一种Cas9蛋白、CRISPR/Cas9系统、蘑菇基因编辑的方法及应用

摘要

本发明公开了Cas9蛋白、CRISPR/Cas9系统、蘑菇基因编辑的方法及应用。本发明根据杏鲍菇基因组密码子使用的偏好性对人源Cas9蛋白的密码子进行了优化而得到编码Cas9的核苷酸序列，并筛选得到的作为转录sgRNA的4个能够高表达U6snRNA基因的启动子，建立了内源基因突变引起抗性改变作为选择标记的遗传转化体系。本发明的实验结果表明，本发明所建立的体系能够成功高效地对于杏鲍菇基因pyrG进行缺失、插入和敲除等编辑。本发明的基因编辑技术可以应用推广到除杏鲍菇以外的其它蘑菇品种，在蘑菇品种改良和代谢途径调控的中得以应用。