НОВАЯ СОЛЕУСТОЙЧИВАЯ ЩЕЛОЧНАЯ ФОСФАТАЗА ИЗ ЯЙЦЕКЛЕТОК МОРСКОГО ЕЖА Strongylocentrotus intermedins

摘要

Показано, что щелочная фосфатаза (ЩФ), выделенная из яйцеклеток морского ежа Strongylocentro-tus intermedium, является гомодимером с молекулярной массой 150 кДа, проявляла максимальную активность при рН 8.1-8.5 и температуре 45°С. Активаторами ЩФ являются ионы Mg2+, Са2+, Мп2+ и ДТТ, а ингибиторами активности ионы Zn2+, Cu2+, Cd2+, Pb2+, Ni2+, ЭДТА, N-ЭМИ, и-ХМБ. Фермент характеризовался уникальной высокой солеустойчивостью и способностью к гидролизу субстрата в морской воде. Методами флуоресценции и кругового дихроизма показано, что повышение концентрации NaCl выше 1.0 М приводило к заметным изменениям во вторичной и третичной структуре белка и уменьшению активности фермента. Анализ молекулярных масс триптических пептидов, проведенный методом масс-спектрометрии с использованием программы MASCOT на основе баз данных NCBI и SWISS-PROT, не позволяет идентифицировать исследуемый белок. Уникальность источника и свойств исследуемой ЩФ, не характерных для неспецифических ЩФ, а также сложность идентификации первичной структуры белка методом "finger print" позволили предположить, что фермент является нетипичной щелочной фосфатазой с новой структурой.