ИЗМЕНЕНИЕ МОНОМЕРНЫХ И ОЛИГОМЕРНЫХ ФОРМ БЕЛКА ЯДРЫШКА В23/НУКЛЕОФОЗМИНА В КЛЕТКАХ НеЬа ПРИ АПОПТОЗЕ, ИНДУЦИРУЕМОМ ФАКТОРОМ НЕКРОЗА ОПУХ

摘要

Белок ядрышка В23/нуклеофозмин участвует в сборке прерибосом, а также является одним из ключевых белков ядра, обеспечивающих контроль клеточного ответа на апоптотические стимулы. Белок существует в виде двух изоформ, функционирующих в клетке как в виде мономеров, так и гомо- и гетероолигомеров. Впервые оценено состояние мономерных и олигомериых форм иуклеофошнна в клетках НеЬа, обработанных индукторами апоптоза: фактором некроза опухолей ("ШР-а), эметином, а также их смесью. Выявлено, что инкубация с ТЫР-а в течение 6 ч и с эметином (2 ч) не проводит к появлению апоптотических клеток в количестве, превышающем их количество в контроле, и не сказывается на состоянии мономериых и олигомериых форм белка. Увеличение времени инкубации с эметином до 6 ч незначительно увеличивало долю апоптотическнх клеток. Количество апоптотических клеток резко возрастало при 6-часовом воздействии смеси ТЫР-а и эметина, причем часть клеток флотировала в раствор и достигала терминальных стадий апоптоза. В апоптотических клетках обнаружен ряд структурных особенностей белка В23. В лизатах клеток, достигших терминальных стадий апоптоза, изменялось соотношение моно- и олигомерных форм белка В23, обусловленное уменьшением количества мономера, и появлялись две дополнительные (по сравнению с лизатами контрольных клеток) белковые полосы в зоне олигомеров с меньшей молекулярной массой. Олигомеры нуклеофозмина этой фракции апоптотических клеток обладали различной устойчивостью к нагреванию: термообработка, достаточная для полного распада олигомеров белка в контроле, приводила лишь к частичному распаду олигомеров в лизатах фракции клеток, достигших крайних степеней апоптоза, и появлению на электрофореграммах дополнительной белковой полосы в зоне мономеров. Таким образом, под действием апоптоз-индуцированиого каскада реакций происходит ие только описанный ранее протеолиз белка В23, но могут образовываться новые апоптоз-специфичные формы белка с иной структурной организацией и свойствами.