcgttaagtc     4860

tagcagggtg tgctgcagct cgaggacgag ctgctcaaaa aggggggagt aatgtcatgg     4920

gctttgggcc gggcgtccta agtccattgg ataggattag ggtttgttag gattagataa     4980

ggtttgttag gattagatta aggagtcctc catctatata aggagggatc ctatctcagg     5040

tcaattaggc attagatcaa gatttatctt agtgcccatc ggcctgcctt ctcagtgcga     5100

cggagagcgt cgcgccgttt aggttcagga ccgtattcct tgttatttca tctactataa     5160

tccaatctat ccccattcat cccgattctt ctccacataa tccttgctca tgacaattgc     5220

cttaagttgt acctgtttgt tgcattttcc tggttctgag agattgcttt ctatgcagct     5280 

ttgcagcggg gttgatgaga atgctactag tgcatctgca cagcttgtct ttgctcctat     5340

 

tgacgaatct tttgctgatg atgcaccact tttaccctca ggattccgtg tgataccact     5400

agatacaaaa atggtatgac tggtccataa tcttattcca gaggccttgt ctttcccatg     5460

ttggctcacc aattaaccgt tatgcactca aacctgcagg atgggccatc tgcaacacgc     5520

acgctcgacc ttgcatccgc ccttgaggtt ggaccaggtg gagcttcgcg tgcttcagtt     5580

gaagcatctg gcacatgtaa cagatcagtc ctgaccattg ctttccaatt ctcatacgag     5640

aaccaccttc gtgagagcgt ggcggcaatg gctaggagtt atgtcagagc tgtgatggca     5700

tccgtgcaga gggtggctgt ggcaatagct ccttctcgac ttggacccca gatcggaatg     5760 

aagcaccctc cagcctctcc tgaggcgctt acacttgcta gctggattgg taggagctat     5820

aggtaagtaa aatacttatt tttagcaaaa gtctatctca ggttcttcat catcagaacc     5880

acctacacat tgccacatct gaagttgtga tcaatgatgt taatgcacta gttatttccg     5940

tggatctttc agggctcaca ccggagcaga tatccgttgg tctgataccg aagatgccga     6000

ttctcccctg gcgctcctgt ggaagcacag cgacgcaata ctgtgctgtt ctctgaaggt     6060

tagtagtgct gcccactaat tttatgctca tttcatcaca tgcatgttct ggaaaccttg     6120

ctaatggtca gtttggttat ctactggcag cctgctccta tgttcacctt cgccaacaat     6180

gccggcctcg acatccttga gacgacgctg gtcaacctcc aggacatctc gctcgagatg     6240

atcctggatg acgagggccg gaaggcgctg tgctcggagt tccccaagat catgcagcag     6300

gtaaaaccac cgtgtccctg cctcgcgaca atcggtgacg catccatcag agtactacca     6360

gaccatgagc aatgttcctg atcaagcctg tttggggtct gtctatcttc tttcagggtt     6420

tcacctatct ccctggaggc gtctgcaagt cgagcatggg gcggcaggca tcgtatgagc     6480

aggcggtggc gtggaaggtt cttagcgacg acgacgcgcc gcactgcctc gccttcatgc     6540

tcgtcaactg gaccttcatg tgatccacca tccatggttt ccagcttcca gctagtgctt     6600

ttgcttttgt gccattgtgg caaactgaac aaagacctga ataccaccac cgtattgtat     6660

taaacatatg cgtccataca tgcatggtgc ttgctttatc ctagctagtg ctagcacctg     6720

tgtgtatggt ctctccatgt ttgaagctta aaattttaga accctggttt ttttttttct     6780

gctgctgtgt ggatgaacaa gtttcaggac ctatgtatct ctatctatct atgctaatgc     6840

tatgaattgt gtgatgtgtg tatgctttga gcaatcggca ttgagttacc ttggttggtt     6900

tatgccgtgc tgaaccattg ttgatgcata tgtagctgaa ggaagtattt gctgaatgtg     6960

attcgtattc ctccaccgtt aaactaaaac aaaagcgttt ctacctatca aaaccggctc     7020

attatgctct cagcttaaac cattatcctt tgctgattgt ggtacatagt tgagggagcc     7080

caaatagact tttctcagtg ctacgtcctg ctcactgatc tcggccacga atagaatcgt     7140

 

