农杆菌Ti质粒载体PCHF1302的构建方法及应用

摘要

农杆菌Ti质粒载体PCHF1302的构建方法及应用属于植物基因技术领域，本发明对农杆菌Ti质粒Pcambia1302上的酶切位点ECORI和HindIII处同时进行双酶切，将PCHF3300包含有35S启动子、NOS终止子以及MCS的完整的基因表达框通过PCR加上同源臂，将35S启动子启动的表达框成功的连接到质粒Pcambia1302上，构建成PCHF1302；经PCR等方法克隆得到的目的基因能便于连接到多个克隆酶切位点(MCS)，使目的基因能在植物体内稳定表达；在TDNA区域含有潮霉素抗性基因和mGFP5绿色荧光蛋白报告基因，能显著提高转基因植物的筛选效果。