CLONAGE, SEQUENCAGE ET EXPRESSION DE L'ARNm CD3 γ/δ CHEZ PLEURODELES WALTL MICHAH. (AMPHIBIEN URODELE)

摘要

Le complexe CD3 est un composant essentiel du récepteur de la cellule T (TCR) impliqué dans sa maturation et dans son activation. Ce TCR a été identifié chez les vertébrés cartilagineux et osseux et les différentes études où les ADNc codant les chaînes du complexe CD3 ont été clonées et séquencées ont montré que ce complexe est constitué de plusieurs chaînes, toutes phosphorylables et capables de transduire des signaux. Ici, par une approche combinant RACE-PCR et oligonucléotides dégénérés, l'ADNc de l'une des chaînes du complexe CD3, CD3 γ/δ chez Pleurodeles waltl, a été clone et séquence. Cet ADNc est très homologue aux ADNc CD3 γ/δ de Xenopus laevis et du poulet. Les techniques de PCR semi-quantitative et de Northern-blot ont montré que le thymus présentait la plus forte expression en ARNm CD3 γ/δ suivi par la rate et le sang puis les intestins, ce qui confirme ainsi les spécificités tissulaire et lymphoïde de cet ARNm. Concernant l'ontogenèse des cellules T, la technique de RT-PCR semi-quantitative sur des stades embryonnaires et larvaires de Pleurodeles waltl a permis de montrer que l'expression de CD3 γ/δ démarre très tôt, dès le stade neurula (stade 15, 69 h après la ponte), augmente jusqu'au stade 33 (9 jours après la ponte), et reste stable au moins jusqu'au stade 42 (26-27 jours après la ponte). Comme l'ébauche thymique apparaît aux jours 6-7, la question de la formation et de la maturation de ces premières cellules T hors du thymus se pose.%CD3 complex is an essential component of the T-cell receptor (TCR) implicated in its maturation and activation. This TCR has been identified both in cartilaginous and bony vertebrates and, in different studies where the cDNA of the CD3 chains were cloned and sequenced, it appeared that CD3 complex is composed of several chains, all susceptible to phosphorylation and able to transduce signals. Here, by an approach combining RACE-PCR and degenerated oligonucleotides, the cDNA of a CD3 chain, CD3 ?/δ in Pleurodeles waltl, has been cloned and sequenced. This cDNA is very homologous to the CD3 γ/δ cDNAs of Xenopus laevis and chicken. Semi-quantitative RT-PCR and Northern-blotting technics have showed that the highest CD3 γ/δ mRNA expression was located in the thymus followed by spleen, blood and finally intestine therefore confirming the tissular and lymphoid specificities of this mRNA. Concerning the T cell-ontogeny, semi-quantitative RT-PCR applied to embryonic and larval stages permitted to show that CD3 γ/δ mRNA expression begins early at the neurula stage (stage 15, 69 h after laying), increases up to the stage 33 (9 days after laying) and afterwards remains stable at least until the stage 42 (26-27 days after laying). As the thymus primordium appears much later, the question of the formation and the maturation of the first T cells outside this organ is posed.