Structural Insights into the Molecular Basis Responsible for the Effects of Immobilization on the Kinetic Parameters of Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase from Trypanosoma cruzi and Human

摘要

O desenvolvimento de metodos rapidos e eficazes para a identificacao de novas moleculas bioativas é fundamental para o processo de descoberta e planejamento de farmacos. A integracao de um sistema de cromatografia 1 iquida de alta eficiencia (CLAE), corn biorreatores como fase estacionaria (IMER) d uma estrategia atrativa e versatil para a triagem de colecoes de compostos visando a identificacao de novos agentes terapeuticos. Os parametros cineticos da enzima imobilizada gliceraldeido-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) de Trypanosoma cruzi e humana foram determinados (T cruzi: K_M~(G3P) = 0.50 mmol L~(-1);K_M~(NAD+)= 0.67 mmol L~(-1); humana:K_M~(G3P)=3.7 mmol L~(-1);K_M~(NAD+)=0.75 mmol L~(-1)) e comparados corn aqueles observados em solucao (T cruzi: K_M~(G3P) = 0.42 mmol L~(-1);K_M~(NAD+)=0.26 mmol L~(-1); humana:K_M~(G3P)-0.16 mmol L~(-1);K_M~(NAD+)=0.18 mmol L~(-1)). Os resultados indicaram uma diminuicao na afinidade das enzimas imobilizadas, entretanto, os elementos estruturais necessarios para o processo de reconhecimento molecular e atividade biologica permaneceram inalterados, aumentando a estabilidade das enzimas. Alem disso, a analise estrutural forneceu dados moleculares importantes envolvidos nos efeitos da imobilizacao sobre as interacoes entre ligante e receptor e, consequentemente, sobre a atividade enzimatica e parametros cineticos.