СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ПОТЕНЦИАЦИИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА ТИМИДИНКИНАЗЫ ВИРУСА ПРОСТОГО ГЕРПЕСА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ TAT-TAR-СИСТЕМЫ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА HIV-1 И ОПУХОЛЕСПЕЦИФИЧНЫХ ПРОМОТОРОВ В Р53(+) И Р53(-) КЛЕТКАХ

摘要

Активность опухолеспецифичньгх промоторов преимущественно проявляется в опухолевых клетках, поэтому использование таких промоторов втерапевтических целях позволяет обеспечить экспрессию подконтрольного им гена исключительно в опухоли. Однако существенный недостатокопухолеспецифичных промоторов — их низкая активность, поэтому необходимый терапевтический эффект достигается далеко не всегда. На основе Tat-TAR-взаимодействия, используемого вирусом иммунодефицита человека для усиления транскрипции собственных генов, нами разработана система, позволяющая получить высокий уровень экспрессии гена терапевтического воздействия — тимидинкиназы вируса простого герпеса (HSV-й). Исследована способность гена tat потенциировать экспрессию гена HSY-tk в Tat-TAR-системе ВИЧ-1, когда ген tat находится под регуляцией одного из двух опухолеспецифичных промоторов: гена сурвивина человека или гена обратной транскриптазы теломеразы человека, а TAR-элемент контролирует экспрессию гена HSV-^fe. Проведен сравнительный анализ активностей указанных опухолеспецифичных промоторов в Tat-TAR-системе. Котранс-фекция клеток двумя конструкциями приводила к синтезу белка tat и его воздействию на TAR-элемент LTR HIV-1. В бинарной системе оба промотора обеспечивают высокий уровень экспрессии гена HSV-fA, близкий к уровню сильного неспецифического промотора цитомегаловируса (CMV). При этом ферментативная активность белка на два порядка превосходит его активность в клетках, несущих ген IISV-/A только под контролем опухолеспецифичного промотора. Этот эффект мало зависит от р53-статуса трансфицируемых клеток, будучи практически одинаковым как в р53(+), так и в р53(—) клетках. Полученные результаты свидетельствуют о том, что разработанная система может быть использована при терапии различных опухолей как дефектных по белку р53,так и р53-позитивных, ингибирующих действие опухолеспецифичных промоторов.