<210>  2

<211>  855

<212>  PRT

<213>  OsDLS1氨基酸 

<400>  2

 

Met Ala Ala Ala Ala Val Gly Gly Arg Gly Glu Arg Leu Ser Ser Ser

1               5                   10                  15     

Ser Pro Thr Ala Ala Ala Pro Gln Val Asp Ala Gly Lys Tyr Val Arg

            20                  25                  30           

Tyr Thr Pro Glu Gln Val Glu Ala Leu Glu Arg Val Tyr Thr Glu Cys

        35                  40                  45               

Pro Lys Pro Ser Ser Leu Arg Arg Gln Gln Leu Ile Arg Glu Cys Pro

    50                  55                  60                   

Ile Leu Ser Asn Ile Glu Pro Lys Gln Ile Lys Val Trp Phe Gln Asn

65                  70                  75                  80 

Arg Arg Cys Arg Glu Lys Gln Arg Lys Glu Ala Ser Arg Leu Gln Thr

                85                  90                  95     

Val Asn Arg Lys Leu Asn Ala Met Asn Lys Leu Leu Met Glu Glu Asn

            100                 105                 110        

Asp Arg Leu Gln Lys Gln Val Ser Arg Leu Val Tyr Glu Asn Gly Tyr

        115                 120                 125            

Met Arg Thr Gln Leu His Asn Pro Ser Ala Ala Thr Thr Asp Thr Ser

    130                 135                 140                 

Cys Glu Ser Val Val Thr Ser Gly Gln His His Gln Gln Gln Asn Pro

145                 150                 155                 160  

Ala Val Leu His Pro Gln Arg Asp Ala Asn Asn Pro Ala Gly Leu Leu

                165                 170                 175    

Ala Ile Ala Glu Glu Thr Leu Ala Glu Phe Met Ser Lys Ala Thr Gly

            180                 185                 190        

Thr Ala Val Glu Trp Val Gln Met Val Gly Met Lys Pro Gly Pro Asp

        195                 200                 205            

Ser Ile Gly Ile Ile Thr Val Ser His Asn Cys Ser Gly Val Ala Ala

    210                 215                 220                

Arg Ala Cys Gly Leu Val Ser Leu Glu Pro Thr Lys Val Ala Glu Ile

225                 230                 235                 240

 

