外源性gFGF-2对大鼠骨髓内皮祖细胞体外生物学活性的影响研究

摘要

目的 观察外源性糖化碱性成纤维细胞生长因子-2(glycated fibroblast growth factor-2,gFGF-2)对大鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量及体外生物学活性的影响.方法 将10 μg/ml FGF-2同250 mmol/L浓度的D-果糖于37°C共同培养48 h制备gFGF-2,用蛋白指纹图谱分析仪检测其糖化情况.密度梯度离心法获取大鼠骨髓单个核细胞,培养4 d后,分组分别用FGF-2(150μ/ml)、gFGF-2(150μg/ml)继续干预培养3 d.用免疫组织化学和免疫荧光染色作CD34、CD133、VEGFR-2、ac-LDL和UEA-1检测来鉴定EPC.胰酶消化培养7 d的贴壁细胞,将细胞分别同FGF-2和gFGF-2于37°C下培养72 h,用血管生成试剂盒检测其能力.收集培养7 d的细胞,贴壁细胞作EPCs附能力测定;用改良的Boyden小室作EPCs迁移能力测定;MTT法测定EPCs增殖能力;用放射性免疫法测定细胞的培养液GM-CSF,EPO和IL-8的含量.结果 经蛋白指纹图谱分析鉴定FGF-2成功糖化成gFGF-2.EPCs体外功能测定表明gFGF-2组骨髓EPCs比FGF-2组明显的黏附能力降低(P<0.05),迁移能力降低(P<0.01),增殖能力减弱(P<0.05),成血管能力降低(P<0.01);EPC分泌的EPO(P<0.05)、GM-CSF(P<0.01)和IL-8(P<0.01)比对照组都减少(P<0.01).结论 EPC在gFGF-2的作用下数量减少且体外生物学活性降低,并且血管新生能力也减弱,推断gFGF-2可能是糖尿病患者体内血管新生功能降低的原因之一.