头孢妥仑酸δ3异构体及头孢妥仑匹酯δ3异构体的制备方法

摘要

本发明公开了一种头孢妥仑酸δ3异构体及头孢妥仑匹酯δ3异构体的制备方法，其中，头孢妥仑酸δ3异构体按照如下制备：在反应容器中加入纯水和四氢呋喃，降温至0‑5℃，加入7‑ATCAδ3异构体和AE活性酯(MAEM)，加毕，滴加有机碱控制pH8.0‑8.5，反应期间需要补加有机碱让pH保持在8.0‑8.5，反应结束后加入二氯甲烷和水，搅拌提取，然后静置分层，下层有机层弃去，上层水层调节pH3.0‑3.5，搅拌过滤，洗涤干燥得到产品。本发明提供的制备方法制备的头孢妥仑酸δ3异构体及头孢妥仑匹酯δ3异构体含量可以达到93.0％以上。

说明书

技术领域

本发明涉及一种头孢妥仑酸δ³异构体及头孢妥仑匹酯δ³异构体的制备方法，属于药物合成中杂质分析领域。

背景技术

头孢妥仑匹酯(Cefditoren Pivoxil)，化学名为(6R，7R)-2，2-二甲基丙酰氧甲基-7-[(Z)-2-(2-氨基-4-噻唑基)-2-甲氧基亚氨乙酰胺基]-3-[(Z)-2-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)乙烯基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸酯。

头孢妥仑匹酯是日本明治制果株式会社开发的酯型口服第三代头孢烯类抗生素，1994年首次在日本上市，2001年4月在中国上市，商品名为美爱克(Meiact)，临床上主要用于治疗由革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌所引起的感染。本品具有广泛的抗菌作用，尤其对葡萄球菌属、链球菌(包括肺炎链球菌)等革兰阳性菌，大肠杆菌、卡他布兰汗球菌、克雷白杆菌属、变形杆菌属、流感嗜血杆菌等革兰阴性菌，以及消化链球菌属、拟杆菌属等厌氧菌的抗菌能力比已有的头孢烯类优越。该药作用机制为抑制细菌细胞壁合成，具有抗菌谱宽、疗效显著、安全稳定，口服吸收好、血药浓度高、体内分布广等特点。

目前报道的合成头孢妥仑匹酯的方法较多，如WO2005016936及EP0175610等。但大多数工艺主要采用US2006/0173175中报道的合成方法，其路线如下所示：

该路线以头孢妥仑母核7-ATCA与AE活性酯反应得到头孢妥仑酸，然后在异辛酸钠的碱性条件下成盐制得头孢妥仑酸钠，最后头孢妥仑酸钠与特戊酸碘甲酯反应得到目标产品头孢妥仑匹酯。

新药研究和开发过程中，药物的质量是衡量药物品质的一个重要标准，药物的质量首先决定于药物自身的疗效和毒副作用，即药物的有效性和安全性。药物的有效成分的含量是反映药物纯度的重要标志，而药物中存在的杂质直接影响到药物的疗效并可能导致毒副作用的产生。药物的杂质是生产、储运过程中的引进或产生的药物以外的其它化学物质，杂质的存在不仅影响药物的纯度，还会带来非治疗活性的毒副作用，必须加以控制。为安全有效的使用药物，药物的质量标准对药物有效成分的纯度和杂质的限度都有较为严格的规定，一般而言，超过0.1％的药物杂质应通过选择性方法来鉴定并定量。

对于药物研发人员来说，主要工作不仅仅在于如何获得高质量的原料药(API)、开发高效的合成工艺，更重要的是研究原料药中杂质种类、来源以及如何控制工艺杂质的产生。通常研究人员首先会定向合成工艺中所产生的杂质，其次则是开发高效的杂质合成路线，以便获得大量的杂质对照品，保证每批原料药质量检测工作的开展(如，杂质HPLC定位、杂质含量测定等)。

