樟芝多糖通过ROS-NOX2-NLRP1信号减轻皮层神经细胞炎症损伤的作用研究

摘要

目的 探讨樟芝多糖(ACP)通过抑制活性氧(ROS)-NADPH氧化酶2(NOX2)-NLRP1信号减轻皮层神经细胞(CNC)炎症损伤的作用和机制.方法 在研究ACP抗炎症反应作用的实验中,将CNC分为对照组、脂多糖(LPS)组、ACP 5 mg/L组、ACP 10 mg/L组和ACP 20 mg/L组.对照组为常规培养的细胞,无LPS和ACP干预;LPS组用0.1 mg/L LPS诱导细胞炎症反应;ACP各组分别使用终浓度为5、10、20 mg/L的ACP进行预处理6 h后,再用0.1 mg/L LPS诱导细胞炎症反应.在研究ACP通过抑制ROS发挥作用的机制研究中,将CNC分为LPS组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组和NAC+ACP组.LPS组用0.1 mg/L LPS诱导细胞炎症反应;NAC组用10 mM NAC预处理4 h后,再用0.1 mg/L LPS诱导细胞炎症反应;NAC+ACP组同时用10 mM NAC和20 mg/L ACP预处理4 h后,再用0.1 mg/L LPS诱导细胞炎症反应.采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,探针检测ROS的表达,Western blot法检测NOX2、NLRP1蛋白表达水平,ELISA法检测培养基中IL-1β、IL-6及TNF-α表达水平.结果 ACP预处理后,与LPS组比较,ACP 5 mg/L组、ACP 10 mg/L组和ACP 20 mg/L组细胞活力均明显上调,细胞凋亡率均下调,细胞中ROS的荧光光度值均降低,NOX2和NLRP1蛋白表达水平均降低,IL-1β、IL-6和TNF-α水平均降低(均P0.05).结论 ACP可以通过抑制ROS的表达来抑制NOX2-NLRP1的激活,从而减轻CNC的炎症反应.