苍附导痰汤通过miR-29a靶向调节PGC-1α表达对大鼠卵巢颗粒细胞代谢的影响

摘要

目的 探讨苍附导痰汤通过miR-29a及其靶向PGC-1α信号通路对多囊卵巢综合征(Polycystic Ovary Syndrome,PCOS)胰岛素抵抗大鼠卵巢颗粒细胞能量代谢相关基因表达的影响.方法 利用TargetScan4.0及Pictar程序预测miR-29a可能的靶基因为PGC-1α,体外培养Sprague-Dawley (SD)大鼠卵巢颗粒细胞(Ovarian granulosa cells,OGCs),用脂质体Lipofectamine2000转染miR-29a mimic进入OGCs,转染48h后分别用实时荧光定量PCR和Western blotting检测PGC-1α的mRNA和蛋白的表达变化;构建含野生型及其突变型PGC-1α3端非翻译区(UTR)双荧光素酶报告基因(DLR)表达系统(pMIR-PGC-1α-3UTR)的pEGFP质粒,将细胞分为正常组,空载体组,转染miR-29a组,PGC-1α3组,PGC-1α3突变组,分别转染至大鼠胰岛素抵抗细胞模型OGCs中,双萤光素酶报告基因系统检测各组萤光素酶活性变化,并采用RT-PCR确定PGC-1α、NRF-1、ERRα的mRNA表达量.结果 OGCs转染miR-29a mimic 48h后,PGC-1的mRNA和蛋白的水平均下调,与正常组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).双萤光素酶报告基因系统显示,转染miR-29a组可特异抑制带有PGC-1α的3UTR报告基因表达(P＜0.05),转染组PGC-1α、NRF-1、ERRα的mRNA表达量表达下降,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05);苍附导痰汤组可逆转转染miR-29a造成的PGC-1α、NRF-1、ERRα的mRNA表达量表达下降,与转染miR-29a组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 经验证PGC-1α是miR-29a的靶基因,在OGCs中过表达miR-29a能特异抑制带有PGC-1α的3UTR报告基因表达;苍附导痰汤通过miR-29a靶向PGC-1α信号通路改善PCOS胰岛素抵抗大鼠卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗,其机制可能是苍附导痰汤通过抑制miR-29a靶向结合PGC-1α的3UTR,促进PGC-1α及其下游的NRF-1、ERRα的mRNA表达量,促进线粒体进行生物合成、葡萄糖的利用、脂肪酸氧化来实现的.