Brza i jednostavna metoda izolacije proteina prisutnih u biolo?kim otopinama u maloj i velikoj koncentraciji pomo?u ionsko-izmjenjiva?ke kromatografije potiskivanja komponenata uzorka

摘要

Kromatografija potiskivanja komponenata uzorka (engl. sample displacement chromatography - SDC) na obrnutoj fazi pomo?u ionskih izmjenjiva?a prvi se put spominje krajem 1980-tih godina. Koristila se za preparativno frakcioniranje sintetskih peptida, a nakon toga i za frakcioniranje proteina, naj?e??e metodom ionske izmjene. Metoda SDC se u novije vrijeme uspje?no primjenjuje za koncentriranje proteina prisutnih u kompleksnim biolo?kim otopinama u srednjoj i maloj koncentraciji, i to pomo?u monolitskih nosa?a ili standardnih kromatografskih stupaca. Uporabom vodenih otopina kao mobilne faze i kromatografskom separacijom u blagim uvjetima proteini se mogu izolirati i u nativnom, biolo?ki aktivnom obliku. Svrha je ovoga rada bila upotrijebiti metodu SDC na nosa?ima velikog kapaciteta za izdvajanje proteina iz kompleksnih biolo?kih teku?ina, poput ljudske plazme. Spajanjem triju ili vi?e identi?nih kromatografskih kolona u seriju tijekom nano?enja uzorka, a odvajanjem za vrijeme elucije vezanih proteina, omogu?eno je jednostavno i brzo koncentriranje i razdvajanje komponenata uzorka, uklanjanje ne?isto?a te koncentriranje proteina prisutnih u uzorku u tragovima. Frakcioniranjem humane plazme dobivena je koncentrirana otopina serum albumina, odvojena od proteina zastupljenih u plazmi u srednjim i malim koncentracijama. Velik broj izdvojenih proteina identificiran je pomo?u masene spektrometrije (ESI-MS/MS i MALDI-TOF/TOF-MS). U radu se raspravlja i o primjeni ovih stabilnih kolona, koje se mogu dezinficirati otopinom 1 M natrijevog hidroksida, za daljnju primjenu metode SDC u biotehnologiji i prehrambenoj tehnologiji.