ВЫДЕЛЕНИЕ ГЕНОВ, ЭКСПРЕССИРУЮЩИХСЯ ПРЕИМУЩЕСТВЕННО НА РАННИХ ИЛИ ПОЗДНИХ СТАДИЯХ РАЗВИТИЯ ВОЛОКНА ХЛОПЧАТНИКА, МЕТОДОМ СУПРЕССИОННОЙ

摘要

Для идентификации генов, экспрессирующихся, в основном, на ранних или поздних стадиях развития волокна хлопчатника, сконструированы двеклонотеки волокон с использованием ПЦР-селек-тивного вычитания. кДНК из волокон, полученные на 10-й или 20-й день после начала цветения (ДПНЦ), представляют собой тестеры; общая кДНК (драйвер) получена из пула других тканей. Дифференциальный скрининг выявил в двух клонотеках 292 клона, экспрессирующихся, преимущественно, в ходе развития волокна. Как показал анализ последовательностей, 31 клон клонотеки из волокон, собранных на 10-й ДПНЦ, и 48 клонов, собранных на 20-й ДПНЦ, уникальны, а 13 клонов были общими для обеих клонотек. Для проверки дифференциального характера экспрессии и определения специфики накопления соответствующих мРНК использовали нозерн-гибридизацию. Преимущественная экспрессия именно в развивающихся волокнах хлопчатника подтверждена в случае всех отобранных клонов кДНК. В клонотеке волокон, собранных на 10-й ДПНЦ, обнаружено четыре гена: это предполагаемые гены белка, регулируемого гибберелинами, внутреннего белка тонопласта, белка плазматической мембраны и мембранного белка Gossypium hirsutum. Все эти гены активно экспрессируются на ранних стадиях развития волокна. Уровень экспрессии генов, выделенных при скрининге клонотеки волокон, собранных на 20-й ДПНЦ, в том числе - генов араби-ногалактанового белка и белка волокна из семейства 19 гликозилгидролаз, особенно высок. Максимальный уровень их транскрипции наблюдается при переключении программы развития от удлинения клетки к накоплению целлюлозы. Таким образом, вычитание кДНК по схеме "волокна против пяти других тканей" позволяет выделить две группы генов. Специфичная или, по крайней мере, преимущественная экспрессия этих генов в волокнах свидетельствует о том, что данные гены вовлечены в регуляторную сеть, контролирующую развитие волокна у хлопчатника.