Получение высокоочищенного раствора кислой протеазы из нативного раствора Aspergillus oryzae

摘要

Введение. Большинство современных ферментных препаратов, представленных на рынке, получены из сырья растительного или животного происхождения. Процесс выделения энзимов из подобных источников трудоемок и требует значительных материальных затрат. Наиболее дешевым источником кислых протеаз и ос-амилаз являются плесневые грибы.Цель работы-получение высокоочищенного раствора кислой протеазы из нативного раствора плесневого гриба Aspergillus oryzae.Материал и методы. Объект исследования - кислая протеаза нативного раствора Aspergillus oryzae шт. 55. Протеолитическую активность определяли методом Ансона, общий белок - по методу Лоури. Осаждение кислой протеазы проводили с применением органических растворителей различной концентрации (этилового спирта, ацетона) и неорганического электролита (сульфата аммония).Результаты. Исследован компонентный состав нативного раствора, который оказался неоднородным по белку. Установлена молекулярная масса кислой протеазы Aspergillus oryzae - 41 кДа. Показано, что наиболее эффективно процесс осаждения проходит при использовании в качестве осаждающего агента сульфата аммония. Выявлено, что при изменении степени насыщения нативного раствора сульфатом аммония происходит фракционирование белков. Результаты эксперимента свидетельствовали о концентрировании раствора фермента по протеолитической активности в 1,9 раза. При этом удельная активность кислой протеазы увеличивалась в 3 раза.Заключение. Предложена технологическая схема эффективного метода выделения и очистки кислой протеазы из нативного раствора Aspergillus oryzae шт. 55.