Leu Lys Asp Arg Pro Ser Trp Tyr Arg Asp Cys Arg Cys Val Asp Ile

                245                 250                 255    

Ile His Val Ile Pro Thr Gly Asn Gly Gly Thr Ile Glu Leu Ile Tyr

            260                 265                 270          

Met Gln Thr His Ala Pro Thr Thr Leu Ala Ala Pro Arg Asp Phe Trp

        275                 280                 285            

Thr Leu Arg Tyr Thr Ser Gly Leu Glu Asp Gly Ser Leu Val Ile Cys

    290                 295                 300                

Glu Arg Ser Leu Thr Gln Ser Thr Gly Gly Pro Ser Gly Pro Asn Thr

305                 310                 315                 320  

Leu Asn Phe Ile Arg Ala Glu Val Leu Pro Ser Gly Tyr Leu Ile Arg

                325                 330                 335    

Pro Cys Glu Gly Gly Gly Ser Met Ile Tyr Ile Val Asp His Val Asp

            340                 345                 350          

Leu Asp Ala Trp Ser Val Pro Glu Val Leu Arg Pro Leu Tyr Glu Ser

        355                 360                 365              

Pro Lys Ile Leu Ala Gln Lys Met Thr Ile Ala Ala Leu Arg His Ile

    370                 375                 380                

Arg Gln Ile Ala His Glu Ser Ser Gly Glu Ile Pro Tyr Gly Ala Gly

385                 390                 395                 400

Arg Gln Pro Ala Val Phe Arg Thr Phe Ser Gln Arg Leu Ser Arg Gly

                405                 410                 415    

Phe Asn Asp Ala Val Ser Gly Phe Pro Asp Asp Gly Trp Ser Leu Leu

            420                 425                 430        

Ser Ser Asp Gly Ser Glu Asp Ile Thr Ile Ser Val Asn Ser Ser Pro

        435                 440                 445            

Asn Lys Leu Val Gly Ser His Val Ser Pro Asn Pro Leu Phe Ser Thr

    450                 455                 460                

Val Gly Gly Gly Ile Leu Cys Ala Lys Ala Ser Met Leu Leu Gln Asn

465                 470                 475                 480

Val Pro Pro Ala Leu Leu Val Arg Phe Leu Arg Glu His Arg Ser Glu

                485                 490                 495    

Trp Ala Asp Pro Gly Val Asp Ala Tyr Ser Ala Ala Ser Leu Arg Ala

            500                 505                 510        

Ser Pro Tyr Ala Val Pro Gly Leu Arg Thr Ser Gly Phe Met Gly Ser

        515                 520                 525            

Gln Val Ile Leu Pro Leu Ala His Thr Leu Glu His Glu Glu Phe Leu

    530                 535                 540                

Glu Val Ile Arg Leu Glu Gly His Gly Phe Ser His Asp Glu Val Leu

545                 550                 555                 560

Leu Ser Arg Asp Met Tyr Leu Leu Gln Leu Cys Ser Gly Val Asp Glu

                565                 570                 575    

Asn Ala Thr Ser Ala Ser Ala Gln Leu Val Phe Ala Pro Ile Asp Glu

            580                 585                 590        

Ser Phe Ala Asp Asp Ala Pro Leu Leu Pro Ser Gly Phe Arg Val Ile

        595                 600                 605            

Pro Leu Asp Thr Lys Met Asp Gly Pro Ser Ala Thr Arg Thr Leu Asp

    610                 615                 620                 

Leu Ala Ser Ala Leu Glu Val Gly Pro Gly Gly Ala Ser Arg Ala Ser

625                 630                 635                 640  

Val Glu Ala Ser Gly Thr Cys Asn Arg Ser Val Leu Thr Ile Ala Phe

                645                 650                 655    

Gln Phe Ser Tyr Glu Asn His Leu Arg Glu Ser Val Ala Ala Met Ala

            660                 665                 670        

Arg Ser Tyr Val Arg Ala Val Met Ala Ser Val Gln Arg Val Ala Val

        675                 680                 685            

Ala Ile Ala Pro Ser Arg Leu Gly Pro Gln Ile Gly Met Lys His Pro

    690                 695                 700                

Pro Ala Ser Pro Glu Ala Leu Thr Leu Ala Ser Trp Ile Gly Arg Ser

705                 710                 715                 720

Tyr Arg Ala His Thr Gly Ala Asp Ile Arg Trp Ser Asp Thr Glu Asp

                725                 730                 735      

Ala Asp Ser Pro Leu Ala Leu Leu Trp Lys His Ser Asp Ala Ile Leu

            740                 745                 750        

Cys Cys Ser Leu Lys Pro Ala Pro Met Phe Thr Phe Ala Asn Asn Ala

        755                 760                 765             

Gly Leu Asp Ile Leu Glu Thr Thr Leu Val Asn Leu Gln Asp Ile Ser

    770                 775                 780                

Leu Glu Met Ile Leu Asp Asp Glu Gly Arg Lys Ala Leu Cys Ser Glu

785                 790                 795                 800

Phe Pro Lys Ile Met Gln Gln Gly Phe Thr Tyr Leu Pro Gly Gly Val

                805                 810                 815    

Cys Lys Ser Ser Met Gly Arg Gln Ala Ser Tyr Glu Gln Ala Val Ala

            820                 825                 830        

Trp Lys Val Leu Ser Asp Asp Asp Ala Pro His Cys Leu Ala Phe Met

        835                 840                 845            

Leu Val Asn Trp Thr Phe Met

    850                 855

 

<210>  3

<211>  2568

<212>  DNA

<213>  OsDLS1基因

 

