СПЕКТРАЛЬНО-КИНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРЫ И ДИНАМИКИ ТИАМИНКИНАЗЫ ГОЛОВНОГО МОЗГА СВИНЬИ

摘要

С использованием стационарной флуориметрии изучено влияние субстратов (тиамин, Mg?АТР ), кофакторов (Mg2+, Mn2+, Ca2+) и эффекторов (фосфорные эфиры тиамина, пируват, фосфоенолпируват, этиловый эфир пирувата) на структуру и динамику тиаминкиназы (КФ 2.7.6.2) головного мозга свиньи. Показано, что связывание лигандов с тиаминкиназой сопровождается заметным тушением её триптофановой флуоресценции. Анализ полученных результатов позволил установить, что тиамин и АТР связываются, соответственно, пиримидиновым и адениновым циклами в гидрофобной области молекулы фермента. Пируват имеет два центра связывания: ингибирующий (относительно гидрофобный) и активирующий (гидрофильный). Последний находится в непосредственной близости с центром связывания тиамина и обеспечивает взаимодействие карбонильной группы пирувата с субстратом. Ионы двухвалентных металлов увеличивают сродство субстратов и эффекторов к белку, способствуя одновременно повышению гидрофобности его активного центра.