用于功能分析多特异性分子的基于SPR的双重结合测定法

摘要

本文报道了测定抗体与第一和第二抗原结合的方法，所述抗体包含特异性结合所述第一抗原的第一结合位点和特异性结合所述第二抗原的第二结合位点，其中所述方法包括以下步骤：使用特异性结合抗体恒定结构域的捕获试剂将抗体捕获在固相上，孵育捕获的抗体与第一或第二抗原，以形成捕获的抗体‑抗原复合物并测定第一结合信号，i)孵育捕获的抗体‑抗原复合物与没用于形成捕获的抗体‑抗原复合物的抗原，以形成捕获的抗体‑抗原‑抗原复合物并测定第二结合信号，或者ii)再生表面，使用特异性结合抗体恒定结构域的捕获试剂将抗体捕获在固相上，孵育捕获的抗体与没用于形成步骤b)中捕获的抗体‑抗原复合物的抗原，以形成捕获的抗体‑抗原‑抗原复合物并测定第三结合信号，和测定来自第一结合信号和第二或第三结合信号的抗体与第一和第二抗原的总体或单独结合。