EVALUATION DE LA SENSIBILITÉ IN VITRO DE PLASMODIUM FALCIPARUM À LA CHLOROQUINE PAR LE DELI-MICROTEST DANS LA RÉGION DE DAKAR (SÉNÉGAL)

摘要

En 2000 et 2001, nous avons étudié la sensibilité in vitro de Plasmodiumfalciparum à la chloroquine à Pikine, région de Dakar en utilisant le DELI- microtest (Double-site Enzyme-linked Lactate dehydrogenase Immunosorbent assay). Cette méthode repose sur la détermination du taux de lactate déshydrogénase (LDH) de P. falciparum qui est proportionnelle à la croissance parasitaire. Les isolats étaient cultivés en microplaques de 96 puits en milieu RPMI-1640 supplémenté en hypoxan-thine et albumax en présence de concentrations croissantes de sulfate de chloroquine de 5,6 nM/L à 2870,8 nM/L. Les microplaques étaient incubées à 37℃ en cloche à bougie pendant 48 heures puis congelées à -20℃. Le DELI-microtest était pratiqué sur les surnageants de culture hémolyses. La quantité de LDH libérée qui est proportionnelle à l'intensité de la croissance parasitaire est évaluée en densité optique. Le niveau de sensibilité de l'isolat était évalué en CI_(50) en considérant le seuil de sensibilité à la chloroquine à 100 nM/L. les moyennes géométriques de CI_(50) observées étaient de 41 nM/L (4,8 nM/L à 1435 nM/L) et 135 nM/L (8,63 nM/L à 2153 nM/L) en 2000 et 2001 respectivement. Cette étude montre que le niveau de résistance in vitro de P. falciparum à la chloroquine à Pikine a augmenté considérablement passant de 30 % en 2000 à 59,6 % en 2001. Ces résultats indiquent l'importance d'une surveillance in vitro de la résistance aux antipaludiques pour anticiper la survenue d'échecs thérapeutiques et modifier à temps les recommandations de santé publique.%This study was carried out between 2000 and 2001 in the peri-urban Pikine area located 15 km from Dakar, Senegal. The purpose was to evaluate the in vitro sensitivity of Plasmodium falciparum isolates to chloroquine, which was the recommended first-line drug for uncomplicated malaria treatment in Senegal. Testing was carried out using the double-site enzyme-linked lactate dehydrogenase immunosorbent (DELI) microtest. The DELI-microtest is an ELISA method using 2 monoclonal antibodies against 2 antigenic sites of the specific P. falciparum lactate dehydrogenase (LDH) enzyme. The level of LDH is proportional to the extent of parasite growth. P. falciparum isolates were cultured in 96-well plates in RPMI 1640 medium supplemented with hypoxanthine and albumax, in the presence of chloroquine sulphate concentrations ranging from 5.6 nM/L to 2870.8 nM/L. Plates were incubated in a candle-jar for 48 hours at 37℃ and frozen at -20℃. The DELI-microtest was performed using the supernatant of hemolysed cultures. The amount of pLDH released was evaluated based on optical density. The chloroquine sensitivity of the isolate was estimated based on IC_(50) with a cut-off of < 100 nM/L. Geometric mean IC_(50) values were 41 nM/L (range: 4.8 nM/L to 1435 nM/L) and 135 nM/L (range: 8.63 nM/L to 2153 nM/L) in 2000 and 2001 respectively. This study demonstrated a dramatic increase in the in vitro resistance of P. falciparum to chloroquine from 30 % in 2000 to 59.6 % in 2001. These findings suggest that regular surveillance of in vitro drug resistance is important to predict in vivo drug resistance and allow timely changes in public health recommendations.