ナノフローLC Prominence nanoの特長とプロテオーム解析への応用

摘要

極微量成分の高感度検出を目的として，質量分析計のフロントエンドLCとしてナノフローLCが広く用いrnられている。特にライフサイエンスにおけるプロテオーム解析では複雑なマトリックスからの極微量成分の検rn出のみならず，試料間でのディファレンシャル解析のために保持時間の再現性も要求される。また，このようrnな解析では多数のサンプルの分析が要求されることから，長期に渡る安定性や簡便な操作性も必要である。こrnの要求に応えるために，ナノ流量域での安定送液のみでなく，システムとしての安定性や優れた操作性を向上rnさせたナノフローLC Prominence nanoを開発した。本システムでは独自の，リフラツタスフローコントローrnル（RFC）システムと称するフィードバック制御により600nL/minにおいても0.2%RSD以下の優れたピークrn保持時間再現性を実現した。また，高感度化のためのトラップ濃縮注人用流路切換バルブとして開発したFCV rnnanoでは流路詰まりを防止するために磨耗粉の低減を実現した。さらに，これらシステムの簡便な操作を実rn現するためのソフトウエアNano-Assistも同時に開発した。rn本稿ではこのProminence nanoシステムの優れた基本性能を紹介する。また，MALDI MSでのスポッティングの自動化を可能にするAccuSpot~?および四重極イオントラップ飛行時間型質量分析計AHMA~?租Resonancernと組み合わせたトータルシステムによる極微量ペプチドの検出例として，優れた精度でヒト血清中10血101のrnデスアシルグレリンの分析が可能であることを紹介する。%A Nanoflow LC system has been widely accepted as a front-end LC for a liquid chromatograph mass spectrometer in order to detect a trace amount of components with high sensitivity. Especially in the proteomic research, the desire has been increasing not only for determination of a very low amount of targets in a complex sample but for accurate reproducibility of retention time for differential analysis. Long-term stability and usability of the system are also of the essence since a large number of samples need to be analyzed in the proteomic research. To meet these requirements, our newly developed nanoflow LC Prominence nano offers enhanced stability and usability and also provides superior flow rate precision in the nanoflow rate range. The system equipped with a unique feed-back control mechanism called Reflux Flow Control (RFC) system achieved unsurpassed reproducibility of peak retention time of 0.2%RSD or less at a flow rate of 600 nL/min.rnFCV nano, which was developed as a switching valve for trapping and concentrating injection mechanism, reduces particles that are produced from switching friction and are responsible for clogging in the flow channel. Nano-Assist software was also developed to improve ease of operation of the system.rnThe present paper describes outstanding basic performances of the Prominence nano system. Combined with a MALDI spotting device AccuSpot~? and a MALDI Quadrupole Ion Trap TOFMS AXIMA~? Resonance, the Prominence nano enables us to identify a small amount of free peptide in human blood serum. As an example, identification of as low as 10 fmol of desacyl-ghrelin, as non-activated form of ghrelin, with a high degree of reliability is demonstrated.