青葙皂苷对过氧化氢诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及机制研究

摘要

目的 探讨青葙皂苷(CES)对H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用.方法 H9c2心肌细胞设置对照组、H2O2处理组、低剂量CES(25μg/mL)+H2O2处理组、中剂量CES(50μg/mL)+H2O2处理组、高剂量CES(100μg/mL)+H2O2处理组,噻唑蓝(MTT)检测CES对H2O2处理下的H9c2心肌细胞活力的影响,流式细胞术检测CES对H2O2诱导的心肌细胞凋亡及ROS产生的影响,并应用蛋白印记法(Western blot)检测凋亡信号通路相关蛋白的表达和核因子E2相关因子/抗氧化反应元素(Nrf2/ARE)信号通路相关蛋白表达变化.结果 MTT检测结果显示,与对照组比较,H2O2处理组H9c2心肌细胞活力降低[(75.82±2.72)％比(100.89±3.48)％,P<0.05],而经低、中、高剂量CES处理的细胞活力较H2O2组明显提升[(80.64±2.52)％、(85.68±3.77)％、(91.43±3.74)％比(75.82±2.72)％,P<0.05];流式细胞检测结果表明,与对照组比较,H2O2处理组H9c2心肌细胞凋亡率明显上升[(26.43±3.79)％比(2.71±1.12)％,P<0.05],而经低、中、高剂量CES处理的细胞凋亡率较H2O2处理组明显降低[(20.63±2.71)％、(15.07±1.12)％、(8.57±2.59)％比(26.43±3.79)％,P<0.05];检测凋亡相关蛋白发现,与H2O2处理组比较,经低、中、高剂量CES处理的H9c2心肌细胞B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)表达增高,Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-9剪切体(cleaved caspase-9)与含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3剪切体(cleaved caspase-3)表达降低;此外CES可降低H9c2心肌细胞内H2O2诱导的ROS产生量[(114.24±3.49)％、(109.05±2.48)％、(100.87±2.71)％比(122.91±3.86)％,P<0.05];CES可促进Nrf2核转位与血红素氧合酶1(HO-1)表达.结论 CES可能通过激活Nrf2/ARE信号通路抑制H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤.