Padr?o de integra??o de pAN7-1 em mutantes de Magnaporthe grisea com patogenicidade alterada em arroz

摘要

Ensaios foram conduzidos para verificar a presen?a, o número de cópias e de sítios de integra??o de pAN7-1 no genoma de mutantes de M. grisea I-22 com patogenicidade alterada em arroz. Foram analisados T41, T93, T251 (gerados por mutagênese REMI) e T108 (oriundo de mutagênese convencional), os quais exibiram diferentes fenótipos mutantes. O DNA total desses mutantes foi submetido à rea??o em cadeia de polimerase (PCR) e às análises de hibridiza??o com o vetor (Southern blot). A presen?a de pAN7-1 no genoma de todos os mutantes foi confirmada por PCR. Segundo as análises de Southern blot, T41 exibiu duas integra??es do vetor, ambas na forma de cópia única. No genoma de T93 também foram detectados dois sítios de inser??o de pAN7-1, um dos quais envolvendo múltiplas cópias do vetor. Os resultados indicaram a presen?a de apenas uma cópia do vetor em um único sítio nos genomas de T108 e T251. O padr?o de integra??o em T251 foi o único a sugerir a ocorrência de evento REMI. As diferen?as quanto ao tamanho dos fragmentos com homologia a pAN7-1 refletiram a possível aleatoriedade dos eventos de integra??o no genoma de M. grisea. Os resultados evidenciaram o potencial de REMI para a mutagênese insercional de M. grisea, quando conduzida com pAN7-1 e HindIII