ИСКУССТВЕННЫЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ КАРБАРИЛА, СОЗДАННЫЕ НА ОСНОВЕ ОДНОЦЕПОЧЕЧНОГО ВАРИАБЕЛЬНОГО ФРАГМЕНТА (SCFV): ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ ИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С АНТИГЕНОМ

摘要

Карбарил - инсектицид (низкомолекулярное соединение), ингибирующий холинэстеразу насекомых. Присутствие остаточного количества карбарила в пище и окружающей среде наносит вред здоровью людей. Высокоспецифические scFv мини-антитела, с помощью которых можно было бы идентифицировать карбарил, пока не созданы. В представленной работе сконструировали ген, кодирующий антикарбариловые scFv мини-антитела. Предварительно были клонированы гены VL и VH, кодирующие вариабельные районы молекул иммуноглобулинов, из генома гибридных клеток (гибридом) мышей, секретирующих моноклональные антитела против карбарила. Далее эти гены были объединены между собой ПЦР методом сплайсинга перекрывающимися расширениями (SOE (splicing by overlap extension)-ПЦР) последовательностью, кодирующей гибкий олигопептидный линкер (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser) 3. Сконструированная после этого рекомбинантная плазмида (scFv-pET-26b) была экспрессирована в клетках E. coli BL21. Экспрессию рекомбинантного белка проверяли методом Ds-Na-ПААГ электрофореза и иммуноферментного анализа (ИФА). Построена компьютерная модель трехмерной структуры антикарбарил scFv мини-антитела, и путем молекулярного докинга была смоделирована структура комплекса карбарила с мини-антителом. При анализе модели установлено, что карбарил-связывающий участок образован следующими аминокислотными остатками: Ala51, Ser52, Ile51, Gly54, Ser56, Arg98 и Gly100. Дальнейшее изучение этой модели может помочь установлению механизма взаимодействия карбарила с его специфическими антителами. Кроме того, эта модель может служить целям in vitro повышения аффинности антител к карбарилу.