头孢妥仑匹酯中存在的主要杂质有：

头孢妥仑δ³异构体以及头孢妥仑匹酯δ³异构体作为头孢妥仑匹酯质量控制中需要研究的重要杂质，该杂质对照品目前主要通过从头孢妥仑匹酯粗品中分离提取来获得，但是该方法步骤繁琐，产率低，纯度低，有些结构类似的杂质很难完全分离开来，从而影响检测的准确性。随着国家对药品一致性研究工作的推进，确定杂质化合物头孢妥仑δ³异构体以及头孢妥仑匹酯δ3异构体的制备方法，提供合格的对照品，能够对头孢妥仑匹酯的质量控制起到积极的作用。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的第一目的在于提供一种头孢妥仑酸δ³异构体的制备方法，本发明的第二目的在于提供一种头孢妥仑匹酯δ³异构体的制备方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：一种头孢妥仑酸δ³异构体的制备方法，其特征在于：在反应容器中加入纯水和四氢呋喃，降温至0-5℃，加入7-ATCAδ³异构体和AE活性酯(MAEM)，加毕，滴加有机碱控制pH8.0-8.5，反应期间需要补加有机碱让pH保持在8.0-8.5，反应结束后加入二氯甲烷和水，搅拌提取，然后静置分层，下层有机层弃去，上层水层调节pH3.0-3.5，搅拌过滤，洗涤干燥得到产品。

上述方案中：在反应期间，需要补加一定量的AE活性酯(MAEM)。这样有利于反应进行，提高反应的收率及产物质量。

上述方案中，优选：在初次反应时加入的7-ATCAδ³异构体与AE活性酯(MAEM)的摩尔比为1:1.1-1.3，补加的AE活性酯(MAEM)的量为初次加入的AE活性酯(MAEM)量的0.1-0.2倍。

上述方案中，7-ATCAδ³-异构体的制备方法为：在反应容器中加入7-ATCA和二氯甲烷，氮气保护下加入硅烷化试剂，搅拌至全部溶解澄清，然后降温至20℃以下，加入有机碱，搅拌反应，再升温至25-30℃，继续搅拌至反应完全；

反应完后，先加入纯化水，搅拌，然后静置，分出水层，水层用二氯甲烷洗涤，洗涤完后冷却，调节pH3.5-4.5，析出晶体，过滤，滤饼用纯水洗涤，再将滤饼悬浮于甲醇中，加热溶解，趁热过滤，滤液冷却结晶，过滤，滤饼用丙酮洗涤，最后减压干燥得到产品。

上述方案中：硅烷化试剂为N,O-双三甲基硅乙酰胺、六甲基二硅烷胺、双三甲基硅脲、双(三甲基硅烷)三氟乙酰胺中的一种。

上述方案中：所述有机碱为三乙胺，三丁胺、二乙胺、二异丙基乙胺、吡啶中的一种。

上述方案中：所述7-ATCA与硅烷化试剂的摩尔比为1:1.8-2.2，所述7-ATCA与有机碱的摩尔比为1:1.6-2.0。

本发明的第二目的是这样实现的：一种头孢妥仑匹酯δ³异构体的制备方法，其特征在于：在反应容器中加入权利要求1-7任一项制备的头孢妥仑酸δ³异构体和N，N-二甲基甲酰胺，搅拌溶解，降温至-45℃--40℃，滴加过量的特戊酸碘甲酯，滴完后搅拌反应，反应完后将反应液加入预冷的乙酸乙酯和水溶液的混合溶液中，搅拌，然后静置分层，水层弃去，有机层依次用碳酸氢钠溶液和水洗涤，然后在有机层中加入活性炭脱色，过滤，滤液减压蒸馏掉部分有机溶剂后搅拌结晶，过滤得到产品。

上述方案中：所述头孢妥仑酸δ³异构体与N，N-二甲基甲酰胺的摩尔比为1:1.1-1.3。所述乙酸乙酯和水溶液的混合溶液需预先冷至0-10℃。

有益效果：本发明提供的制备方法步骤简单，成本低，适合进行规模化制备。本发明提供的制备方法制备的头孢妥仑酸δ³异构体及头孢妥仑匹酯δ³异构体含量可以达到93.0％以上，为药品安全使用提供了理论依据，对头孢妥仑匹酯的质量标准提供了有效的数据支持，为药物的临床安全使用提供有效保障。