<400>  3

atggcagcgg cggcggtggg gggaaggggg gagaggctgt cgtcctcctc cccgacggcg       60

gcggcgccgc aggtggacgc cgggaagtac gtccggtaca cgcccgagca ggtggaggcg      120

ctggagcggg tgtacaccga gtgccccaag cccagctcac tccgccgcca gcagctcatc      180

cgggagtgcc ccatcctcag caacatcgag cccaagcaga tcaaggtctg gtttcagaat      240

cgcagatgcc gggagaagca gcgcaaggag gcctcccggc tgcaaactgt gaaccggaag      300

ctgaatgcga tgaacaagct gttgatggag gaaaatgacc ggctgcagaa gcaggtgtcc      360

cgtctcgtct acgagaacgg ctacatgcgg actcaactgc acaatccttc tgcagccacc      420

acagatacaa gctgtgagtc tgtggtgaca agtggtcagc accatcaaca gcaaaaccca      480

gcagttctgc atccgcaaag ggatgcgaac aacccagcag gtcttctcgc tattgctgag      540

gagaccttgg cagagttcat gtcgaaggcg acaggaactg ctgtcgaatg ggtgcaaatg      600

gttgggatga agcctggtcc ggattccatt ggaatcatca ctgtttcgca caattgcagt      660

ggcgtagcag cacgagcttg cggcctggtg agccttgagc ccacaaaggt tgcagagatc      720

ctcaaggatc gcccctcttg gtaccgtgat tgccgatgcg tagatatcat ccatgttatc      780

cctacgggta acggcggaac cattgagcta atctacatgc agacacatgc accgacaact      840

ttggcggcac cacgcgactt ttggactctc cgctacacaa gtggacttga agatgggagt      900

cttgtgatct gtgaaaggtc attgactcag tccactggtg gcccatctgg gcctaacact      960

 

ctgaatttta tcagagccga ggtacttccc agtggttatc tgattcgacc atgtgaggga     1020

ggtggctcca tgatttacat tgttgatcat gttgatttgg atgcttggag tgtgcctgag     1080

gttcttcgac cgctctatga atctccaaag atccttgcac agaagatgac cattgcagca     1140

ttgcgacaca ttaggcaaat tgcgcatgag tcaagcggtg aaatccccta cggtgctggt     1200

cgccagcccg ctgttttcag gaccttcagt caaaggctca gcagaggttt caatgatgct     1260 

gttagtggat ttccagatga tgggtggtct ttgttgagca gtgatggtag tgaggacatt     1320

acaatttcag taaactcgtc tccaaacaag cttgttggat cccatgtcag cccgaaccct     1380

ctgttttcta ctgttggagg tggcatcttg tgcgcaaagg catcaatgct acttcagaat     1440

gtacctcctg ctctacttgt gcgatttctg agggagcatc gttctgaatg ggctgatcct     1500

ggtgttgatg cttattctgc tgcttctttg cgagccagcc catatgcagt tccaggctta     1560

aggaccagcg ggtttatggg cagtcaggtt atactacccc tcgctcatac cttagagcat     1620

gaagagttct tggaggttat taggctcgaa ggacatggtt tcagccatga tgaggtgctt     1680

ctatcacggg atatgtacct tctacagctt tgcagcgggg ttgatgagaa tgctactagt     1740

gcatctgcac agcttgtctt tgctcctatt gacgaatctt ttgctgatga tgcaccactt     1800

ttaccctcag gattccgtgt gataccacta gatacaaaaa tggatgggcc atctgcaaca     1860

cgcacgctcg accttgcatc cgcccttgag gttggaccag gtggagcttc gcgtgcttca     1920

gttgaagcat ctggcacatg taacagatca gtcctgacca ttgctttcca attctcatac        1980

gagaaccacc ttcgtgagag cgtggcggca atggctagga gttatgtcag agctgtgatg      2040

gcatccgtgc agagggtggc tgtggcaata gctccttctc gacttggacc ccagatcgga      2100

atgaagcacc ctccagcctc tcctgaggcg cttacacttg ctagctggat tggtaggagc       2160

tatagggctc acaccggagc agatatccgt tggtctgata ccgaagatgc cgattctccc       2220

ctggcgctcc tgtggaagca cagcgacgca atactgtgct gttctctgaa gcctgctcct       2280

atgttcacct tcgccaacaa tgccggcctc gacatccttg agacgacgct ggtcaacctc       2340

caggacatct cgctcgagat gatcctggat gacgagggcc ggaaggcgct gtgctcggag     2400

ttccccaaga tcatgcagca gggtttcacc tatctccctg gaggcgtctg caagtcgagc       2460

atggggcggc aggcatcgta tgagcaggcg gtggcgtgga aggttcttag cgacgacgac     2520

gcgccgcact gcctcgcctt catgctcgtc aactggacct tcatgtga                         2568