卵胞の大きさおよび体外成熟培養時間がウシ卵母細胞の体外発生におよばす影響

摘要

ウシ卵母細胞を採取した卵胞の大きさとIVM培養時間の差異が、体外成熟（IVM）培養後の成熟率および体外受精（IVF）および体外発生培養（IVC）後の発生率におよほす影響を検討した。 卵胞の大きさは、大卵胞（直径：6－9mm）および小卵胞（直径：2－5mm）に分け、それぞれの卵胞から採取した卵胞液中のEstradiol-17β（E_2）およびProgesterone（P_4）濃度も測定した。 実験1では、卵胞の大きさおよびIVM培養時間が卵母細胞の成熟率におよぼす影響を検討した。 大卵胞および小卵胞から採取した卵母細胞を採取直後およびIVM培養18、20、22および24時間目に固定、染色して核相を判定した。 小卵胞から採取した卵母細胞と比較して大卵胞から採取した卵母細胞では、GerminalVesicle（GV期）の割合が有意（P＜0．05）に低く、またGerminalVesicle Break－Down（GVBD期）の割合が有意（P＜0．05）に高かった。 IVM培養18時間日では、大卵胞から採取した卵母細胞と比較して小卵胞から採取した卵母細胞がProphase（P期）の割合で有意（P＜0．05）に高く、MetaphaseⅡ（MⅡ期）の割合で有意（P＜0．05）に低かった。 MⅡ期に達した卵母細胞の割合は、IVM培着24時間目がIVM培養18時間目に対して有意（P＜0．05）に高かった。 IVM培養20、22および24時間IVM培養を行なった卵母細胞では、卵胞の大きさおよび各IVM培養時間の各核相到達率に有意差はなかった。 実験2では、卵胞の大きさおよびIVM培養時間が、卵母細胞のIVF/IVC後の発生率におよぼす影響を検討した。 大卵胞および小卵胞から採取した卵胞液中のEstradiol－17β（E_2）およびprogesterone（P_4）濃度をEnzyme Immunoassay法によって測定した。 また、大卵胞および小卵胞から採取した卵母細胞を20、22および24時間IVM培養した卵母細胞をそれぞれIVFした後、10日間IVCした。 ホルモン濃度の測定の結果、P_4濃度は大卵胞および小卵胞から採取した卵胞液中で、各々1．7±0．59pg/ml、1．6±0．83pg/mlと大きな差は認められなかったが、E_2濃度において、各々228．3±67．6pg/m l、24．1±1．8pg/mlと大卵胞が小卵胞に対して有意（P＜0．05）に高い値を示した。 IVM培養20時間では、2細胞期および8細胞期への発生率で、小卵胞から採取した卵母細胞に対して、大卵胞から採取した卵母細胞が、有意（P＜0．05）に高かった。 しかし胚盤胞以上への発生率に有意差はなかった。 IVM培養22時間および24時間では、卵胞の大きさに有意差はなかった。 小卵胞から採取した卵母細胞より、大卵胞から採取した卵母細胞のIVF/IVC後の8細胞期への分割率は、有意（P＜0．05）に高く、また胚盤胞および貯化胚盤胞への発生率においても高い傾向がみられたが、有意差はなからた。 本実験結果より、小卵胞から採取した卵母細胞は少なくとも20時間以上のIVM培養時間が必要であり、20－24時間のIVM培養時間の差異は、IVF/IVC後の発生率に影響しなかった。 大卵胞から採取した卵母細胞の8細胞期への分割率は、小卵胞から採取した卵母細胞より有意（P＜0．05）に高く、胚盤胞および膵化胚盤胞への発生率も高い傾向にあったが、有意差は認められなかった。