附图说明

图1是本发明制备的δ³-异构体的红外吸收光谱图。

图2为本发明制备的δ³-异构体的¹H-NMR谱图。

图3为本发明制备的δ³-异构体的¹³C-NMR谱图。

图4为本发明制备的δ³-异构体的HMBC谱图。

图5为本发明制备的δ³-异构体的质谱图。

图6为7-ATCA 1H-NMR图谱。

图7是头孢妥仑酸δ³异构体的质谱图。

图8为头孢妥仑酸δ³异构体的¹H-NMR图。

图9为头孢妥仑酸δ³异构体的¹³C-NMR图。

图10为头孢妥仑匹酯δ³异构体的质谱图。

图11为头孢妥仑匹酯δ³异构体的¹H-NMR图。

具体实施方式

下面通过实施例结合附图，对本发明作进一步说明：

实施例1

7-ATCAδ³异构体的制备

于1000ml三颈瓶中加入7-ATCA 0.1mol和二氯甲烷350ml，在氮气保护下加入BSA(N,O-双三甲基硅乙酰胺)0.18mol，搅拌至全部溶解澄清，降温至20℃以下，然后加入三丁胺0.16mol，搅拌40分钟，升温至25℃-30℃，搅拌反应，HPLC检测异构体的转化情况，反应完全后，加入350ml纯化水，搅拌10分钟，静置，分出水层，水层用二氯甲烷洗涤3次，每次50ml。水层冷却到2-5℃，用15％盐酸调节pH值3.5，析出结晶，搅拌2小时，过滤，用冷的纯化水洗涤滤饼，滤干。将湿品悬浮于450ml甲醇中，加热溶解，趁热过滤，滤液冷却结晶，过滤，滤饼用丙酮洗涤，减压干燥，得到产品，为黄色结晶性粉末，纯度93.3％。

实施例2

7-ATCAδ³异构体的制备

于1000ml三颈瓶中加入7-ATCA 0.1mol和二氯甲烷350ml，在氮气保护下加入BSA(N,O-双三甲基硅乙酰胺)0.22mol，搅拌至全部溶解澄清，降温至20℃以下，然后加入二乙胺0.2mol，搅拌30分钟，升温至25℃-30℃，搅拌反应，HPLC检测异构体的转化情况，反应完全后，加入350ml纯化水，搅拌10分钟，静置，分出水层，水层用二氯甲烷洗涤3次，每次50ml。水层冷却到2-5℃，用10％盐酸调节pH值4.5，析出结晶，搅拌2小时，过滤，滤饼用冷的纯化水洗涤，滤干。将湿品悬浮于450ml甲醇中，加热溶解，趁热过滤，滤液冷却结晶，过滤，滤饼用丙酮洗涤，减压干燥，得到产品，为黄色结晶性粉末，纯度93.0％。

实施例3

7-ATCAδ³异构体的制备

于1000ml三颈瓶中加入7-ATCA 0.1mol和二氯甲烷350ml，在氮气保护下加入BSA(N,O-双三甲基硅乙酰胺)0.2mol，搅拌至全部溶解澄清，降温至20℃以下，然后加入三乙胺0.18mol，搅拌25分钟，升温至25℃-30℃，搅拌反应，HPLC检测异构体的转化情况，反应完全后，加入350ml纯化水，搅拌10分钟，静置，分出水层，水层用二氯甲烷洗涤3次，每次50ml。水层冷却到2-5℃，用10％盐酸调节pH值4.0，析出结晶，搅拌2小时，过滤，滤饼用冷的纯化水洗涤，滤干。将湿品悬浮于450ml甲醇中，加热溶解，趁热过滤，滤液冷却结晶，过滤，滤饼用丙酮洗涤，减压干燥，得到产品，为黄色结晶性粉末，纯度93.2％。

