Diagn贸stico serol贸gico del VIH-1 en muestras de sangre seca en papel de filtro por el sistema DAVIH Dot VIH-1

摘要

Se evaluaron muestras de sangre seca en papel de filtro por el sistema DAVIH Dot VIH-1 de Laboratorios DAVIH (La Habana, Cuba). Las muestras utilizadas, 103 positivas y 105 negativas, estaban confirmadas de forma previa por DAVIH Blot de Laboratorios DAVIH. Para utilizar la sangre seca en papel de filtro, se realizaron modificaciones al procedimiento original en cuanto a los tiempos de incubación de las muestras y conjugado, y la agitación en ambas etapas. Se obtuvieron resultados de sensibilidad y especificidad relativas de 100 y 99,05 %, respectivamente. Descriptores DeCS: SERODIAGNOSTICO DEL SIDA/métodos. El diagnóstico de la infección por VIH-1 lleva implícito la realización de varios sistemas de pesquisaje en la red de diagnóstico nacional, así como la confirmación en el caso de las muestras que resulten reactivas, para lo cual se hace necesario el envío de éstas a un laboratorio de referencia. En ocasiones se dificulta el traslado de dichas muestras, sobre todo si no se garantizan una temperatura adecuada y la seguridad biológica.1 En el caso de lugares aislados o laboratorios rurales donde en ocasiones no se cuenta con fluido eléctrico para mantener las muestras a la temperatura establecida, es factible el empleo de la sangre seca en papel de filtro, que no está condicionada a estos parámetros.2 El empleo de sangre seca en papel de filtro se ha extendido rápidamente en el diagnóstico serológico de varias enfermedades3-5 dadas las facilidades que posee en cuanto a traslado, conservación y manipulación de las muestras.6 Este método tiene más aceptación que las extracciones convencionales de sangre. La colecta de sangre total en papel de filtro para los ensayos de anticuerpos, tiene sólo ventajas sobre el uso de muestras de suero: los requerimientos de equipos son mínimos, las lancetas estériles son baratas y el papel de filtro sustituye a las jeringas, tubos, centrífugas y refri-geradores que se necesitan para las muestras de suero.7 La posibilidad de contar con ensayos rápidos y simples como el DAVIH Dot VIH-1 (Laboratorios DAVIH, La Habana, Cuba), es una ventaja en estos sitios apartados,8 por lo que resulta práctico modificar el procedimiento de esta técnica con el objetivo de introducir esta forma de procesamiento de las muestras. Nuestro trabajo describe la evaluación del DAVIH Dot VIH-1 con la utilización de muestras de sangre seca en papel de filtro. Muestras La evaluación se realizó con 208 muestras, 103 de las cuales fueron previamente confirmadas como positivas por Western blot (DAVIH Blot, Laboratorios DAVIH, La Habana, Cuba) y clasificadas en los grupos II a IV, según el Centro para el Control de las Enfermedades (CDC) de Atlanta, en los Estados Unidos.9 Las otras 105 muestras resultaron ser negativas al VIH-1 por el mismo sistema confirmatorio. Modificaciones al procedimiento original Para este estudio se utilizó el estuche de pesquisaje DAVIH Dot VIH-1 para la detección de anticuerpos al VIH-1. Se poncharon 5 discos de 5 mm de diámetro de cada muestra en papel de filtro (Whatman 3), equivalentes a 100 mL de suero o plasma10 del procedimiento original, se colocaron directamente en una canal de la bandeja suministrada por el estuche, junto a la tira de nitrocelulosa en diluente de la muestra. A diferencia de los 30 min de incubación sin agitación del procedimiento original, las muestras y las tiras se incubaron por 1 h a temperatura ambiente y con agitación. Esta misma modificación se aplicó a la etapa del conjugado. Se prosiguió con el procedimiento descrito por los fabricantes.11 Las 103 muestras positivas por Western blot fueron reactivas por el sistema DAVIH Dot VIH-1 mientras que de las 105 muestras negativas estudiadas, 104 fueron identificadas de forma correcta, lo que significa que hubo 1 falso positivo, por lo que los valores de sensibilidad y especificidad relativos12 fueron del 100 y 99,05 %, respectivamente. Resultados similares fueron reportados por otros autores.2 Durante la evaluación, el DAVIH Dot VIH-1 presentó mejor sensibilidad que especificidad, como era de esperar en un sistema de pesquisaje donde es preferible una mayor sensibilidad con el fin de evitar falsos negativos. Por el contrario, los sistemas confirmatorios deben tener mejor especificidad con el fin de evitar falsos positivos.13