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【24h】

Apoptose na maturacao placentaria de vacas em diferentes estagios de gestacao: evidenciacao imuno-histoquimica e bioquimica

机译:妊娠不同阶段母牛胎盘成熟中的细胞凋亡:免疫组织化学和生化证据

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摘要

Apoptose tem um papel importante na manutencao da homeostase placentaria, e o desequilibrio desse processo pode comprometer a gestacao. 0 objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de apoptose em amostras de placenta de vacas em diferentesfases de gestacao. Amostras de placen-tomos de 15 vacas saudaveis com 4 [n=5), 6 (n=5) e 9 (n=5) meses de gestacao foram colhidas e processadas rotineiramente para a histologia, imuno-histoquimica e isolamento de DNA As laminas obtidas foram coradas em HE, ou submetidas à analise imuno-histoquimica das proteinas pro-apoptoticas caspase-3 e Bax, e da proteina anti-apoptotica Bcl-2. 0 DNAisolado foi submetido à eletroforese em gel de agarose para deteccao da fragmentacao internucleossomica do genoma. Os resultados de histomorfometria revelaram que as células apoptoticas aumentaram progressivamente com o avanco da gestacao. Confirmou-sea apoptose pela fragmentacao caracteristica do DNA genomico, visualizada pelo classico "padrao em escada" na eletroforese em gel de agarose. Adcionalmente, a imunoexpressao de caspase-3, Bax e Bcl-2 foram observadas em todas as amostras. Entretanto, a proteina caspase-3 apresentou marcacao mais intensa em todos os tempos gestacio-nais, quando comparada com a marcacao das proteinas Bcl-2 e Bax. Esses resultados confirmam e reforcam a importancia da apoptose na maturacao placentaria. Além disto, indicaque caspase-3, Bax e Bcl-2 estao envolvidas nos mecanismos de ativacao da apoptose pela via intrinseca mitocondrial ao longo da gestacao, contribuindo para o equilibrio fisiologico da celularidade e renovacao celular na placenta bovina.
机译:细胞凋亡在维持胎盘稳态中起着重要作用,并且该过程的失衡会损害妊娠。本研究的目的是评估在不同孕期的母牛胎盘样品中细胞凋亡的发生情况。收集了15头健康母牛在4 [n = 5],6(n = 5)和9(n = 5)个月妊娠时的安慰剂样品,并常规进行了组织学,免疫组织化学和DNA分离处理。将获得的载玻片在HE中染色,或对促凋亡蛋白caspase-3和Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2进行免疫组织化学分析。将分离的DNA进行琼脂糖凝胶电泳以检测基因组的核小体间片段化。组织形态计量学结果显示凋亡细胞随着妊娠的进行而逐渐增加。凋亡通过基因组DNA的特征性片段确认,通过琼脂糖凝胶电泳中的经典“梯形图”可见。另外,在所有样品中均观察到了caspase-3,Bax和Bcl-2的免疫表达。但是,与Bcl-2和Bax蛋白的标记相比,caspase-3蛋白在所有妊娠期均显示出更强烈的标记。这些结果证实并增强了细胞凋亡在胎盘成熟中的重要性。此外,这表明caspase-3,Bax和Bcl-2参与了怀孕期间内在线粒体途径的凋亡激活机制,有助于牛胎盘中细胞的生理平衡和细胞更新。

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