实施例4

7-ATCAδ³异构体的制备

于1000ml三颈瓶中加入7-ATCA 0.1mol和二氯甲烷350ml，在氮气保护下加入六甲基二硅烷胺0.2mol，搅拌至全部溶解澄清，降温至20℃以下，然后加入二异丙基乙胺0.19mol，搅拌30分钟，升温至25℃-30℃，搅拌反应，HPLC检测异构体的转化情况，反应完全后，加入350ml纯化水，搅拌10分钟，静置，分出水层，水层用二氯甲烷洗涤3次，每次50ml。水层冷却到2-5℃，用10％盐酸调节pH值4.0，析出结晶，搅拌2小时，过滤，滤饼用冷的纯化水洗涤，滤干。将湿品悬浮于450ml甲醇中，加热溶解，趁热过滤，滤液冷却结晶，过滤，滤饼用丙酮洗涤，减压干燥，得到产品，为黄色结晶性粉末，纯度93.5％。

实施例5

7-ATCAδ³异构体的制备

于1000ml三颈瓶中加入7-ATCA 0.1mol和二氯甲烷350ml，在氮气保护下加入双三甲基硅脲0.2mol，搅拌至全部溶解澄清，降温至20℃以下，然后加入吡啶0.2mol，搅拌30分钟，升温至25℃-30℃，搅拌反应，HPLC检测异构体的转化情况，反应完全后，加入350ml纯化水，搅拌10分钟，静置，分出水层，水层用二氯甲烷洗涤3次，每次50ml。水层冷却到2-5℃，用16％盐酸调节pH值4.0，析出结晶，搅拌2小时，过滤，滤饼用冷的纯化水洗涤，滤干。将湿品悬浮于450ml甲醇中，加热溶解，趁热过滤，滤液冷却结晶，过滤，滤饼用丙酮洗涤，减压干燥，得到产品，为黄色结晶性粉末，纯度93.0％。

实施例6

7-ATCAδ³异构体的制备

于1000ml三颈瓶中加入7-ATCA 0.1mol和二氯甲烷350ml，在氮气保护下加入双(三甲基硅烷)三氟乙酰胺0.2mol，搅拌至全部溶解澄清，降温至20℃以下，然后加入三乙胺0.18mol，搅拌30分钟，升温至25℃-30℃，搅拌反应，HPLC检测异构体的转化情况，反应完全后，加入350ml纯化水，搅拌10分钟，静置，分出水层，水层用二氯甲烷洗涤3次，每次50ml。水层冷却到2-5℃，用20％盐酸调节pH值4.2，析出结晶，搅拌2小时，过滤，滤饼用冷的纯化水洗涤，滤干。将湿品悬浮于450ml甲醇中，加热溶解，趁热过滤，滤液冷却结晶，过滤，滤饼用丙酮洗涤，减压干燥，得到产品，为黄色结晶性粉末，纯度93.1％。

7-ATCA ¹H-NMR谱分析

7-ATCA的氢核磁共振谱采用Bruker Avance DMX500超导核磁共振波谱仪测试，溶剂为DMSO-d6。测试数据及化学位移归属见表1，1H-NMR图谱见图6。结果显示，结构中各质子的化学位移与本品的结构吻合，并于文献数据(WO2005/016936A2)一致。

C₁₃H₁₃N₃O₃S₂＝323.39

表1 7-ATCA¹H-NMR谱数据及化学位移归属

δ³-异构体的结构确认

7-ATCAδ³-异构体的化学结构式、分子式及分子量如下：

C₁₃H₁₃N₃O₃S₂＝323.39

1、傅立叶变换红外光谱(FT-IR)分析

测试方法：KBr压片

表2为样品的红外光谱数据及归属。

图1为样品的红外吸收光谱图。

由图谱和数据分析可以看出，样品主要功能基团的吸收峰位与结构相符。

表2样品红外光谱数据及归属

吸收峰(cm^-1)归属3422O-H stretching vibration1763C＝O stretching vibration1618C＝C stretching vibration1384C-H bending vibration1080C-O stretching vibration715C-H out-of-plane bending vibration

