磁気マーカーの交流磁化率測定を用いた液相免疫検査法の開発

摘要

磁気マーカーの溶液中でのブラウン緩和特性を用いた液相免疫検査法を開発した。結合マーカーと未結合マーカーは異なるブラウン緩和特性を示し、この違いは交流磁化率特性の違いとして測定できる。このため、交流磁化率測定により両者を磁化的に識別することにより、液相免疫検査を行った。最初に磁化率測定の際の印加磁界の最適化等の測定システムの高感度化を行い、70ngの磁気マーカーの検出を可能とした。個数に換算すれば1.6×10~7個となる。次に、ポリマー粒子に固定した抗原（ビオチン）の検出を行った。アピジンを付加した磁気マーカーを用い、抗原一抗体反応により磁気マーカーをポリマー粒子に結合させた。印加磁界2.5mT、サンプル溶液60μl、反応磁界60分の条件でビオチンを固定化したポリマー粒子の検出を行い、3,800個までのポリマー粒子を検出した。ポリマー粒子には3,000個のビオチンが固定化されており、ビオチンの濃度に換算すれば0．28fmol/mlとなり、高感度検出が可能であることを示した。%Liquid phase immunoassay using Brownian relaxation of magnetic markers is shown. In this method, difference in the Brownian relaxation time between bound and free markers is used, which can be measured as the difference in the ac susceptibility between them. First, we show the measurement system for the immunoassay. Optimum value of an excitation field, which depends on the magnetic properties of the marker, was set to be 2.5 mT in the present experiment. In this case, we could detect 70 ng of the magnetic markers, which corresponds to the number of 1.6×10~7. Next, we detected biotins that were fixed on the surface of polymer beads. Magnetic markers that were coated with avidin were bound to the polymer beads through the binding reaction between avidin and biotin. Minimum detectable number of the polymer beads was 3.800 for 60 μl sample. Since 3,000 biotins were fixed on the single bead, this result corresponds to the detection of biotins with concentration as small as 0.28 fmol/ml.