Visual detection of donkey-derived ingredients by loop-mediated isothermal amplification with 4-(2-pyridylazo)-resorcinol sodium salt

摘要

The objective of this study was to develop a reliable visual method for rapid detection of donkey components to protect consumers from commercial adulteration. Six specific loop-mediated isothermal amplification (LAMP) primers targeted at donkey mitochondrial cytochrome b gene were designed, the mitochondrial DNA extraction simplified, the LAMP reaction system optimized, the specificity verified with mitochondrial DNA of horse, pork, cow, sheep, chicken, duck, and rabbit as negative controls, the detection limit determined with gradient dilution of adulterated meat with donkey meat, and the visual LAMP method for detection of donkey-derived ingredient in common meat products established. The results showed that the modified mitochondrial DNA extraction method was simple and repeatable, and the visual LAMP method with 4-(2-pyridylazo)-resorcinol sodium salt as indicator can accurately and specifically detect the donkey meat in common meat products, 1% detection limit. The study provided a promising solution for facilitating the surveillance of the commercial adulteration in processed meat. RESUMEN El presente estudio se propuso desarrollar un método visual confiable que permitiera detectar rápidamente la presencia de componentes de carne de burro en carnes procesadas para proteger a los consumidores de la adulteración de alimentos comerciales. Con este fin se dise?aron seis cebadores LAMP específicos dirigidos al gen del citocromo B mitocondrial del burro, se simplificó la extracción de ADN mitocondrial, se optimizó el sistema de reacción LAMP y se verificó su especificidad con ADN mitocondrial de caballo, cerdo, vaca, oveja, pollo, pato y conejo que operaron como controles negativos. Además, el límite de detección se fijó mediante la dilución en gradiente de carne adulterada con carne de burro, estableciéndose el método visual LAMP para revelar la presencia de ingredientes derivados de carne de burro en productos cárnicos comunes. Los resultados obtenidos mostraron que el método de extracción de ADN mitocondrial modificado era simple y repetible, y que el método visual LAMP con sal sódica de 4-(2-piridilazo)-resorcinol como indicador sirve para detectar de manera precisa y específica la presencia de carne de burro en productos cárnicos comunes, con un límite de detección del 1%. El estudio proporcionó una solución prometedora para facilitar la vigilancia de la adulteración comercial de carnes procesadas.