КЛОНИРОВАНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕНА КАТЕХОЛ-2,3-ДИОКСИГЕНАЗЫ, ЛОКАЛИЗОВАННОГО В ХРОМОСОМЕ PSEUDOMONAS AERUGINOSA ZD 4-3

摘要

Катехол-2,3-диоксигеназа (С23О), одна из диоксигеназ экстрадиолового типа, расщепляющих в ди-гидроксилированных ароматических субстратах ароматическую С-С-связь в mema-положении, катализирует превращение катехола в полуальдегид 2-гидроксимуконовой кислоты. На основании экспериментов с элиминацией плазмид, идентификации с помощью ПЦР и гибридизации по Саузер-ну ген, кодирующий С23О у штамма Pseudomonas aeruginosa ZD 4-3, расщепляющего моно- и бицик-лические соединения по mema-пути, был локализован в рестрикционном (EcoRI/ВатHI) фрагменте размером около 3.5 т.п.о. и клонирован. Определение полной нуклеотидной последовательности гена С23О выявило одну открытую рамку считывания с высокой степенью сходства аминокислотной последовательности с последовательностями, известными для С23О мезофильных грамотрицатель-ных бактерий. Анализ выравниванияпоказал наличие отчетливых различий между С23О исследованной в данной работе и 2,3-дигидроксибифенилдиоксигеназами, расщепляющими бициклические ароматические соединения. После гетерогенной экспрессии гена pheВ в Е. coli BL21(DE3) клонированная С23О сохраняла способность катализировать mema-расщепление.