РАЗРАБОТКА НОВОЙ БЕСФИДЕРНОЙ СИСТЕМЫ И ХАРАКТЕРИСТИКА ПОЛУЧЕННЫХ В НЕЙ СУБЛИНИЙ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА ПРИ АУТОГЕННОМ И АЛЛОГЕННОМ КУЛЬТИВИРОВАНИИ

摘要

Создана бесфидерная система культивирования эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) человека с использованием субстрата, который составляют белки внеклеточного матрикса (ВКМ), синтезированные фидерными клетками, представляющими собой мезенхимные стволовые клетки (SC5-MSC), полученные из исходной линии 3CK-SC5. В составе субстрата обнаружены белки ВКМ фибронектин и ла-минин, способствующие росту ЭСК в бесфидерных системах. Существенным компонентом этой системы является использование SC5-MSC кондиционированной среды. Получены 2 сублинии ЭСК человека: сублинию SC5-FF культивировали в аутогенной, а сублинию SC7-FF — в аллогенной бесфидерной системе. Сублинии SC5-FF и SC7-FF прошли соответственно более 300и 115 удвоений клеточной популяции, сохранили нормальный диплоидный кариотип и способность дифференцироваться in vitro в производные трех зародышевых листков. Гистохимический и иммунофлуоресцентный анализы показали, что эти сублинии экспрессируют маркеры недифференцированныхЭСК: щелочную фосфата-зу, Oct-4, SSEA-4, TRA-1-81, а также антиген транспортера множественной лекарственной устойчивости ABCG2. С помощью ПЦР-анализа показано, что недифференцированные клетки линии SC5-FF, подобно исходной линии SC5, поддерживающейся в фидерной системе культивирования, экспрессируют гены ОСТ4 и NANOG для соматических клеток и DPPA3/STELLA и DAZL для линии половых клеток.