АПОПТОЗ НЕСТИМУЛИРОВАННЫХ ЛИМФОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА И РАЗРЫВЫ ДНК, ИНДУЦИРОВАННЫЕ ИНГИБИТОРОМ ТОПОИЗОМЕРАЗЫ II ЭТОПОЗИДОМ

摘要

С помощью метода ДНК-комет, электрофореза ДНК-экстрактов, цитофлуориметрии исследовали индукцию этопозидо.м VP-16 разрывов ДНК, их репарацию и апоптоз покоящихся лимфоцитов крови человека. Показали, что VP-16 (50-200 мкг/мл, инкубация в течение 3 или 24 ч) индуцирует апоптоз в нестимулироваи-ных лимфоцитах крови человека ш vitro. Этот вывод основывается на результатах морфологических исследований клеток, оценке доли гиподиплоидиых клеток и оценке межнуклеосомной деградации ДНК в лимфоцитах. Проявлению этих общепринятых признаков апоптоза предшествует формиро в а.мие разрывов ДНК под действием этопозида. Число однонитевых разрывов пропорционально изменялось с изменением концентрации VP-16; они были репарированы в течение 2-3 ч после удаления агента из инкубационной среды. Очевидно, однонитевые разрывы обусловлены гидроксилом в С4'-положении диметоксифенсшыюго кольца этопозида. Двунитевые разрывы сохраняются нерепарирован.чыми в течение 20 ч после смены инкубационной среды. Их число, так же как и доля клеток, имеющих апоптотическую морфологию ядра, не изменялось с изменением концентрации VP-16 и/или длительности инкубации клеток с агентом. Мы предполагаем, что цитотоксическое действие VP-16 на нестимулированных лимфоцитах опосредуется одной из изо-форм тспоизомеразы 11 - топоизомеразой I1-P, которая локализована в ядрышке и не связана с клеточным циклом.