КЛОНИРОВАНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА НОВОГО ГЕНА ХАЛКОНСИНТАЗЫ ИЗ ЦВЕТКОВ ОРХИДЕИ Phalaenopsis hybrida

摘要

Халконсннтаза (ХС, КФ 2.3.1.74) - ключевой фермент биосинтеза флавоноидов и антоцианов. Мы выделили полную последоватьность гена этого фермента Pchsl из геномной ДНК орхидеи Phalaenopsis hybrida сорта Formosa rose. Для этого использовали прямую и обратную полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Сопоставление последовательности нуклеотидов выделенного гена с уже опубликованными последовательностями кДНК chs Phalaenopsis показало, что Pchsl содержала открытую рамку считывания из 1173 п.н. с одним нитроном длиной 104 п.н. в консервативном положении. Соответствующий полипептид (PCHS1) с предсказанным мол. м. 42.5 кД состоит из 390 аминокислотных остатков. PCHS1 на 61-65% идентичен CHS из других растений: в нем присутствует большая часть консервативных аминокислотных остатков этого белка. В 5'- и З '-фланкирующих последовательностях Pchsl были найдены возможные цис-регуляторные последовательности. На основании Саузерн-блот-анализа можно предположить присутствие в геноме, по меньшей мере, четырех chs-подобных генов,что говорит о существовании у P. hybrida небольшого семейства chs генов. Относительный количественный анализ, использующий обратную транскрипцию - ПЦР, показал, что экспрессия Pchsl происходит в лепестках на ранних стадиях развития бутона и в тканях губы сразу после раскрытия цветка.