АНТИБИОТИК-ЗАВИСИМАЯ СЕЛЕКЦИЯ КЛОНОВ Е. COLIС ПОВЫШЕННОЙШАПЕРОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯВЫСОКОЭФФЕКТИВНЫХ ПРОДУЦЕНТОВ РАСТВОРИМОЙ ПОЛНОРАЗМЕРНОЙМЕТАЛЛО-БЕТА-ЛАКТАМАЗЫ NEW DELHI

摘要

Металло-бета-лактамаза New Delhi (NDM-1) является одним из новых факторов лекарственной устойчивости ряда патогенных микроорганизмов, обусловливающих их резистентность к любым известным антибиотикам пенициллинового ряда. Разработка эффективных методов получения этого ферментав растворимом состоянии является необходимым условием для изучения путей секреции и проведения высокопроизводительного скрининга для отбора специфичных терапевтически значимых ингибиторов и средств ранней диагностики NDM-1. При суперпродукции в Е. coli полноразмерная рекомбинантная NDM-1, как правило, аккумулируется в тельцах включения в неактивной форме. Нами разработан метод получения высокоэффективной экспрессии полноразмерной металло-бета-лактамазы в Е. coli с использованием бета-лактамного антибиотика как фактора позитивной селекции бактериальных клонов-продуцентов целевого белка и показано, что эффективность продукции растворимой NDM-1 зависит от уровня шаперональной активности в бактериальной клетке.