一种应用Cas9技术制备CKO/KI动物模型的方法

摘要

本发明涉及一种应用Cas9技术制备CKO/KI动物模型的方法。该方法采用体外表达纯化的Cas9蛋白、预先用胚胎进行sgRNA切割效率测试筛选出的高效率sgRNA、以及单链DNA作为打靶载体，将三者混合后进行胚胎注射及移植；移植后生出的小鼠标记为F0，将F0进行基因型鉴定，对已经性成熟且基因型鉴定正确的F0进行配繁，其后代小鼠标记为F1，对F1小鼠进行分析验证，基因型验证正确的F1小鼠即为制备的CKO/KI动物模型。本发明方法流程完善，可以同期开展多项技术服务，满足不同定制化需求，解决了Cas9‐mRNA质量较难控制、sgRNA体内切割效率未知、双链打靶载体随机插入等问题，降低了实验成本。