КОНСТРУИРОВАНИЕ КОМБИНАТОРНОЙ ИММУННОЙ КЛОНОТЕКИ ОДНОЦЕПОЧЕЧНЫХ АНТИТЕЛ ЧЕЛОВЕКА ПРОТИВ ОРТОПОКСВИРУСОВ И СЕЛЕКЦИЯ ИЗ НЕЕ АНТИТЕЛ К

摘要

Сконструирована комбинаторная иммунная клонотека одноцепочечных антител (оцАТ) человека на основе генов, кодирующих вариабельные домены тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов, клонированных из лимфоцитов четырех доноров, вакцинированных вирусом осповакцины (ВОВ). Размер клоно-теки составил 3 х 107 независимых клонов. После обогащения клонотеки клонами, продуцирующими оцАТ против рекомбинантного аналога поверхностного белка вируса натуральной оспы ргАЗОЬ, из нее получили панель антител, связывающих как ргАЗОЬ, так и ВОВ. Анализ вируснейтрализующей активности проводили для всех отобранных антител и показали, что два антитела способны нейтрализовать бляшкообразование ВОВ в монослое клеток Vero E6. Специфичность связывания этих антител подтверждена с помощью иммуноферментного и вестерн-блот-анализа. Для определенияаминокислотной последовательности нейтрализующих антител провели секвенирование копирующих их генов.