猪分离卵泡体外培养过程中Fas/FasL对颗粒细胞凋亡的作用

摘要

从猪卵巢分离完整有腔卵泡,按质量分为3类:健康卵泡、早期闭锁卵泡和晚期闭锁卵泡。猪分离卵泡经眼观检查后再行石蜡切片和HE染色,形态学研究表明,眼观检查对于健康卵泡的判定准确率为92%。取健康卵泡按直径大小分为3组:直径>5mm大卵泡组、3～5mm中卵泡组和<3mm小卵泡组。卵泡培养8、16和24h,以Annexin-VFITC/PI双染流式细胞仪检测壁层颗粒细胞凋亡情况,结果发现培养卵泡颗粒细胞的总凋亡率(早期凋亡+晚期凋亡)在8h时就已达到70%以上,至24h则为81.1%～94.6%。收集无血清培养0、8、16、24、48和72h的卵泡颗粒细胞,用realtimePCRSYBRgreen法检测各组卵泡颗粒细胞FasL和FasmRNA相对表达量。各级卵泡颗粒细胞中FasLmRNA水平随培养时间显著增加,培养至24h达最大值(P<0.05);小卵泡颗粒细胞FasLmRNA水平均高于大、中卵泡组。各级卵泡颗粒细胞FasmRNA相对表达量在培养前(0h)差异不显著,8h时显著增加,48h达最大值。该实验表明,所用无血清卵泡培养体系可有效诱导卵泡颗粒细胞的凋亡,细胞凋亡是卵泡闭锁的主要诱因,但卵泡闭锁程度可因卵泡大小而异,小卵泡似乎更容易发生闭锁。