ЦИТОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ НЕГЕМОВОГО ЖЕЛЕЗА В ГЕПАТОЦИТАХ L ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ ИЗОЛЯЦИИ КЛЕТОК НА СОДЕРЖАНИЕ В НИХ ЖЕЛЕ

摘要

Проведено исследование условий сохранения негемового железа (Fe~(3+)) в гепатоцитах крыс, содержавшихся и* диете с добавлением 2 % карбонильного железа. Изоляцию клеток проводили с помощью коллагеназного метода (энзиматичсский метод) или обработки ткани фосфатным буфером (неэнэиматический метод). В случае использования знзиматического метода исследования проводили на основных этапах приготовления препаратов-мазков: во время перфузии органа, при отмывании клеток от коллагеназы- и при нанесении мазка на предметное стекла; при использовании неэнзиматического метода — во время выдерживания кусочков ткани в фосфатном буфере я при нанесении мазка. Показано, что при энзиматическом методе изоляции потери железа из клеток практически не происходит, если перфузия продолжается в течение 20 мин. Незначительная потеря (10—12 %) Перлс-выгвляемого железа может происходить в первые 30 мин на этапе отмывания клеток от коллагеназы. На этом этапе не наблюдается морфологических изменений клеток; жизнеспособность их согласно трипаковому тесту составляет 70—37 %. Выход железа из клеток возрастает при снижении жизнеспособности гепатоцитов. Показано, что наиболее существенные потери железа могут происходить на этапе нанесения мазка, в процессе которого клетки подвергаются значительному механическому воздействию. При неэнзиматической изоляции, во время пребывания клеток в фосфатном буфере до 2 ч, существенных морфологических изменений клеток на светооптичесхом уровне не наблюдается, однако жизнеспособность клеток в этом случае незначительна (до 1 %). Сохранность железа в клетках при неэизиматиче>-ком способе изоляции ниже, чем при использовании энзиматического способа. Таким образом, для иитофотометрического определения содержания железа в клетках рекомендуется использовать коллагеназный метод изоляции гепатоцитов.