2、核磁共振谱分析

测试条件：溶剂DMSO-d6；TMS为内标

表3为样品的¹H-NMR和¹³C-NMR谱图数据及归属。

图2为样品的¹H-NMR谱图。

图3为样品的¹³C-NMR谱图。

图4为样品的HMBC谱图。

由图谱和数据分析可以看出，与7-ATCA相比，在5位多出一个质子，在7位少了一个质子，各质子和碳的化学位移与结构一致，各质子与结构中的碳具有相关性，说明样品结构为目标产物。

表3样品的¹H-NMR和¹³C-NMR谱图数据及归属

3、高分辨质谱

获得的高分辨质谱图见图5。由图可见，本品分子离子峰为323.0397，与分子式C₁₃H₁₃N₃O₃S₂及分子量323.39相吻合。

实施例7

头孢妥仑酸δ³异构体的制备方法，

在反应容器中加入纯水300ml和四氢呋喃60ml，降温至0-5℃，加入7-ATCAδ³异构体10g(0.03mol)和AE活性酯(MAEM)0.039mol，加毕，滴加有机碱三乙胺控制pH8.0-8.5，反应2h，反应期间需要补加三乙胺让pH保持在8.0-8.5。

补加AE活性酯(MAEM)0.0039mol，同时补加三乙胺让pH保持在8.0-8.5，继续反应1h。

反应结束后加入二氯甲烷100ml，纯水100ml，搅拌10min，静置分层，下层有机层弃去，上层水层用盐酸溶液调节pH3.0-3.5，搅拌，过滤。滤饼用水洗涤，抽干，真空干燥得到产品，纯度93.5％，收率90％。

实施例8

头孢妥仑酸δ³异构体的制备方法

在反应容器中加入纯水300ml和四氢呋喃60ml，降温至0-5℃，加入7-ATCAδ³异构体10g(0.03mol)和AE活性酯(MAEM)0.033mol，加毕，滴加有机碱三丁胺控制pH8.0-8.5，反应2h，反应期间需要补加三丁胺让pH保持在8.0-8.5。

补加AE活性酯(MAEM)0.0078mol，同时补加三丁胺让pH保持在8.0-8.5，继续反应1h。

反应结束后加入二氯甲烷100ml，纯水100ml，搅拌10min，静置分层，下层有机层弃去，上层水层用盐酸溶液调节pH3.0-3.5，搅拌，过滤。滤饼用水洗涤，抽干，真空干燥得到产品，纯度94.0％，收率89.5％。

实施例9

头孢妥仑酸δ³异构体的制备方法

在反应容器中加入纯水300ml和四氢呋喃60ml，降温至0-5℃，加入7-ATCAδ³异构体10g(0.03mol)和AE活性酯(MAEM)0.036mol，加毕，滴加有机碱二异丙基乙胺控制pH8.0-8.5，反应2h，反应期间需要补加二异丙基乙胺让pH保持在8.0-8.5。

补加AE活性酯(MAEM)0.0072mol，同时补加二异丙基乙胺让pH保持在8.0-8.5，继续反应1h。

反应结束后加入二氯甲烷100ml，纯水100ml，搅拌10min，静置分层，下层有机层弃去，上层水层用盐酸溶液调节pH3.0-3.5，搅拌，过滤。滤饼用水洗涤，抽干，真空干燥得到产品，纯度94.2％，收率88.3％。

实施例10

孢妥仑酸δ³异构体的制备方法

在反应容器中加入纯水300ml和四氢呋喃60ml，降温至0-5℃，加入7-ATCAδ³异构体10g(0.03mol)和AE活性酯(MAEM)0.035mol，加毕，滴加有机碱吡啶控制pH8.0-8.5，反应2h，反应期间需要补加吡啶让pH保持在8.0-8.5。

