Valida??o comparativa utilizando PCR quantitativo em tempo real (qPCR) e PCR convencional de sêmen bovino centrifugado em gradiente de densidade contínuo.

摘要

O objetivo do presente estudo foi determinar o enriquecimento de espermatozoides portadores do cromossomo X após a centrifuga??o em gradiente de densidade contínuo de Percoll ou OptiPrep, utilizando rea??o em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) do DNA do espermatozoide e dos embri?es bovinos produzidos in vitro resultantes pela PCR convencional. Espermatozoides descongelado foram depositados em gradientes de densidade e os tubos foram centrifugados. Os sobrenadantes foram gentilmente aspirados e os espermatozoides recuperados do fundo dos tubos. As taxas de clivagem e de blastocisto foram determinadas pela produ??o in vitro de embri?es e a PCR foi realizada para a identifica??o genética do sexo dos embri?es. Verificou-se diferen?a na taxa de blastocistos entre os grupos Percoll e OptiPrep (P<0,05). A porcentagem de embri?es de fêmeas nos grupos Percoll e OptiPrep foi de 62,0% e 47,1%, respectivamente. Estes resultados foram confirmados pela qPCR do DNA de espermatozoides e uma subestima??o foi observada no grupo do gradiente de densidade de Percoll. Foi possível a sexagem de espermatozoides utilizando uma metodologia simples.