补加AE活性酯(MAEM)0.0070mol，同时补加吡啶让pH保持在8.0-8.5，继续反应1h。

反应结束后加入二氯甲烷100ml，纯水100ml，搅拌10min，静置分层，下层有机层弃去，上层水层用盐酸溶液调节pH3.0-3.5，搅拌，过滤。滤饼用水洗涤，抽干，真空干燥得到产品，纯度93.8％，收率87.9％。

头孢妥仑酸δ³异构体的结构确认：

头孢妥仑δ³异构体化学名为(6R，7R)-7-[(Z)-2-(2-氨基-4-噻唑基)-2-甲氧基亚氨乙酰氨基]-3-[(Z)-2-(4-甲基噻唑-5-基)乙烯基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-3-烯-2-羧酸，分子式为C₁₉H₁₈N₆O₅S₃，分子量为506.58，结构式为：

1、质谱分析

样品质谱图如下：

由图7可见，获得的本产品分子离子峰为m/z507.0(M+1)。与本品分子式C₁₉H₁₈N₆O₅S₃和分子量506.58相吻合。

2、核磁共振氢谱(¹H–NMR)和谱分析

(1)测试用仪器：瑞士BRUKR公司AC-600核磁共振仪。

(2)测定条件：以CD₃OD为溶剂，TMS为内标。

测试图谱见图8，结果列于下表。

序号化学位移多重性质子数相应质子12.41s3H23-CH₃23.96s3H16-CH₃34.66s1H2-CH45.50d1H6-H-55.65d1H7-H-66.25s1H4-CH76.32d1H18-CH＝86.58d1H19-CH＝96.88s1H13-CH-108.65s1H22-CH-

2.41为甲基噻唑环上23-CH₃对应的氢信号峰；

3.99为＝NOCH₃即16-H信号峰；

4.66为2-CH对应的氢信号峰；

5.50和5.65分别为6-H和7-H信号峰；

6.25为4-CH对应的氢信号峰；

6.32为18-CH＝对应的氢信号峰；

6.58为19-CH＝对应的氢信号峰；

6.88为氨基噻唑环上13-CH对应的氢信号峰；

8.65为甲基噻唑环上22-CH对应的氢信号峰。

3、核磁共振碳谱(¹³C-NMR)

(1)测试用仪器：瑞士BRUKR公司AC-600核磁共振仪。

(2)测定条件：以CD₃OD为溶剂。

测试图谱如图9所示，测试结果列于下表。

碳序号化学位移(ppm)碳归属113.8323-CH₃253.087-CH354.686-CH459.662-CH561.5516-CH₃6110.5913-CH7118.7819-CH＝8118.964-CH9123.1720-C10127.6121-C11130.393-C12142.0318-CH＝13148.3712-C14151.4511-C15151.7522-CH16163.3510-C17164.068-C18169.9914-C

13.83为甲基噻唑环上23-CH₃信号峰；

53.08和54.68分别为β-内酰胺环上6-CH和7-CH信号峰；

59.66为2-CH信号峰；

61.55为＝NOCH₃即16-CH₃信号峰；

110.59为氨基噻唑环上13-CH信号峰；

118.78为19-CH＝信号峰；

118.96为4-CH信号峰；

123.17为甲基噻唑环上20-CH信号峰；

127.61为甲基噻唑环上21-C信号峰；

130.39为3-C信号峰；

142.03为18-CH＝信号峰；

148.37为氨基噻唑环上12-C信号峰；

151.45为11-C＝N信号峰；

151.75为甲基噻唑环上22-CH信号峰；

163.35为10-C＝O信号峰；

164.06为β-内酰胺环上8-C信号峰；

169.99为氨基噻唑环上14-C信号峰。

结构确认与头孢妥仑δ³异构体相符。

实施例11

头孢妥仑匹酯δ³异构体的制备方法

在反应容器中加入制备的头孢妥仑酸δ³异构体0.13mol和N，N-二甲基甲酰胺50ml，搅拌溶解，降温至-45℃--40℃，滴加特戊酸碘甲酯0.143mol，温度始终控制在-45℃--40℃，滴完后搅拌反应，反应完后将反应液加入预冷至0-10℃的1000ml乙酸乙酯和950ml水溶液的混合溶液中，搅拌，然后静置分层，水层可再用预冷至0-10℃的500ml乙酸乙酯提取一次，合并乙酸乙酯层，水层弃去，乙酸乙酯层再依次用0.1％碳酸氢钠溶液和水洗涤，用于洗涤的碳酸氢钠溶液和水的温度需要先预冷至0-10℃，然后在有机层中加入活性炭7g搅拌脱色，脱色过程中保持温度0-10℃，过滤，滤液在30-40℃下减压蒸馏至剩下500ml,调整温度为35-40℃搅拌结晶，过滤，滤饼用乙酸乙酯清洗，减压干燥得到产品0.09mol。

实施例12

头孢妥仑匹酯δ³异构体的制备方法

在反应容器中加入制备的头孢妥仑酸δ³异构体0.13mol和N，N-二甲基甲酰胺50ml，搅拌溶解，降温至-45℃--40℃，滴加特戊酸碘甲酯0.17mol，温度始终控制在-45℃--40℃，滴完后搅拌反应，反应完后将反应液加入预冷至0-10℃的1000ml乙酸乙酯和950ml水溶液的混合溶液中，搅拌，然后静置分层，水层可再用预冷至0-10℃的500ml乙酸乙酯提取一次，合并乙酸乙酯层，水层弃去，乙酸乙酯层再依次用0.1％碳酸氢钠溶液和水洗涤，用于洗涤的碳酸氢钠溶液和水的温度需要先预冷至0-10℃，然后在有机层中加入活性炭7g搅拌脱色，脱色过程中保持温度0-10℃，过滤，滤液在30-40℃下减压蒸馏至剩下500ml,调整温度为35-40℃搅拌结晶，过滤，滤饼用乙酸乙酯清洗，减压干燥得到产品0.098mol。

头孢妥仑匹酯δ³异构体的结构确认

头孢妥仑匹酯δ³异构体：(6R，7R)-7-[(Z)-2-(2-氨基-4-噻唑基)-2-甲氧基亚氨乙酰氨基]-3-[(Z)-2-(4-甲基噻唑-5-基)乙烯基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-3-烯-2-羧酸2,2-二甲基丙酰氧甲酯，分子式为C₂₅H₂₈N₆O₇S₃，分子量为620.73，结构式为：

1、质谱分析

样品质谱图如图10，由图可见，获得的本产品分子离子峰为m/z621.1(M+1)。与本品分子式C₁₉H₁₈N₆O₅S₃和分子量620.73相吻合。

2、核磁共振氢谱(¹H–NMR)和谱分析

(

(2)测定条件：以CD₃OD为溶剂，TMS为内标。

样品的¹H-NMR谱见图11，测试结果列于下表。

序号化学位移多重性质子数相应质子11.16s9H21-CH₃22.45s3H27-CH₃33.99S3H16-CH₃45.11s1H2-CH55.44d1H6-CH65.73d1H7-CH75.76/5.81ABq2H18-CH₂-86.15d1H24-CH＝96.62s1H4-CH106.68d1H25-CH＝116.89s1H13-H128.76s1H28-CH

1.16为-COOCH₂OCOC(CH₃)₃即21-CH₃信号峰；

2.45为27-CH₃对应的氢信号峰；

3.99为＝NOCH₃即16-H信号峰；

5.11为2-CH对应的氢信号峰；

5.44和5.73分别为6-H和7-H信号峰；

5.76和5.81为18-CH₂信号峰；

6.15为24-CH＝对应的氢信号峰；

6.62为4-CH对应的氢信号峰；

6.68为25-CH＝对应的氢信号峰；

6.89为13-CH对应的氢信号峰；

8.76为28-CH对应的氢信号峰。

结构确认与头孢妥仑匹酯δ³异构体相符。

本发明不局限于上述实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。